一种以核桃粕为原料制备降压肽的方法技术

本发明专利技术涉及一种降压肽的制备方法，具体为一种核桃降压肽的制备方法。是通过以下制备方法得到的：以核桃粕为原料，经过醇洗后调溶液的pH10-11，离心，取上清液调pH4-5，离心，收集沉淀水洗至中性。用缓冲溶液将其配制成质量浓度为10%-20%的核桃蛋白溶液，搅拌均匀，调节pH8.0-9.0，然后加碱性蛋白酶在35-65℃中水解1-4h，水解过程中保持pH恒定，酶解液于 90-95℃灭酶10min。然后调节酶解液pH5.5-7.5，再加风味蛋白酶，在35-65℃中水解1-4h，水解过程中保持pH恒定，酶解液于90-95℃灭酶10min，然后离心，取上清液，调节pH为中性，酶解液通过超滤再经过大孔树脂处理后得ACE抑制率达73.91%，最后经冷冻干燥得到核桃降压肽。属于核桃粕的综合开发利用，实现了废物利用的目的。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及一种降压肽的制备方法，具体为一种核桃降压肽的制备方法。是通过以下制备方法得到的：以核桃粕为原料，经过醇洗后调溶液的pH10-11，离心，取上清液调pH4-5，离心，收集沉淀水洗至中性。用缓冲溶液将其配制成质量浓度为10%-20%的核桃蛋白溶液，搅拌均匀，调节pH8.0-9.0，然后加碱性蛋白酶在35-65℃中水解1-4h，水解过程中保持pH恒定，酶解液于 90-95℃灭酶10min。然后调节酶解液pH5.5-7.5，再加风味蛋白酶，在35-65℃中水解1-4h，水解过程中保持pH恒定，酶解液于90-95℃灭酶10min，然后离心，取上清液，调节pH为中性，酶解液通过超滤再经过大孔树脂处理后得ACE抑制率达73.91%，最后经冷冻干燥得到核桃降压肽。属于核桃粕的综合开发利用，实现了废物利用的目的。【专利说明】
本专利技术涉及一种降压肽的制备方法，具体为一种核桃降压肽的制备方法。特指以核桃柏为原料，利用分步酶解技术提取降压肽方法，属于核桃柏的综合开发利用。
技术介绍
高血压是一种常见的心脑血管疾病，会引起心血管、大脑、肾脏的病变。降压肽是一种ACE抑制剂，通常用于高血压患者的治疗。目前，对高血压患者的治疗通常使用化学合成的药物，然而，这些合成药物有一些副作用，包括咳嗽和皮瘆。 食源性降压肽来源于天然植物，无副作用，易被人体吸收，且食物蛋白来源丰富，方便易得，用食物蛋白来生产活性肽，成本较低、安全性高、适合大规模生产。来源于食品的降压肽只对高血压患者起到降压的作用，对血压正常者无降压作用，不会产生降压过度的问题。这些肽是用食用级的酶在温和条件下制得的，其安全性极高，无毒副作用。除了有降压的功能外，食品降压肽还同时具有抗氧化、促消化、降血糖、抗血小板凝集、增强人体免疫力等作用，此外，还具有较高的热稳定性、水溶性等优点，可作为功能因子添加到饮料、食品中去，市场前景极好。 目前，关于核桃柏为原料制备的降压肽尚未见报道。我国核桃的种植和产量居世界首位。核桃柏是核桃经过提取油后的副产物，含有29.65%蛋白质，提油后的核桃柏多数被用作饲料或丢弃，资源造成了一定的浪费，核桃降压肽的制备可以促进核桃的深加工，实现资源的综合利用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种原料来源广泛、制造成本低、高附加值、降血压性高的核桃降压肽的制备方法。 为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术措施:一种以核桃柏为原料制备降压肽的方法，其步骤如下:1、以核柏为原料，按照5?10%(W/V)比例加入95%乙醇，搅拌，过滤，把滤饼烘干挥除溶剂。滤饼按照1:10-1:30 (W/V)的料液比加水配制蛋白质溶液，用氢氧化钠溶液调节蛋白液的 pH 值到 10.0-11.0，保温 500C -53。。，搅拌 1.0-1.5h 后于 5000-7000r/min 离心10_15min，取上清液，调节 pH 至 4.0-5.0，揽拌 1-1.5h，于 5000-7000r/min 离心 10_15min，收集沉淀并水洗，调节pH至中性后冻干；2、用缓冲溶液配制成底物质量浓度为10-20g/L的核桃蛋白溶液，搅拌均匀，调节PH8.0-9.0，然后加碱性蛋白酶4000-10000U/g，控制溶液温度为35_65°C水解l_4h，水解过程中保持pH恒定，酶解液采用90-95°C加热煮沸lOmin，然后调节pH5.5-7.5，然后加风味蛋白酶4000-10000U/g，控制溶液温度35-65°C水解l_4h，水解过程中保持pH恒定，酶解液采用90?95°C煮沸灭酶lOmin，然后于5000-8000r/min离心10_15min，取上清液，调节pH为中性； 3、将上述滤液先用孔径为0.45um的微孔滤膜进行过滤，然后用l_3KDa超滤膜对过滤好的酶解液进行超滤，将滤液用DA201-C大孔树脂脱盐后浓缩，最后干燥。 