一种制备低分子降压肽的方法技术

本发明专利技术公开了一种制备低分子降压肽的方法。本发明专利技术的技术方案是以大豆分离蛋白液为原料,利用复合酶法制备低分子降压肽,即同时运用三种水解酶(碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶)来水解大豆分离蛋白,再将水解液通过活性炭吸附、超滤等纯化方法从中获取较纯的低分子大豆降压肽。本发明专利技术具有工艺简单，操作安全，成本较低的特点，非常适用于规模化大生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生化
，具体地说是以大豆分离蛋白液为原料，利用复合酶法制备低分子降压肽，即同时运用三种水解酶(碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶)来水解大豆分离蛋白，再将水解液通过活性炭吸附、超滤等纯化方法从中获取较纯的低分子大豆降压肽。
技术介绍
高血压是一种常见的心血管疾病，它发病率高，常伴有心脏、血管、肺以及肾脏等器官功能性或器质性改变，是引发心、脑、肾和眼血管等各种并发症和导致中风、促进动脉粥样硬化、冠心病的一个重要危险因子。高血压发病率在发达国家达到20%以上，世界各国的平均发病率为10%?20%，且人群分布广，包括老年人、中年人和儿童全世界每年因高血压死亡的人数达1200万。我国曾进行了三次全国性的高血压普查，1959年的发病率是5.11 %, 1979?1980年发病率为7.73 %, 1990?1991年发病率为11.26 %。目前，我国现有高血压患者己超过1.2亿人口。因此，治疗和预防高血压病是当今社会十分重要的课题。高血压一般有两种类型:原发性高血压和继发性的高血压，前者主要是由于周围小动脉血管口径变小或血液粘滞度增加，造成外用阻力过高所致；而血容量与心输出量的增高、血管的僵硬程度与血管的充盈程度均影响血压的变化；同时植物性神经系统对血压的调节作用也是一个重要因素。继发性的高血压，也叫症状性高血压，是在某些疾病过程中并发的血压升高，其成因主要有内分泌病、肾脏疾病、心脏功能异常等。血管紧张素转化酶(ang1tensinconverting enzyme., ACE)是一种含锌的二肽酶，能被氯离子激活并具有较宽的底物特异性。ACE广泛分布在哺乳动物的组织中。在肾素一血管紧张素系统(renin-ang1tensin system, RAS)和激肽释放酶一激肽系统(kallikrein-kinin system，KKS)中，ACE对机体血压和心血管功能起着重要的调节作用。抑制ACE的活性被认为是治疗高血压的一种重要而有效的方法。目前，大量高效、特异的ACE抑制剂在治疗高血压病和充血性心力衰竭中发挥着重要作用。食物蛋白来源丰富，方便易得，用食物蛋白来生产活性肽成本较低、安全性高、适合大规模生产。来源于食品的降压肽只对高血压患者起到降压的作用，对血压正常者无降压作用，不会产生降压过度的问题；这些肽用食用级的酶在温和条件下制得的，其安全性极高，无毒副作用；除了有降压的功能外，还同时具有抗氧化、促消化、降血糖、抗血小板凝集、增强人体免疫力等作用；具有较高的热稳定性、水溶性等优点，可作为功能因子添加到饮料、食品中去，市场前景极好。
技术实现思路
本专利技术的目的是生产较纯的低分子大豆降压肽。本专利技术的技术方案是:以大豆分离蛋白液为原料，利用复合酶法制备低分子降压肽，即同时运用三种水解酶(碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶)来水解大豆分离蛋白，再将水解液通过活性炭吸附、超滤等纯化方法从中获取较纯的低分子大豆降压肽。本专利技术具有工艺简单，操作安全，成本较低的特点，非常适用于规模化大生产。包括如下步骤: (1)将底物浓度为4%?6%的大豆分离蛋白溶液在85°C水浴加热预处理15min?30min; (2)待料液冷却到40°C?60 °C后，先加入E/S为6%?8%的碱性蛋白酶，pH 7.5?9.0条件下微波水浴加热10?20 min; (3)酶解后的料液中再加入E/S为8%?10%的中性蛋白酶，温度为50°C?60°C，pH7.5?9.0条件下酶解10?20 min ； (4)最后再加入E/S为9%?11%的胰蛋白酶，温度为50°C?60°C，pH7.5?9.0条件下酶解15?30 min ； (5)料液用4kDa?2kDa的超滤膜于40°C，0.1MPa?0.2MPa对料液超滤30min?50min ； (6)超滤透过液经沸水浴10?20min彻底灭酶处理后，再3000r?5000r/ min离心10?30min，收集上清液，真空冷冻干燥，即三酶水解大豆多肽。【具体实施方式】下面结合具体实施例对本专利技术作进一步说明。