鉴定调节苦味的化合物的测定制造技术

本发明专利技术基于申请人在本文公开的发现，即TAS2R受体TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的激动剂。将激动剂分配给这些受体使得鉴定调节苦味的化合物的测定成为可能。例如，本发明专利技术提供鉴定抑制由这些激动剂引起的苦味的化合物的方法。本发明专利技术还提供鉴定选择性抑制由这些激动剂引起的苦味的化合物的方法。本发明专利技术进一步提供鉴定模拟由这些激动剂引起的苦味的化合物的方法。本发明专利技术还提供鉴定增强由这些激动剂引起的苦味的化合物的方法。

Determination of compounds that regulate bitter taste

The present invention is based on an applicant's disclosure in this article, i.e., agonists of the TAS2R receptors TAS2R1, TAS2R4, TAS2R9, TAS2R13, TAS2R14, TAS2R16, TAS2R44, TAS2R46 and TAS2R60. The distribution of agonists to these receptors makes it possible to identify compounds that regulate bitter taste. For example, the present invention provides methods for identifying compounds that inhibit the bitterness caused by these agonists. The present invention also provides methods of identifying compounds selectively inhibiting the bitterness caused by these agonists. The present invention further provides methods for identifying compounds that simulate bitterness caused by these agonists. The present invention also provides methods for identifying compounds that enhance bitterness caused by these agonists.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】鉴定调节苦味的化合物的测定相关申请的交叉引用本申请要求2011年10月20日提交的美国临时申请61/549,693的优先权，所述申请通过引用整体并入本文。专利
本专利技术涉及鉴定苦味调节剂的测定。专利技术背景味觉(如人的味觉)可以鉴别至少五种传统的味道：甜味、酸味、咸味、苦味和鲜味(美味)。包括植物、食物、食物成分和营养剂的许多营养物质包含促苦味剂和/或具有苦味。此外，对保持或改善健康重要的许多药物物质包含促苦味剂和/或具有苦味。虽然某些食品和消费品具有合乎需要的苦味，包括咖啡、啤酒和黑巧克力，但在许多情况下，消费者不喜欢这些苦味。例如，许多消费者不喜欢某些促苦味剂和/或苦味的感觉并且回避具有不希望的促苦味剂或苦味的食物或药物产品而偏好具有较低含量的不希望的促苦味剂或苦味减小或完全没有苦味的食物和药物产品。对含有不希望的促苦味剂和/或具有不希望的苦味的产品的这种排斥可能由存在于口腔和/或胃肠道中的苦味受体活化介导的促苦味剂和/或苦味的感觉所引起。在很多情况下，消费者不喜欢促苦味剂和/或苦味妨碍或抑制了食物的营养质量和安全的改善，因为不能使用希望的水平的包含促苦味剂和/或具有苦味的营养剂或防腐剂。此外，对某些药剂的促苦味剂或苦味的厌恶或排斥使使用这些药剂的处方方案的顺应性受到负面影响。例如，在食品的制备中使用的一些添加剂、防腐剂、乳化剂和食材包含促苦味剂和/或具有苦味。虽然这些添加剂、防腐剂、乳化剂和食材可能影响食品的味道，但是它们可能对于改善食品的保存期限、营养质量或质地也是重要的。例如，高血压和心血管疾病的日益增加的趋势部分是由于西方饮食的高钠摄入。因此，用另一种咸味化合物代替氯化钠是合乎需要的。