本发明专利技术提供一种利用RNA吸附柱快速提取植物RNA的试剂盒及方法，属于生物技术领域。利用该试剂盒能够快速获得纯度高、完整性好的RNA。所述试剂盒的组成包括：裂解液、BufferA、BufferB、去蛋白液、漂洗液、RNA吸附柱。利用该试剂盒通过植物组织细胞的破碎、RNA的吸附，快速提取植物DNA。本发明专利技术通过采用RNA吸附柱吸附RNA，同时使用去蛋白溶液和漂洗溶液去除蛋白等杂质，可以在较短时间内获得较高纯度的植物RNA。本发明专利技术能快速获得质量较高的植物RNA。
【技术实现步骤摘要】
利用RNA吸附柱快速提取植物RNA的试剂盒及方法
本专利技术提供一种利用RNA吸附柱快速提取植物RNA的试剂盒及方法，属于生物
技术介绍
核酸是生物遗传的物质基础，决定生物体的遗传、变异、生长和发育。在基因工程中，核酸分子是主要的研究对象，因此核酸的分离、提取是分子生物学研究中很重要的技术。从植物组织中提取RNA是进行植物分子生物学方面研究的必要前提，要克隆基因，或是简历cDNA文库，RT-PCR以及Northern杂交等都需要有高质量的RNA。因此，从植物组织中提取纯度高、完整性好的RNA是上述研究的关键所在。RNA是一类极易降解的分子，要得到完整的RNA必须最大限度地抑制提取过程中内源性及外源性核糖核酸酶对RNA的降解。高浓度强变性剂硫氰酸胍，可以溶解蛋白质、破坏细胞结构，使核蛋白与核酸分离，失活RNAase，所以RNA从细胞中释放出来时不会被降解。细胞裂解后，除了RNA，还有DNA、蛋白质和细胞碎片，通过苯酚、氯仿等有机溶剂处理得到纯化、均一的总RNA。在提取植物RNA的过程中，常由于提取时间过长，RNA酶污染等原因造成RNA降解，使得后续试验无法进行。因此，采用一种快速植物RNA的方法对于进行RNA的相关实验至关重要。
技术实现思路
本专利技术提供一种利用RNA吸附柱快速提取植物RNA的试剂盒及方法，利用该试剂盒能够快速获得纯度高、完整性好的RNA。本专利技术首先提供了一种利用RNA吸附柱快速提取植物RNA的试剂盒，所述试剂盒的组成包括：1)裂解液：Trizol提取液；2)BufferA：氯仿；3)BufferB：70%重量比乙醇；4)去蛋白液：5M盐酸胍，20mMTris-HCIpH6.6，38％重量比乙醇；5)漂洗液：20mMNaCL，2mMTris-HCIpH7.5，80％重量比乙醇；6)RNA吸附柱。所述Trizol提取液配制如下：174mlsolutionD、17.4ml0.2MNacl（ph4.2-4.5）、174ml水饱和酚、34.8ml氯仿、1.2ml2-Mercaptoethaol（b-硫基乙醇），其中solutionD的配方如下：283.5g异硫氰酸胍、2.5g月桂酸、50ml250mM柠檬酸钠（ph7.0），加DEPC处理水至500ml。本专利技术还提供了一种利用所述试剂盒快速提取植物DNA的方法，依次包括以下步骤：（1）植物组织细胞的破碎：称取0.5g植物样品加入液氮研磨成粉状，将其迅速转入1.5ml离心管，加入1ml裂解液，振荡器震荡30秒后，加入200ul的BufferA，振荡器震荡30秒；（2）RNA的吸附：将细胞破碎后的样品12000rpm/min离心10min，离心后将上清吸到1.5ml离心管，加入等体积的BufferB，混匀后将样品加到RNA吸附柱上，12000rpm/min离心1min，倒掉液体，加入500ul去蛋白液，12000rpm/min离心1min，倒掉液体，加入500ul漂洗液，12000rpm/min离心1min，倒掉液体，再加入500ul漂洗液，12000rpm/min离心1min，倒掉液体，吹干后加入50ulDEPC水，12000rpm/min离心2min，收集液体。其中所述RNA吸附柱为硅胶膜RNA吸附柱，购自北京天恩泽公司。常规的植物RNA提取方法步骤繁琐、费时长，容易造成RNA降解。本专利技术通过采用RNA吸附柱吸附RNA，同时使用去蛋白溶液和漂洗溶液去除蛋白等杂质，可以在较短时间内获得较高纯度的植物RNA。本专利技术能快速获得质量较高的植物RNA。