实施例1 以大豆分离蛋白液为原料，利用复合酶法制备低分子降压肽，即同时运用三种水解酶(碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶)来水解大豆分离蛋白，再将水解液通过活性炭吸附、超滤等纯化方法从中获取较纯的低分子大豆降压肽。包括如下步骤: (1)将底物浓度为4%的大豆分离蛋白溶液在85°C水浴加热预处理20min; (2)待料液冷却到40°C°(:后，先加入E/S为6%的碱性蛋白酶，pH 8.0条件下微波水浴加热10 min; (3)酶解后的料液中再加入E/S为8%的中性蛋白酶，温度为50°C，pH8.0条件下酶解10 min ； (4)最后再加入E/S为9%的胰蛋白酶，温度为50°C，pH8.0条件下酶解15 min ； (5)料液2kDa的超滤膜于40°C，0.1MPa?0.2MPa对料液超滤30min; (6)超滤透过液经沸水浴lOmin彻底灭酶处理后，再3000r/ min离心lOmin，收集上清液，真空冷冻干燥，即三酶水解大豆多肽。实施例2 (1)将底物浓度为5%的大豆分离蛋白溶液在85°C水浴加热预处理20min; (2)待料液冷却到50°C后，先加入E/S为7%的碱性蛋白酶，pH8.5条件下微波水浴加热15min; (3)酶解后的料液中再加入E/S为9的中性蛋白酶，温度为55°C，pH8.5条件下酶角军15min ； (4)最后再加入E/S为10%的胰蛋白酶，温度为55°C，pH8.5条件下酶解20 min ; (5)料液用3kDa的超滤膜于40°C，0.1MPa?0.2MPa对料液超滤40min ; (6)超滤透过液经沸水浴15min彻底灭酶处理后，再4000r / min离心20min，收集上清液，真空冷冻干燥，即三酶水解大豆多肽。实施例3 (1)将底物浓度为6%的大豆分离蛋白溶液在85°C水浴加热预处理30min; (2)待料液冷却到60°C后，先加入E/S为8%的碱性蛋白酶，pH9.0条件下微波水浴加热20 min; (3)酶解后的料液中再加入E/S为10%的中性蛋白酶，温度为60°C，pH9.0条件下酶解20 min ；(4)最后再加入E/S为11%的胰蛋白酶，温度为60°C，pH9.0条件下酶解30min ； (5)料液用4kDa的超滤膜于40°C，0.1MPa?0.2MPa对料液超滤50min; (6)超滤透过液经沸水浴20min彻底灭酶处理后，再5000r/min离心30min，收集上清液，真空冷冻干燥，即三酶水解大豆多肽。以上所述，仅是本专利技术的较佳实施例而已，并非是对本专利技术作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的
技术实现思路
加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本专利技术技术方案内容，依据本专利技术的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本专利技术技术方案的保护范围。【主权项】1.，其特征在于，该方法包括如下步骤: (1)将底物浓度为4%?6%的大豆分离蛋白溶液在85°C水浴加热预处理15min?30min; (2 )待料液冷却到40 °C?60 °C后，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备低分子降压肽的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：（1）将底物浓度为4%～6%的大豆分离蛋白溶液在85℃水浴加热预处理15min～30min;（2）待料液冷却到40℃～60℃后，先加入E/S为6%～8% 的碱性蛋白酶, pH 7. 5～ 9. 0 条件下微波水浴加热10～20 min;（3）酶解后的料液中再加入E/S为8%～10%的中性蛋白酶， 温度为50℃～60℃, pH 7. 5～9. 0 条件下酶解10～20 min；（4）最后再加入E/S为9%～11%  的胰蛋白酶，温度为 50℃～60℃, pH 7. 5～9. 0 条件下酶解15～30 min；（5）料液用4kDa～2kDa 的超滤膜于40℃， 0.lMPa～0.2MPa 对料液超滤30min～50min ；（6）超滤透过液经沸水浴10～20min彻底灭酶处理后，再3000r～5000r／min离心10～30min，收集上清液，真空冷冻干燥，即三酶水解大豆多肽。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘乃山，宋立明，刘翠珍，
申请(专利权)人：青岛康原药业有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37