最常用的氯化钠替代物是氯化钾，氯化钾对一部分人来说除了具有咸味之外还具有苦味。氯化钾的苦味限制了它可以用于代替食物中的氯化钠而不给对它敏感的人群产生不希望的苦味的范围。另一种常用的食品添加剂乳酸钠具有广泛的抗微生物作用，对抑制酸败和致病细菌的生长有效，并且通常在食品(例如肉和禽产品)中使用来延长保存期限并增加食物安全性。然而，由于其钠含量，乳酸钠作为防腐剂是不合要求的。乳酸钾具有类似的抗微生物性质，已经用于代替乳酸钠。然而，乳酸钾也与苦味相关，这种苦味限制了它可以用于代替食物中的乳酸钠而不引起不希望的苦味的范围。此外，肥胖和糖尿病的日益增加的发病率部分是由于许多饮食的高糖摄入。因此，用另一种甜味化合物代替糖是合乎需要的。可以用于减少食物中的糖的人造和天然糖替代物往往与苦味相关，这也限制了其用于代替食物中的糖而不引起不利的苦味的范围。例如，常用的糖替代物是乙酰磺胺酸钾，其除了具有甜味之外也具有苦味。不受理论限制，促苦味剂、促甜味剂和促鲜味剂和化合物通常通过G-蛋白偶联受体引发味觉反应，而促咸味剂和促酸味剂和化合物通常被假设是通过离子通道引发味觉反应。苦味受体属于诱导响应于促苦味剂的胞内钙浓度变化的G-蛋白偶联受体的TAS2R(也称为T2R)家族。TAS2R受体通过味蛋白(一种味道特异性的G-蛋白)起作用。有至少二十五种不同的TAS2R家族成员，显示苦味的感觉是复杂的，其涉及一些不同促味剂-受体相互作用。一些TAS2R成员，如TAS2R60，是不具有鉴定的配体的孤儿受体。能够调节口腔和/或胃肠道中的苦味受体的活化和/或信号传导的化合物可以有效地在食物和药物产品中获得促苦味剂或苦味物质的希望的使用水平，而不引起消费者由于感觉增加的水平的促苦味剂或苦味厌恶这些产品。在一些情况下，苦味受体和苦味的阻滞剂或调节剂可以通过存在于口腔和/或胃肠道中的苦味受体和/或味道转导信号传导机制减小促苦味剂和/或苦味的感觉。传统上，在食物制备和药物中，使用甜味剂和其它促味剂(包括盐)来掩蔽苦味。然而，在一些情况下，这是不希望的或不足够的，因为它可能改变、掩蔽或影响食品中的其它味道/气味/感觉(例如，非苦味或希望的苦味)。此外，该途径很少能够完全地掩蔽存在于这些食品或药物中的苦味。因此，优选减小苦味的化合物而不是掩蔽剂，或除了掩蔽剂之外减小苦味的化合物是优选的。因此，提供鉴定可以加入包含促苦味剂或具有苦味的食品、消费品和药物中的化合物的测定是合乎需要的，所述化合物用于消除、调节或减小所述促苦味剂或苦味的感觉或减小口腔和/或胃肠道中的苦味受体的相应活化。类似地，鉴定不活化其它苦味受体的化合物(即，具有脱靶影响的化合物)是合乎需要的。专利技术概述本专利技术基于申请人在本文公开的发现，即TAS2R受体TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的激动剂。将激动剂分配给这些受体使得鉴定调节苦味的化合物的测定成为可能。例如，本专利技术提供鉴定抑制由这些激动剂引起的苦味的化合物的方法。本专利技术还提供鉴定选择性抑制由这些激动剂引起的苦味的化合物的方法。本专利技术进一步提供鉴定模拟由这些激动剂引起的苦味的化合物的方法。本专利技术还提供鉴定增强由这些激动剂引起的苦味的化合物的方法。鉴定抑制苦味的化合物的方法本专利技术的一个方面提供鉴定抑制由KCl引起的苦味的化合物的方法。在一些实施方案中，所述方法包括提供第一细胞和第二细胞，其中第一和第二细胞各自表达选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的一者或多者的苦味受体，其中第一和第二细胞表达相同的一种或多种苦味受体；使第一细胞与活化TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的一者或多者的促味剂接触；使第二细胞与测试化合物和促味剂接触；测定第一和第二细胞的苦味受体活化；和比较第一细胞的苦味受体活化与第二细胞的苦味受体活化，其中如果第二细胞的苦味受体活性低于第一细胞的苦味受体活性，则测试化合物是由KCl引起的苦味的抑制剂。在一些实施方案中，所述方法包括提供表达选自：TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的一者或多者的苦味受体的细胞；使细胞与活化TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的一者或多者的促味剂接触；进行对苦味受体活化的第一测定；洗涤细胞；使细胞与测试化合物和促味剂接触；进行对苦味受体活化的第二测定；和比较第一测定的苦味受体活化与第二测定的苦味受体活化，其中如果第二测定的苦味受体活性低于第一测定的苦味受体活性，则测试化合物是由KCl引起的苦味的抑制剂。