The invention discloses a LAMP primer set, a reagent box and a detection method for detecting pine wood nematode. The invention firstly by SYG conservative within species of pine wood nematode 2 gene as the target gene, and screened a group of design of pine wood nematode high specificity LAMP primer pairs LAMP primers specific to the group between Bursaphelenchus xylophilus and b.. The invention utilizes the LAMP primer set to establish a LAMP fast detection kit for pine wood nematode. The invention further utilizes the LAMP primer set to establish a rapid LAMP detection method for pine wood nematode, which can accurately identify whether or not a pine wood nematode is carried in the sample. The LAMP detection method of the invention has high specificity, simple operation and short time consuming, and is of great significance for the rapid detection of pine wood beetle carrying pine wood nematode and the overall pre-warning and control strategy of the pine wood nematode disease.
【技术实现步骤摘要】
用于检测松材线虫的LAMP引物组、试剂盒及检测方法
本专利技术涉及松材线虫的分子检测,尤其涉及用于检测松墨天牛携带松材线虫的LAMP引物组和试剂盒,还涉及所述LAMP引物组、试剂盒在检测松墨天牛携带松材线虫中的应用,属于松墨天牛携带松材线虫的分子检测领域。
技术介绍
松材线虫病(Pinewiltdisease),又被称为松树萎蔫病、枯萎病,该病由松材线虫[Bursaphelenchusxylophilus(Steiner&Buhrer)Nickle]引起,主要通过墨天牛属(Monochamus)昆虫在松树上取食和产卵进行自然传播以及病木、病木加工木的运输进行长距离传播。林区内松材线虫的传播主要靠松墨天牛,可为害包括松属(Pinusspp.)、落叶松属(Larixspp.)、云杉属(Piceaspp.)、黄杉属(Pseudotsugaspp.)、冷杉属(Abiesspp.)和雪松属(Cedrusspp.)的36种松属植物和8种非松属植物,其中松属植物是最主要的寄主。由于其危害极其严重而目前又缺乏有效的防治方法,被多个国家列为头号检疫对象。形态学是线虫种类常规鉴定的标准方法,松材线虫的鉴定主要依靠成虫的形态特征。但是,通过形态学准确鉴定松材线虫成虫对于非专业人员相当困难,且无法对幼虫进行准确鉴定。由于形态学的限制,免疫学、生理生化和分子生物学方法被应用到松材线虫的鉴定上。松墨天牛是松材线虫病最重要的传播媒介,携带的是松材线虫幼虫,且携带的线虫有多种,难以根据形态学特征来区分和鉴定松材线虫幼虫。准确诊断松墨天牛携带的松材线虫是监测松材线虫病发生蔓延过程中 ...
【技术保护点】
用于检测松材线虫的LAMP引物组,其特征在于,所述LAMP引物组选自以下2组引物中的任意一组:引物组(1):包括一对外引物和一对内引物;所述外引物对由核苷酸序列为SEQ ID No.1所示上游外引物和SEQ ID No.2所示下游外引物组成;所述内引物对由核苷酸序列为SEQ ID No.3所示上游内引物和SEQ ID No.4所示下游内引物组成;引物组(2):包括一对外引物、一对内引物和一对环引物;所述外引物对由核苷酸序列为SEQ ID No.1所示上游外引物和SEQ ID No.2所示下游外引物组成;所述内引物对由核苷酸序列为SEQ ID No.3所示上游内引物和SEQ ID No.4所示下游内引物组成;所述环引物对由核苷酸序列为SEQ ID No.5所示上游环引物和SEQ ID No.6所示下游环引物组成。
【技术特征摘要】
1.用于检测松材线虫的LAMP引物组,其特征在于,所述LAMP引物组选自以下2组引物中的任意一组:引物组(1):包括一对外引物和一对内引物;所述外引物对由核苷酸序列为SEQIDNo.1所示上游外引物和SEQIDNo.2所示下游外引物组成;所述内引物对由核苷酸序列为SEQIDNo.3所示上游内引物和SEQIDNo.4所示下游内引物组成;引物组(2):包括一对外引物、一对内引物和一对环引物;所述外引物对由核苷酸序列为SEQIDNo.1所示上游外引物和SEQIDNo.2所示下游外引物组成;所述内引物对由核苷酸序列为SEQIDNo.3所示上游内引物和SEQIDNo.4所示下游内引物组成;所述环引物对由核苷酸序列为SEQIDNo.5所示上游环引物和SEQIDNo.6所示下游环引物组成。2.按照权利要求1所述的LAMP引物组,其特征在于,所述LAMP引物组为引物组(1):包括一对外引物和一对内引物;所述外引物对由核苷酸序列为SEQIDNo.1所示上游外引物和SEQIDNo.2所示下游外引物组成;所述内引物对由核苷酸序列为SEQIDNo.3所示上游内引物和SEQIDNo.4所示下游内引物组成。3.权利要求1或2所述的LAMP引物组在检测样品中是否携带松材线虫中的应用;优选的,所述检测样品是松墨天牛。4.一种松材线虫的LAMP检测试剂盒,包括:LAMP引物组,2×RM,SYBRGreenⅠ,BstDNA聚合酶和ddH2O;其特征在于:所述LAMP引物组选自权利要求1或2所述的LAMP引物组。5.按照权利要求4所述的LAMP检测试剂盒,其特征在于:所述LAMP引物组为权利要求2所述的LAMP引物组。6.权利要求4或5所述的LAMP检测试剂盒在检测样品中是否携带松材线虫中的应用;优选...
【专利技术属性】
技术研发人员:汪来发,王曦茁,朴春根,李永,林彩丽,薛寒,
申请(专利权)人:中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所,
类型:发明
国别省市:北京,11
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