本发明专利技术公开了华法林‑4‑O‑乙酰‑Arg和华法林‑4‑O‑乙酰‑Asp,公开了它们的制备方法,公开了它们的抗动脉血栓活性，公开了它们的抗静脉血栓活性，公开了它们降低体内维生素K的含量的活性，公开了它们降低体内凝血因子Ⅱ的含量的活性，公开了它们抑制血小板聚集的活性，因而本发明专利技术公开了它们在制备抗动脉血栓药物中的应用、在制备抗静脉血栓药物中的应用、在制备抑制血小板聚集药物中的应用、在制备维生素K拮抗剂中的应用和在制备凝血因子II拮抗剂中的应用。
Hua Falin 4 O acetyl Arg/Asp, its synthesis, activity and Application
The invention discloses 4 O warfarin acetyl Arg and warfarin 4 O acetyl Asp, discloses a method for preparing them, discloses their antithrombotic activity, discloses their anti thrombosis activity, discloses their lower levels of vitamin K activity, discloses they were decreased in vivo coagulation factor II activity, which inhibit platelet aggregation activity is disclosed, the invention discloses them in the preparation of anti artery thrombosis in drug application, in the preparation of anti drug application, venous thrombosis in preparing medicine inhibiting platelet aggregation, the application in the preparation of vitamin K the antagonist and the application in the preparation of coagulation factor II antagonist application.
【技术实现步骤摘要】
华法林-4-O-乙酰-Arg/Asp,其合成,活性和应用
本专利技术涉及华法林-4-O-乙酰-Arg和华法林-4-O-乙酰-Asp,涉及它们的制备方法，涉及它们的抗动脉血栓活性，涉及它们的抗静脉血栓活性，涉及它们降低体内维生素K的含量的作用，涉及它们降低体内凝血因子Ⅱ的含量的作用，涉及它们抑制血小板聚集的作用。因而本专利技术涉及它们在制备抗动脉血栓药物中的应用、在制备抗静脉血栓药物中的应用、在制备抑制血小板聚集药物中的应用、在制备维生素K拮抗剂中的应用和在制备凝血因子II拮抗剂中的应用。本专利技术属于生物医药领域。
技术介绍
动脉血栓和静脉血栓两种病症已成为当下发病率高和死亡率高的疾病。其中静脉血栓症主要包括深静脉血栓和肺栓塞。深静脉血栓和肺栓塞发病的患者数超过了心肌梗塞和中风发病的总人数，而且比乳腺癌和艾滋病所引起死亡的总人数高。由于动脉血栓症和静脉血栓症的发病率随年龄增长呈指数态增加，所以两种病症对我国这样的老龄化国家的人民健康的威胁尤其严重。如果把人口基数考虑进去，对我国国计民生的绝对负面影响尤其严重。于是，动脉血栓症与静脉血栓症的预防及治疗一直是医药领域所关注的重点。虽然华法林作为代表药物于1941年被用于临床实践，由于华法林的窗口窄，其剂量不足会有导致肺栓塞的可能，而剂量过量有导致致命性出血的风险。过去的50多年对华法林进行了大量结构改造，却都没有能够得到抗静脉血栓活性强的类似物。与传统的思维不同，专利技术人修饰华法林结构的目标是，将华法林转化为具有抗动脉血栓和抗静脉血栓双重活性的类似物。不过，也一直未能如愿。之后，又经过5年探索，专利技术人发现华法林的4位用乙酰Arg或乙酰Asp修饰，生成的华法林-4-O-乙酰-Arg和华法林-4-O-乙酰-Asp在体外抗血小板聚集模型上显示优秀的抗血小板聚集活性。显然，它们不是华法林的前药。华法林-4-O-乙酰-Arg和华法林-4-O-乙酰-Asp的抗动脉血栓活性比阿司匹林强167倍，抗静脉血栓活性比华法林强487倍。可见，本专利技术具有显著的技术进步。于是，专利技术人提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一个内容是提供华法林-4-O-乙酰-Arg和华法林-4-O-乙酰-Asp。本专利技术的第二个内容是提供华法林衍生物的合成方法，该方法包括：1.合成华法林-4-O-乙酸苄酯；2.合成华法林-4-O-乙酸；3.华法林-4-O-乙酸与Arg-OBzl或Asp(OBzl)-OBzl缩合；采用DCC(二环己基碳二亚胺)为缩合剂，采用HOBt(1-羟基苯并三氮唑)为催化剂的液相缩合的方法；4.合成华法林-4-O-乙酰-Arg和华法林-4-O-乙酰-Asp；本专利技术第三个内容是评价华法林-4-O-乙酰-Arg和华法林-4-O-乙酰-Asp的抗动脉血栓作用。本专利技术第四个内容是评价华法林-4-O-乙酰-Arg和华法林-4-O-乙酰-Asp的抗静脉血栓作用。本专利技术第五个内容是评价华法林-4-O-乙酰-Arg和华法林-4-O-乙酰-Asp抑制由血小板活化因子(PAF)、凝血酶(TH)及二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板聚集的作用。