本发明专利技术公开了一种具有苯骈罩酚酮结构化合物的纯化方法，包括：(1)将含有苯骈罩酚酮结构化合物的粗品溶解过滤后，微晶纤维素吸附，用10 %以下的乙醇梯度洗脱，收集洗脱液；(2)洗脱液进一步上样于装有纤维素衍生物的吸附柱，吸附后，用乙醇的水洗脱，收集目标产物，干燥，得目标产物纯度提高 2倍以上的纯化制品；(3)纯化制品以醇水(含50 mmol/L以下的磷酸二氢钾)溶解后,上样于装有Sephadex LH-20凝胶的层析柱，以低于15 % (v/v)乙酸乙酯的水(保持50 mmol/L以下的磷酸二氢钾和20 %( v/v)的乙醇在水中浓度不变)梯度洗脱，收集干燥得目标单体化合物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种茶鲜叶中天然合成产物的纯化方法，特别涉及一种以柱层析的方式从茶儿茶素的酶促氧化聚合产物中分离、纯化含苯骈罩酚酮结构化合物的方法。
技术介绍
茶(Camellia sinensis (L.) O. Ktze)为山茶科山茶属植物，茶鲜叶含有茶儿茶素(图1)、茶氨酸、咖啡碱、茶多糖，等活性成分。茶树所萌发的新梢叶片可通过传统的萎调、揉捻及通氧“发酵”等工序制备成红茶，长期饮用，有益身心健康。红茶中含有的茶黄素类化合物(Theaflavins)通常是由偶合的表型儿茶素与表没食子型茶儿茶素(Paired Catechins) 经多酚氧化酶(teapolyphenol oxidase, TPPO)酶促氧化缩聚而成，即表儿茶素(Epi-Catechin, EC)联合表没食子儿茶素(Epigallo-Catechin, EGC)、EC联合表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallo-Catechin Gallate, EGCG)、表儿茶素没食子酸酯(Epi-Catechin Gallate, ECG)联合EGC、ECG联合EGCG组合物在酶促合成条件下相对应分别生成茶黄素(Theaflavin, TF)、茶黄素-3′-单没食子酸酯(Theaflavin-3′-gallate, TF-3′-G)、茶黄素-3-单没食子酸酯(Theaflavin3-gallate, TF-3-G)、茶黄素-3,3′-双没食子酸酯(Theaflavin-3,3′-digallate, TF-3,3′-G)。茶黄素为红茶品质因子之一，呈橘黄色，经核磁共振鉴定(Adrienne L. Davis, Ya Cai and Alan P. Davies. 1H and 13C NMR Assignment of Theaflavin, Theaflavin Monogallate and Theaflavin Digallate. Magnetic Resonance in Chemistry, 1995, 33(7):549-552.)具有苯骈罩酚酮(benzotropolone skeleton)结构:其合成过程示意如下：茶黄素最初是由Roberts等于1957年从红茶提取物中分离鉴定，并因固体呈橙黄色而得名。茶黄素具有体外抗氧化(Shengmin Sang, Shiying Tian, Jin-woo Jhoo, Hsin Wang, Ruth E. Stark, Robert T. Rosen, Chung S. Yang and Chi-Tang Ho. Chemical studies of the antioxidant mechanism of theaflavins: radical reaction products of theaflavin 3,3’-digallate with hydrogen peroxide. Tetrahedron Letters, 2003, 44(30): 5583-5587.||Ziyin Yang, Guoliang Jie, Fang Dong, Yi Xu, Naoharu Watanabe, Youying Tu. Radical-scavenging abilities and antioxidant properties of theaflavins and their gallate esters in H2O2-mediated oxidative damage system in the HPF-1 cells. Toxicology in Vitro, 2008, 22(5):1250-1256.||Nicholas J. Miller, Cinzia Castelluccio, Lilian Tijburg, Catherine Rice-Evans. The antioxidant properties of theaflavins and their gallate esters – radical scavengers or metal chelators？ FEBS Letters, 1996, 392(1):40-44.||Lai Kwok Leung, Yalun Su, Ruoyun Chen, Zesheng Zhang, Yu Huang and Zhen-Yu Chen. Theaflavins in Black Tea and Catechin in Green Tea Are Equally Effective Antioxidants. The Journal of Nutrition, 2001, 131(9): 2248-2251.)