本专利技术的另一方面提供鉴定抑制由乳酸钾引起的苦味的化合物的方法。在一些实施方案中，所述方法包括提供第一细胞和第二细胞，其中第一和第二细胞各自表达选自：TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的一者或多者的苦味受体，其中第一和第二细胞表达相同的一种或多种苦味受体；使第一细胞与活化TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的一者或多者的促味剂接触；使第二细胞与测试化合物和促味剂接触；测定第一和第二细胞的苦味受体活化；和比较第一细胞的苦味受体活化与第二细胞的苦味受体本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鉴定抑制由KCl引起的苦味的化合物的方法，其包括：a)提供第一和第二细胞，其中所述第一和第二细胞各自表达选自以下的一种或多种苦味受体：TAS2R4，SEQ ID NO:30；TAS2R9，SEQ ID NO:34；TAS2R13，SEQ ID NO:36；TAS2R14，SEQ ID NO:37；TAS2R44，SEQ ID NO:44；和TAS2R60，SEQ ID NO:52；或其等位基因变体，其中所述第一和第二细胞表达相同的一种或多种苦味受体；b)使所述第一细胞与促味剂接触，其中所述促味剂活化所述一种或多种苦味受体；c)使所述第二细胞与测试化合物和所述促味剂接触；d)测定所述第一和第二细胞的苦味受体活化；和e)比较所述第一细胞的苦味受体活化与所述第二细胞的苦味受体活化，其中如果所述第二细胞的苦味受体活性低于所述第一细胞的苦味受体活性，则所述测试化合物是由KCl引起的苦味的抑制剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.10.20 US 61/549,6931.一种鉴定抑制由KCl引起的苦味的化合物的方法，其包括：a)提供第一和第二细胞，其中所述第一和第二细胞各自表达选自以下的一种或多种苦味受体：TAS2R4，SEQIDNO:30；TAS2R9，SEQIDNO:34；TAS2R13，SEQIDNO:36；TAS2R14，SEQIDNO:37；TAS2R44，SEQIDNO:44；和TAS2R60，SEQIDNO:52；或其等位基因变体，其中所述第一和第二细胞表达相同的一种或多种苦味受体；b)使所述第一细胞与促味剂接触，其中所述促味剂活化所述一种或多种苦味受体；c)使所述第二细胞与测试化合物和所述促味剂接触；d)测定所述第一和第二细胞的苦味受体活化；和e)比较所述第一细胞的苦味受体活化与所述第二细胞的苦味受体活化，其中如果所述第二细胞的苦味受体活性低于所述第一细胞的苦味受体活性，则所述测试化合物是由KCl引起的苦味的抑制剂。2.根据权利要求1所述的方法，其中(i)所述TAS2R4的等位基因变体包括R3Q、Y6S、F7S、F62L、T74M、V96L、S171N或I191V突变或其组合；(ii)所述TAS2R9变体包括F67L、N127K、D150E、K170Q、V187A、A233T、L238V、L289F或L294M突变或其组合；(iii)所述TAS2R13变体包括N149S或N259S突变或其组合；(iv)所述TAS2R14变体包括T86A或M197V突变或其组合；(v)所述TAS2R44变体包括R35W、L162M、C200Y、Q217E、P219L、A227V、V240I、P276R或W281C突变或其组合；或(vi)所述TAS2R60变体包括M199L突变。3.根据权利要求1所述的方法，其中(i)所述TAS2R4的等位基因变体包括具有与SEQIDNO:30至少95％序列同一性的氨基酸序列，(ii)所述TAS2R9的等位基因变体包括具有与SEQIDNO:34至少95％序列同一性的氨基酸序列，(iii)所述TAS2R13的等位基因变体包括具有与SEQIDNO:36至少95％序列同一性的氨基酸序列，(iv)所述TAS2R14的等位基因变体包括具有与SEQIDNO:37至少95％序列同一性的氨基酸序列，(v)所述TAS2R44的等位基因变体包括具有与SEQIDNO:44至少95％序列同一性的氨基酸序列，或(vi)所述TAS2R60的等位基因变体包括具有与SEQIDNO:52至少95％序列同一性的氨基酸序列。