用于监测膜性肾病的方法和试剂盒技术

本发明专利技术涉及作为膜性肾病、特别是特发性膜性肾病的生物标志物自身抗原的蛋白质THSD7A(含有I型血小板应答蛋白结构域的7A)。本发明专利技术基于检测识别THSD7A蛋白的自身抗体(抗THSD7A自身抗体)提供用于患者膜性肾病的诊断、预后和监测方法和相关试剂盒。本发明专利技术还基于THSD7A水平的检测提供了诊断方法和试剂盒。本发明专利技术还提供了膜性肾病的治疗方法。

Methods and kits for monitoring membranous nephropathy

The present invention relates to a protein THSD7A (a 7A containing the I type platelet response protein domain) as a biomarker autoantigen of membranous nephropathy, especially idiopathic membranous nephropathy. The present invention provides methods and associated kits for the diagnosis, prognosis and monitoring of membranous nephropathy in patients, based on the detection of autoantibodies to the THSD7A protein (anti THSD7A autoantibodies). The present invention also provides diagnostic methods and kits based on the detection of THSD7A levels. The present invention also provides a treatment for membranous nephropathy.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于监测膜性肾病的方法和试剂盒专利
本专利技术涉及由膜性肾病、特别是特发性膜性肾病患者的生物样品中存在的自身抗体特异性识别的生物标志物自身抗原。本专利技术提供了用于诊断、预后、监测和治疗患者的膜性肾病、特别是特发性膜性肾病的方法和试剂盒。专利技术背景膜性肾病是肾病综合征的常见原因。约15％的膜性肾病病例是由药物、感染、肿瘤、免疫性疾病等引起的继发性膜性肾病。其余85％的膜性肾病病例是特发性的，也称为自身免疫性原发性膜性肾病。它的起源仍然未知。没有接受治疗的特发性膜性肾病患者中的大约一半将发展需要透析或肾移植的终末期肾病。在肾移植者中，他们中的约40％将复发。PLA2R1已被描述为特发性膜性肾病中的主要自身抗原，并且可用于诊断和监测肾移植术之前和之后特发性膜性肾病的治疗。基于这种自身抗原的可能的治疗策略也已经被报道。然而，仅有约70％的患有特发性膜性肾病的患者具有抗PLA2R1自身抗体，表明其他自身抗原和相应的自身抗体可能参与剩余的30％病例。因此，对于基于PLA2R1自身抗原不能被跟踪的30％的患者，存在相应的诊断、预后和诊疗的需要。专利技术概述本专利技术涉及鉴定含有I型血小板应答蛋白结构域的7A(THSD7A)作为膜性肾病中的新的自身抗原和相应的诊断和/或预后患者中的膜性肾病、特别是特发性膜性肾病的体外方法，所述方法包括在从所述患者获得的生物样品中检测识别THSD7A蛋白的一种或多种自身抗体的步骤。在一个实施方案中，所述体外方法包括以下步骤：(i)使从所述患者获得的生物样品与THSD7A多肽或其抗体结合片段接触，和(ii)检测形成的任何抗原抗体复合物，其中抗原抗体复合物的存在指示膜性肾病。优选地，生物样品是血液样品。本专利技术涉及用于评估对患者中的膜性肾病、特别是特发性膜性肾病的治疗的有效性的体外方法，包括：(i)在第一时间点确定在所述第一时间点从所述患者获得的所述样品中的抗THSD7A自身抗体的水平，(ii)在第二时间点测定在所述第二时间点从所述患者获得的所述样品中的抗THSD7A自身抗体的水平，以及(iii)比较两个时间点的自身抗体的水平，其中：·与第一时间点相比，第二时间点中抗THSD7A自身抗体水平的降低表明治疗有效，和/或·与第一时间点相比，第二时间点中抗THSD7A自身抗体水平的增加表明治疗无效。本专利技术还提供了用于诊断和/或预后患者中的膜性肾病的试剂盒，所述试剂盒包括：·THSD7A多肽或其抗体结合片段，和·用于检测在自身抗原和存在于生物样品中的自身抗体之间形成的抗原抗体复合物的试剂。本专利技术还涉及用于诊断和/或预后患者中的膜性肾病、特别是特发性膜性肾病的体外方法，包括测定从所述患者获得的生物样品中的THSD7A水平的步骤。在一个实施例方案中，所述方法包括以下步骤：(i)测量从所述患者获得的生物样品中THSD7A蛋白的水平，(ii)将所述水平与参考水平进行比较，其中与所述参考水平相比增加的THSD7A蛋白水平指示膜性肾病。优选地，生物样品是肾活检或血液样品。最后，本专利技术涉及治疗方法、药物组合物和用于治疗膜性肾病的用途。实际上，本专利技术涉及用于治疗患者中的膜性肾病、特别是特发性膜性肾病的方法，所述方法包括从所述患者体内的样品中离体去除抗THSD7A自身抗体。本专利技术还涉及治疗患者中的膜性肾病、特别是特发性膜性肾病的方法，所述方法包括给予治疗有效量的THSD7A多肽或其片段，表达所述THSD7A多肽或其片段的载体或表达所述THSD7A多肽或其片段的宿主细胞。