、降低心脑血管疾病(Henryk Dreger, Mario Lorenz, Alexandra Kehrer, Gert Baumann, Karl Stangl, and Verena Stangl. Characteristics of Catechin- and theaflavin-Mediated Cardioprotection. Experimental Biology and Medicine, 2008, 233(4): 427-433.||David J. Maron, Guo Ping Lu, Nai Sheng Cai, Zong Gui Wu, Yue Hua Li, Hui Chen, Jian Qiu Zhu, Xue Juan Jin, Bert C. Wouters, Jian Zhao. Cholesterol-Lowering Effect of a Theaflavin-Enriched Green tea Extract. Archives of Internal Medicine, 2003, 163: 1448-1453.)、诱导肿瘤细胞凋亡(Seewan Kim and Young-Eun Joo. Theaflavin inhibits LPS-Induced IL-6, MCP-1, and ICAM-1 Expression in Bone Marrow-Derived Macrophages Through the Blockade of NF-kB and MAPK Signaling Pathways. Chonnam Medical Journal, 2011, 47:104-110.||Jiebo Lu, Chi-Tang Ho, Geetha Ghai, et al. Diferential Effects of Theaflavin Monogallates on Cell Growth, Apoptosis, and Cox-2 Gene Expression in Cancerous versus Normal Cells. Cancer Research, 2000, 60(22): 6465-6471.||Susanne M. Henning, William Aronson, Yantao Niu, F本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种具有苯骈罩酚酮结构化合物的纯化方法，包括：(1) 用含醋酸和乙醇的水溶解含有目标产物的粗品，过滤，得溶解液；(2) 将步骤 (1) 的溶解液吸附于微晶纤维素；(3) 用10 % (v/v) 以下的乙醇洗脱，收集洗脱液；(4) 将步骤 (3) 的洗脱液在减压条件下吸附于低取代羟丙基纤维素；(5) 用35 % (v/v) 以下的乙醇在减压条件下进行洗脱；(6) 用45‑65 % (v/v) 的乙醇在减压条件下进行洗脱，并收集目标产物洗脱液；(7) 浓缩步骤 (6) 的目标产物洗脱液，获得浓缩液；(8) 向步骤 (7) 的浓缩液中加入乙酸乙酯，充分振荡萃取，静置分层后，得乙酸乙酯萃取液；(9) 浓缩并干燥步骤 (7) 的乙酸乙酯萃取液，得纯化制品；(10) 以含磷酸二氢钾和乙醇的水溶解步骤 (9) 中的纯化制品，得纯化制品溶解液；(11) 将步骤 (10) 的纯化制品溶解液上样并吸附于Sephadex LH‑20凝胶；(12) 以低于15 % (v/v) 乙酸乙酯的水 (保持50 mmol/L以下的磷酸二氢钾和20 %( v/v) 的乙醇在水中浓度不变) 梯度洗脱，收集含目标单体化合物的洗脱液；(13) 浓缩步骤 (12) 的含目标单体化合物的洗脱液，得浓缩液；(14) 向步骤 (13) 的浓缩液中加入乙酸乙酯，充分振荡萃取，静置分层后，得乙酸乙酯萃取液；(15) 将步骤 (14) 的乙酸乙酯萃取液和水充分振荡，静置分层后，留取乙酸乙酯萃取液； (16) 浓缩步骤 (15) 的萃取液；和(17) 任选地干燥步骤 (16) 的产品，得目标单体化合物。...
【技术特征摘要】
1.一种具有苯骈罩酚酮结构化合物的纯化方法，包括：(1) 用含醋酸和乙醇的水溶解含有目标产物的粗品，过滤，得溶解液；(2) 将步骤 (1) 的溶解液吸附于微晶纤维素；(3) 用10 % (v/v) 以下的乙醇洗脱，收集洗脱液；(4) 将步骤 (3) 的洗脱液在减压条件下吸附于低取代羟丙基纤维素；(5) 用35 % (v/v) 以下的乙醇在减压条件下进行洗脱；(6) 用45-65 % (v/v) 的乙醇在减压条件下进行洗脱，并收集目标产物洗脱液；(7) 浓缩步骤 (6) 的目标产物洗脱液，获得浓缩液；(8) 向步骤 (7) 的浓缩液中加入乙酸乙酯，充分振荡萃取，静置分层后，得乙酸乙酯萃取液；(9) 浓缩并干燥步骤 (7) 的乙酸乙酯萃取液，得纯化制品；(10) 以含磷酸二氢钾和乙醇的水溶解步骤 (9) 中的纯化制品，得纯化制品溶解液；(11) 将步骤 (10) 的纯化制品溶解液上样并吸附于Sephadex LH-20凝胶；(12) 以低于15 % (v/v) 乙酸乙酯的水 (保持50 mmol/L以下的磷酸二氢钾和20 %( v/v) 的乙醇在水中浓度不变) 梯度洗脱，收集含目标单体化合物的洗脱液；(13) 浓缩步骤 (12) 的含目标单体化合物的洗脱液，得浓缩液；(14) 向步骤 (13) 的浓缩液中加入乙酸乙酯，充分振荡萃取，静置分层后，得乙酸乙酯萃取液；(15) 将步骤 (14) 的乙酸乙酯萃取液和水...
【专利技术属性】
技术研发人员：涂云飞，杨秀芳，张士康，朱跃进，谭蓉，王静，
申请(专利权)人：中华全国供销合作总社杭州茶叶研究所，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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