The invention relates to a method for screening multifunctional beneficial microorganism, belonging to the field of plant protection. This method is aimed at the shortcoming that the beneficial microbes can not play a good role in the prevention and control of the 37 rhizosphere, and provide a method to select the saponins from the 37 soil, which can not only use the saponins secreted by 37 roots as nutrients, but also effectively antagonize the microorganisms of root rot pathogens. It first extracts the crude saponins of metabolites by 37 roots, and then uses the extracted crude saponins to make selective medium. Then, the selective culture medium is used to screen the microorganisms with saponins as nutrients. Finally, the microorganisms with antagonistic ability to root rot pathogens are screened by the confrontation culture method. The microbial strains screened by this method can not only be colonized well in 37 intersections, but also effectively antagonize the root rot pathogens, and finally realize the ecological prevention and control of 37 root rot diseases.
【技术实现步骤摘要】
一种筛选三七根际生防菌微生物的方法
本专利技术涉及植物保护领域中筛选多功能有益微生物的方法,具体涉及一种筛选既能在三七根际定殖又能拮抗三七根腐病菌的微生物的方法。
技术介绍
三七(Panaxnotoginseng(Burk.)F.H.Chen)属五加科人参属植物,是我国特有的名贵中药材,具有散瘀止血,消肿定痛的功能,对治疗心脑血管疾病具有显著疗效。云南是三七的主产地和原产地。然而,三七生长存在严重的连作障碍问题,且由于连年大面积单一种植,连作障碍已严重影响三七的产量和品质。目前生产中主要通过化学农药和轮作倒茬来缓解连作障碍,但农药的大量使用不但未明显地减轻连作障碍,反而导致严重的农药残留和重金属超标等药品安全问题。轮作能较好的克服连作障碍,但三七轮作期限一般需要20年以上。随着市场对三七需求量的不断增加和新垦地的减少,三七种植逐渐从道地产区向非道地产区转移,严重影响三七药材的道地性和原产地保护。因此,如何克服三七连作障碍,确保药品安全和缩短土地再植周期是实现三七产业可持续发展的关键。前期研究表明,三七连作障碍主要表现为根腐病发生严重。由于引起根腐病的主要是一些典型的土著型病原菌,化学杀菌剂和抗病品种的方法很难有效防治。利用有益微生物对根腐病菌对拮抗作用进行防治是最具潜力的防治方法。但众多研究表明,使用对病原菌具有抑制活性的生防菌效果不理想,主要是有益微生物难以在三七根际定殖,发挥拮抗功效。目前筛选生防菌的方法很多,主要采用的方法是体外抑菌圈法(方中达.植物病学研究方法.中国农业出版社,1998),具体步骤主要方式有:(1)将采集的土样(过80目筛)10g加 ...
【技术保护点】
一种筛选三七根际生防菌微生物的方法,具体包括如下步骤:(1)利用三七根系进行代谢物粗皂苷提取:将三七块根切成薄片,风干,磨成三七粉并过筛,称取三七粉100g,用甲醇超声提取,提取后离心分离,收集上清液,将上清液蒸发浓缩除去甲醇,然后冷冻干燥成粗皂苷,冷冻条件下保存备用;(2)利用粗皂苷制作选择性培养基:分别称取10g第(1)步制备的粗皂苷、3g NaNO3、1g KH2PO4、0.5g KCl、0.5g MgSO4·7H2O、0.01g FeSO4·7H2O和15~20g琼脂加入容器中溶解,混匀,调节pH值至7.0左右,进行灭菌处理,得到选择性培养基,将选择性培养基倒入灭菌培养皿中,冷却后待用;(3)利用选择性培养基筛选以皂苷为作为营养进行生长的微生物:采集三七根际土壤,除杂过筛,称取10g土壤加入装有无菌水的容器中于摇床上120~130rpm震荡20~30min,然后用无菌水进行10倍梯度系列稀释得到稀释液,吸取稀释液均匀涂布在第(2)步中装有选择性培养基的培养皿上,将涂匀的培养皿置于25~28℃下培养24h~72h,从中筛选出以皂苷作为营养进行生长的土壤微生物;(4)筛选对根腐病菌 ...
【技术特征摘要】
1.一种筛选三七根际生防菌微生物的方法,具体包括如下步骤:(1)利用三七根系进行代谢物粗皂苷提取:将三七块根切成薄片,风干,磨成三七粉并过筛,称取三七粉100g,用甲醇超声提取,提取后离心分离,收集上清液,将上清液蒸发浓缩除去甲醇,然后冷冻干燥成粗皂苷,冷冻条件下保存备用;(2)利用粗皂苷制作选择性培养基:分别称取10g第(1)步制备的粗皂苷、3gNaNO3、1gKH2PO4、0.5gKCl、0.5gMgSO4·7H2O、0.01gFeSO4·7H2O和15~20g琼脂加入容器中溶解,混匀,调节pH值至7.0左右,进行灭菌处理,得到选择性培养基,将选择性培养基倒入灭菌培养皿中,冷却后待用;(3)利用选择性培养基筛选以皂苷为作为营养进行生长的微生物:采集三七根际土壤,除杂过筛,称取10g土壤加入装有无菌水的容器中于摇床上120~130rpm震荡20~30min,然后用无菌水进行10倍梯度系列稀释得到稀释液,吸取稀释液均匀涂布在第(2)步中装有选择性培养基的培养皿上,将涂匀的培养皿置于25~28℃下培养24h~72h,从中筛选出以皂苷作为营养进行生长的土壤微生物;(4)筛选对根腐病菌具有拮抗能力的微生物:在培养皿中心位置的培养基上接种待测根腐病菌菌饼,然后在所述待测根腐病菌菌饼上接种3~4个第(3)步筛选出的土壤微生物,于25~28℃下培养5~7d后观察是否出现抑菌圈,根据抑菌圈大小筛选出对根腐病菌具有拮抗能力的微生物。2.根据权...
【专利技术属性】
技术研发人员:杨敏,罗丽芬,朱书生,袁也,黄惠川,刘屹湘,何霞红,朱有勇,
申请(专利权)人:云南农业大学,
类型:发明
国别省市:云南,53
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