采用本专利技术所提供的方法具有突出的特点：1.降低了植物组织RNA的提取时间。2.提高了植物组织RNA的提取纯度和完整性。附图说明图1为植物组织RNA的提取检测结果图。泳道1，2，3，4,5分别代表利用本方法提取的水稻、玉米、甘蔗、花生、小麦组织RNA电泳结果图。具体实施方式本专利技术的一种利用RNA吸附柱快速提取植物RNA的试剂盒及方法，具体步骤如下（1）原料：称取0.5g水稻、玉米、甘蔗、花生、小麦样品。（2）植物组织细胞的破碎：分别将样品加入液氮研磨成粉状，将其迅速转入1.5ml离心管，加入1mlTrizol提取液。振荡器震荡30秒后，加入200ul的BufferA，振荡器震荡30秒。（3）RNA的吸附：将样品12000rpm/min离心10min，离心后将上清吸到1.5ml离心管。加入等体积的BufferB，混匀后将样品加到RNA吸附柱上，12000rpm/min离心1min，倒掉液体，加入500ul去蛋白液，12000rpm/min离心1min，倒掉液体，加入500ul漂洗液，12000rpm/min离心1min，倒掉液体，加入500ul漂洗液，12000rpm/min离心1min，倒掉液体，吹干后加入50ulDEPC水，12000rpm/min离心2min，收集液体。通过琼脂糖凝胶电泳电测RNA。（4）利用紫外分光光度计对提取到的植物根部RNA进行溶度以及纯度的检测。BufferA溶液：氯仿。BufferB溶液：70%乙醇。去蛋白液溶液：5M盐酸胍，20mMTris-HCI，pH6.6，38％乙醇。漂洗液溶液：20mMNaCL，2mMTris-HCI，pH7.5，80％乙醇。植物组织RNA的提取检测结果见图1，泳道1，2，3，4,5分别代表利用本方法提取的水稻、玉米、甘蔗、花生、小麦组织RNA电泳结果图。图中的28srRNA亮度约为18srRNA亮度的2倍，说明本方法能够快速提取到具有较高完整性的RNA。植物根部RNA浓度以及纯度的检测结果见表1，RNA样品的OD（260:280）比值均在1.9-2.0之间，说明本方法提取的RNA具有较高的纯度，RNA样品的浓度范围在0.49μg/μl-0.62μg/μl。说明本方法能快速提取到浓度高、纯度好的植物RNA。表1：不同植物RNA的溶度以及OD（260:280）。本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种利用RNA吸附柱快速提取植物RNA的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的组成包括：裂解液：Trizol提取液；Buffer A：氯仿；Buffer B：70%重量比乙醇；去蛋白液：5M盐酸胍，20mM Tris‑HCI pH6.6，38％重量比乙醇；漂洗液：20mM NaCL，2mM Tris‑HCI pH7.5，80％重量比乙醇；RNA吸附柱。
【技术特征摘要】
1.一种利用RNA吸附柱快速提取植物RNA的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的组成包括：裂解液：Trizol提取液；BufferA：氯仿；BufferB：70%重量比乙醇；去蛋白液：5M盐酸胍，20mMTris-HClpH6.6，38％重量比乙醇；漂洗液：20mMNaCL，2mMTris-HClpH7.5，80％重量比乙醇；RNA吸附柱；所述Trizol提取液配制如下：174mlsolutionD、17.4ml0.2MNaClpH4.2-4.5、174ml水饱和酚、34.8ml氯仿、1.2mlβ-巯基乙醇，其中solutionD的配方如下：283.5g异硫氰酸胍、2.5g月桂酸、50ml250mM柠檬酸钠pH7.0，加DEPC处理水至500ml。2.一种利用权利要求1所述试剂盒快速提取植物RNA的方...
【专利技术属性】
技术研发人员：王清水，余彦，
申请(专利权)人：福建师范大学，
类型：发明
国别省市：福建;35
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