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述苦味受体与G蛋白复合。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述G蛋白是Gq蛋白、α转导素或α味蛋白。6.根据权利要求5所述的方法，其中所述Gq蛋白是Gα15蛋白，SEQIDNO:1。7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中苦味受体活性是通过测量胞内钙浓度来测定的。8.根据权利要求7所述的方法，其中所述胞内钙浓度是使用钙敏感性荧光染料来测定的。9.根据权利要求8所述的方法，其中所述钙敏感性荧光染料选自Indo-1、Fura-2、Fluo-3、Fluo-4、Rhod-2、Rhod-5N、钙黄绿素、钙黄绿素蓝、cytoCalcein紫罗兰、Quin-2、腔肠素和钙-3。10.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述第一和第二细胞存在于体外细胞系中。11.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述第一和第二细胞存在于体外细胞系的小组中。12.一种鉴定选择性作用于受体以抑制由KCl引起的苦味的化合物的方法，所述方法包括：a)提供第一和第二小组的细胞系，其中所述第一和第二小组各自包括表达选自：TAS2R4，SEQIDNO:30；TAS2R9，SEQIDNO:34；TAS2R13，SEQIDNO:36；TAS2R14，SEQIDNO:37；TAS2R44，SEQIDNO:44；和TAS2R60，SEQIDNO:52；或其等位基因变体的苦味受体的细胞系；其中TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60或其等位基因变体各自在至少一种细胞系中表达，并且其中所述第一和第二小组包括相同的细胞系；b)使所述第一小组中的每种细胞系与促味剂接触，其中所述促味剂活化选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60或其等位基因变体的至少两者；c)使所述第二小组中的每种细胞系与测试化合物和所述促味剂接触；d)测定每种细胞系的苦味受体活化；其中，如果与所述第一小组相比，在所述第二小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60或其等位基因变体的至少两者的苦味受体活性较低，则所述测试化合物是由KCl引起的苦味的选择性抑制剂。13.根据权利要求12所述的方法，其中(i)所述TAS2R4的等位基因变体包括R3Q、Y6S、F7S、F62L、T74M、V96L、S171N或I191V突变或其组合；(ii)所述TAS2R9变体包括F67L、N127K、D150E、K170Q、V187A、A233T、L238V、L289F或L294M突变或其组合；(iii)所述TAS2R13变体包括N149S或N259S突变或其组合；(iv)所述TAS2R14变体包括T86A或M197V突变或其组合；(v)所述TAS2R44变体包括R35W、L162M、C200Y、Q217E、P219L、A227V、V240I、P276R或W281C突变或其组合；或(vi)所述TAS2R60变体包括M199L突变。14.根据权利要求12所述的方法，其中(i)所述TAS2R4的等位基因变体包括具有与SEQIDNO:30至少95％序列同一性的氨基酸序列，(ii)所述TAS2R9的等位基因变体包括具有与SEQIDNO:34至少95％序列同一性的氨基酸序列，(iii)所述TAS2R13的等位基因变体包括具有与SEQIDNO:36至少95％序列同一性的氨基酸序列，(iv)所述TAS2R14的等位基因变体包括具有与SEQIDNO:37至少95％序列同一性的氨基酸序列，(v)所述TAS2R44的等位基因变体包括具有与SEQIDNO:44至少9...

【专利技术属性】
技术研发人员：K·夏柯达，P·M·沙阿，J·古奈特，J·V·里兰，P·H·布朗，L·斯雷德，
申请(专利权)人：卓莫赛尔公司，卡夫食品集团品牌有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国,US