此外，本专利技术涉及用于治疗膜性肾病的THSD7A多肽或其片段(表达所述THSD7A多肽或其片段的载体或表达所述THSD7A多肽或其片段的宿主细胞)和药物组合物，药物组合物包含所述THSD7A多肽或其片段(表达所述THSD7A多肽或其片段的载体或表达所述THSD7A多肽或其片段的宿主细胞)，特别是用于治疗膜性肾病，更特别是特发性膜性肾病。优选地，对于本专利技术的治疗方法、药物组合物和用途，患者是THSD7A阳性患者。附图简述图1：在膜性肾病患者中检测针对未知抗原的自身抗体。用来自膜性肾病(MN)患者和对照患者的血清探测的人肾小球提取物(HGE)的蛋白质印迹结果。这些测试的患者中的大多数(88％)血清取自来自汉堡的预先存在的血清库，而剩余的血清来自尼斯的患者队列。该图显示不同反应性模式的代表性图像：所描绘的三种MN血清(MN2至MN4)与大小约250kDa的肾小球蛋白反应，但不与重组磷脂酶A2受体(rPLA2R1)反应。一个MN血清识别约180kDa的肾小球蛋白以及重组PLA2R1(MN36)。对于一个MN血清(MN6)、来自蛋白尿对照的两个血清、一个患有最小变化疾病(MCD)和一个患有局灶性节段性肾小球硬化(FSGS)和一个健康供体的血清没有观察到反应性。B.在针对抗PLA2R1抗体阴性的膜性肾病(MN)的69个患者中，6个与250kDa抗原反应。这6个中的5个患有特发性MN，而1个患有具有阳性抗核抗体(ANA)的继发性MN。在抗PLA2R1阳性患者(n＝60)、其他肾小球疾病患者(n＝76)或健康对照(n＝44)中没有观察到反应性。图2：靶抗原的鉴定。A.人肾小球提取物(HGE)和过表达的含有1型血小板应答蛋白结构域的7A(rTHSD7A)的转染的HEK293细胞与反应性和非反应性血清的蛋白质印迹的结果。该图显示了三个膜性肾病(MN)患者(其血清与HGE和rTHSD7A(MN1至MN3)二者均反应)、一个非反应性MN患者(MN36)，一个患有最小变化疾病(MCD)的非反应性患者和一名非反应性健康对照患者的代表性图像。rTHSD7A迁移至比包含在肾小球裂解物中的天然蛋白质略低的位置，最有可能是由于翻译后修饰的差异。B.来自人肾小球提取物(HGE)的裂解物的THSD7A的免疫沉淀结果。HGE与来自MN患者和对照的反应性和非反应性血清样品孵育，随后加入人IgG4亲和基质。离心样品，将免疫沉淀物在还原条件下电泳，印迹在PVDF膜上，并用多克隆兔抗THSD7A抗体检测。来自MN患者的所有5个反应性血清免疫沉淀来自HGE的靶抗原(MN1至MN5)，而一个非反应性MN血清(MN9)以及来自健康对照患者的一个血清则没有。在实验中当用水替换血清时不发生免疫沉淀。图3：抗THSD7A抗体与MN患者的临床病程之间的关系。来自一个膜性肾病患者的连续血清样品的等体积人肾小球提取物(HGE)的蛋白质印迹结果。在蛋白尿初始减少后，患者在2012年9月出现严重的水肿和重的蛋白尿。开始用环孢素A和类固醇的免疫抑制治疗，并且蛋白尿减少，直到患者在2014年1月达到部分缓解。疾病活动的这种发展反映在免疫抑制治疗开始后的蛋白质印迹信号的减少。图4：大THSD7A蛋白(1657个氨基酸)的分子结构。TSHD7A蛋白由含有信号肽的大胞外部分、至少10个1型血小板应答蛋白重复(其中几个含有富含色氨酸的序列)和一个RGD基序、起始于氨基酸残基1608的跨膜结构域和短的细胞内尾巴组成。专利技术详述本专利技术人强调了在患有特发性膜性肾病的患者中存在自身抗体，所述自身抗体对新的自身抗原，即含有I型血小板应答蛋白结构域的7A(THSD7A)蛋白具有反应性。这些自身抗体存在于约15％的患有特发性膜性肾病的患者的血清中，其本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于诊断和/或预后患者中的膜性肾病的体外方法，所述方法包括在获自所述患者的生物样品中检测识别THSD7A(含有I型血小板应答蛋白结构域的7A)蛋白的一种或多种自身抗体的步骤。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.07.24 EP 14306195.01.一种用于诊断和/或预后患者中的膜性肾病的体外方法，所述方法包括在获自所述患者的生物样品中检测识别THSD7A(含有I型血小板应答蛋白结构域的7A)蛋白的一种或多种自身抗体的步骤。2.根据权利要求1所述的体外方法，所述方法包括以下步骤：(i)使从所述患者获得的生物样品与THSD7A多肽或其抗体结合片段接触，和(ii)检测形成的任何抗原抗体复合物，其中抗原抗体复合物的存在指示膜性肾病。3.根据权利要求1或2所述的体外方法，其中所述膜性肾病是特发性膜性肾病。4.根据权利要求1-3中任一项所述的体外方法，其中所述生物样品是血液样品。5.根据权利要求1-4中任一项所述的体外方法，其中所述患者是PLA2R1阴性患者。6.一种用于评估对患者中的膜性肾病、特别是特发性膜性肾病的治疗的有效性的体外方法，包括：(i)在第一时间点测定在所述第一时间点从所述患者获得的所述样品中的抗THSD7A自身抗体的水平，(ii)在第二时间点测定在所述第二时间点从所述患者获得的所述样品中的抗THSD7A自身抗体的水平，以及(iii)比较两个时间点的自身抗体的水平，其中：·与第一时间点相比，第二时间点中抗THSD7A自身抗体水平的降低表明治疗有效，和/或·与第一时间点相比，第二时间点中抗THSD7A自身抗体水平的增加表明治疗无效。7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：G·朗博，N·M·托马斯，B·塞茨波尔斯基，R·A·K·斯塔尔，
申请(专利权)人：欧蒙医学诊断技术有限公司，
类型：发明
国别省市：德国,DE