本专利技术第六个内容是评价华法林-4-O-乙酰-Arg和华法林-4-O-乙酰-Asp降低体内维生素K含量的作用。本专利技术第七个内容是评价华法林-4-O-乙酰-Arg和华法林-4-O-乙酰-Asp降低体内凝血因子Ⅱ含量的作用。附图说明图1华法林-4-O-乙酰-Arg或华法林-4-O-乙酰-Asp的合成路线.(i)溴-2-乙酸苄酯,丙酮,K2CO3,45℃；(ii)CH3OH,Pd/C,H2；(iii)DCC,HOBt,NMM,四氢呋喃；(iv)CH3OH,Pd/C,H2.图2华法林-4-O-乙酰-Arg或华法林-4-O-乙酰-Asp的抗动脉血栓活性，n＝10；图3华法林-4-O-乙酰-Arg或华法林-4-O-乙酰-Asp抗静脉血栓活性，n＝10；图4华法林-4-O-乙酰-Arg或华法林-4-O-乙酰-Asp对大鼠体内维生素K的含量的影响，n＝5；图5华法林-4-O-乙酰-Arg或华法林-4-O-乙酰-Asp对大鼠体内FⅡ含量的影响，n＝5；具体实施方式为了进一步阐述本专利技术，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本专利技术进行具体描述，不应当理解为对本专利技术的限制。实施例1制备华法林-4-O-乙酸苄酯将3.31g(10.00mmol)华法林置于100mL茄瓶中，加入约40mL丙酮，未能将其完全溶解，45℃油浴加热搅拌至华法林溶解，加入1.73mL(11.00mmol)溴-2-乙酸苄酯，继续于45℃油浴下进行反应，约1h后发现有白色固体附于瓶壁上。反应48h后，薄层层析(TLC，石油醚/乙酸乙酯＝2:1)监测反应进程，华法林消失，将反应产生的无色固体滤去，减压除去丙酮，得到淡黄色油状物，通过硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝8:1)，得到3.02g(65％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):457[M+H]+；1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ/ppm＝7.89(dd,J1＝3.0Hz,J2＝9.0Hz,1H),7.63(dt,J1＝3.0Hz,J2＝9.0Hz,1H),7.43～7.31(m,9H),7.24(t,J＝9.0Hz,2H),7.15(tt,J＝9.0Hz,1H),5.26(s,2H),5.61(s,1H),5.02(d,J＝15.0Hz,1H),4.85(d,J＝15.0Hz,1H),4.97(t,J＝9.0Hz,1H),3.45(dq,J1＝9.0Hz,J2＝18.0Hz,2H),2.11(s,3H)。实施例2制备华法林-4-O-乙酸将2.26g(4.95mmol)华法林-4-O-乙酸苄酯溶于20mL甲醇中，加入220mg钯碳(Pd/C)，搅拌下于水泵中抽去空气，通入氢气，如此操作重复进行3次，通入氢气室温下搅拌10h。TLC监测反应完全，过滤除去Pd/C，滤液减压浓缩除去溶剂，残留物用石油醚固化，无水乙醚进行磨洗，得到1.72g(93％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):367[M+H]+；1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):δ/ppm＝12.86(s,1H),7.90(d,J＝6.0Hz,1H),7.63(t,J＝6.0Hz,1H),7.43～7.34(m,4H),7.27(t,J＝9.0Hz,2H),7.17(t,J＝9.0Hz,1H),4.99(t,J＝9.0Hz,1H),4.75(q,J1＝15.0Hz,J2＝30.0Hz,2H),3.54～3.47(m,2H),2.14(s,3H)。实施例3制备华法林-4-O-乙酰-Arg(NO2)-OBzl将2.03g(5.55mmol)华法林-4-O-乙酸加入到100mL茄瓶中用30mL干燥四氢呋喃将其溶解，于冰浴(0℃)下加入0.74g(5.48mmol)HOBt及1.36g(6.60mmol)DCC，活化45min。有大量二环己基脲(DCU)析出。将2.38g(5.48mmol)Tos·Arg(NO2)-OBzl溶解于30mL四氢呋喃中，将其于冰浴下加入反应液中，用N-甲基吗啉(NMM)调节pH值到8～9，在室温下搅拌反应8h后TLC(二氯甲烷/甲醇本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种华法林‑4‑O‑乙酰‑Arg和华法林‑4‑O‑乙酰‑Asp，结构式如下
【技术特征摘要】
1.一种华法林-4-O-乙酰-Arg和华法林-4-O-乙酰-Asp，结构式如下2.权利要求1的华法林-4-O-乙酰-Arg和华法林-4-O-乙酰-Asp的制备方法，该方法包括：(1)合成华法林-4-O-乙酸苄酯；(2)合成华法林-4-O-乙酸；(3)华法林-4-O-乙酸与Arg-OBzl或Asp(OBzl)-OBzl缩合，采用DCC为缩合剂，采用HOBt为催化剂的液相缩合的方法；(4)合成华法林-4-O-乙酰-Arg或华法林-4-O-乙酰-Asp。3.权利要求1的华法林-4-O-乙酰-A...
【专利技术属性】
技术研发人员：彭师奇，赵明，吴建辉，王玉记，张薪，
申请(专利权)人：首都医科大学，
类型：发明
国别省市：北京,11
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