本专利技术所使用的碱性蛋白酶和风味蛋白酶的活力分别为:7.1XlO4 U/g, 2.0XlO4 U/g ο 与现有技术相比，本专利技术方法的优点和有益效益如下:1、原料为一种食品工业副产物核桃柏，酶解后其应用价值和加工性能大大增加，可以提高核桃的附加值；2、实施设备简便且经济，适合规模化工业生产；3、采用本专利技术的膜分离技术，对液态物料进行分离、浓缩和纯化，均在常温下操作、无相态变化、高效节能，并且生产过程中不产生污染；4、本专利技术生产周期短、成本低、不产生任何有毒有害物质，安全，无毒副作用，可广泛用于化妆品、食品、药品等领域。 【具体实施方式】 以下结合实施例对本专利技术的具体实施作进一步说明，但本专利技术的实施和保护范围不限于此:实施例1称取2g的核桃蛋白，用硼酸-硼砂缓冲溶液调节其pH为8.5，定容到100ml，搅拌均匀，按加酶量3600U/g添加碱性蛋白酶，在55°C水浴锅中水解2h，并保持pH恒定，酶解液于水浴锅中90°C 1min处理，然后调节pH为6.5按加酶量2400U/g添加风味蛋白酶，保持溶液50°C水解3h，并保持pH恒定，酶解液于90°C加热lOmin，酶解液的ACE抑制率为64.06%。 实施例2称取1g的核桃蛋白，用硼酸-硼砂缓冲溶液调节其pH为8.5，定容到500ml，搅拌均匀，按加酶量5000U/g添加碱性蛋白酶，保持溶液温度为55°C下水解3h，并保持pH恒定，酶解液在90°C煮沸15min，然后调节pH为6.5，加酶量3000U/g添加风味蛋白酶，保持溶液温度为50°C水解3.5h，并保持pH恒定，酶解液于90°C加热lOmin，酶解液的ACE抑制率为69.91%o 实施例3称取4g的核桃蛋白，用硼酸-硼砂缓冲溶液调节其pH为8.5，定容到100ml，搅拌均匀，按加酶量2000U/g添加一种蛋白酶，保持溶液温度为55°C水解2h，并保持pH恒定，酶解液在沸水加热1min灭酶，然后调节pH为6.5，按加酶量4500U/g添加另一种蛋白酶，保持溶液温度为50°C水解3h，并保持pH恒定，酶解液于90°C加热lOmin，酶解液的ACE抑制率为71.72%。 申请人:声明，本专利技术通过上述实施例来说明本专利技术的详细特征以及方法，但本专利技术并不局限于上述详细特征以及方法，即不意味着本专利技术必须依赖上述详细特征以及方法才能实施。所属
的技术人员应该明了，对本专利技术的任何改进，对本专利技术所选用材料和步骤的等效替换以及辅助材料和步骤的增加、具体方式的选择等，均落在本专利技术的保护范围和公开范围之内。【权利要求】1.一种以核桃柏为原料制备降压肽的方法，其特征在于包括如下步骤: (1)核桃柏经粉碎后过60目筛，加入一定量的正己烷搅拌均匀后抽滤，取滤渣重复用正己烷提取至滤液无色透明时收集滤渣，然后挥除溶剂； (2)滤饼加入一定量的95%乙醇溶液搅拌均匀后过滤，将滤饼中的溶剂挥干；取一定量的滤饼加水搅拌均匀，调节蛋白液的pH值到10-11.0，于50-53°C搅拌1.0-1.5h后于室温下5000-7000r/min离心15min，取上清液，调节溶液pH至4.0-5.0，搅拌1-1.5h，于室温下5000-7000r/min离心15min，收集沉淀并水洗至中性，然后冻干； 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种以核桃粕为原料制备降压肽的方法，其特征在于包括如下步骤：（1）核桃粕经粉碎后过60目筛，加入一定量的正己烷搅拌均匀后抽滤，取滤渣重复用正己烷提取至滤液无色透明时收集滤渣，然后挥除溶剂；（2）滤饼加入一定量的95%乙醇溶液搅拌均匀后过滤，将滤饼中的溶剂挥干；取一定量的滤饼加水搅拌均匀，调节蛋白液的pH值到10‑11.0，于50‑53℃搅拌1.0‑1.5h后于室温下5000‑7000r/min离心15min，取上清液，调节溶液pH至4.0‑5.0，搅拌1‑1.5h，于室温下5000‑7000r/min离心15min，收集沉淀并水洗至中性，然后冻干；（3）将上述冻干粉用缓冲溶液配制成质量浓度为10‑20g/L的核桃蛋白溶液，搅拌均匀，调节pH8.0‑9.0，然后加碱性蛋白酶4000‑10000U/g，保持35‑65℃水解1‑4h，水解过程中保持pH恒定，酶解液采用90‑95℃ 煮沸灭酶10min，然后调节pH5.5‑7.5，再加风味蛋白酶4000‑10000U/g，保持35‑65℃水解1‑4h，水解过程中保持pH恒定，酶解液采用90‑95℃煮沸灭酶10min，然后5000‑8000r/min离心10‑15min，取上清液，调节pH为中性；（4）将上述酶解液用孔径为0.45um的微孔滤膜进行过滤，将滤液在经过DA201‑C大孔树脂脱盐，然后经冻干得到核桃降压肽。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛晓英，吴庆智，卢娣，
申请(专利权)人：石河子大学，
类型：发明
国别省市：新疆;65