一种海蜇降压肽的制备方法，包括：对海蜇的去金属离子处理，并依次进行匀浆、酶解、灭酶、浓缩、超滤及冷冻干燥等步骤，最终获得纯化的海蜇降压肽粉末。本方法结合现代酶工程技术，提供了一种新的高效的海蜇降压肽的生产途径，提高了海蜇资源的利用效率，具有操作简单、提取率高、产物活性保存好的特点，海蜇降压肽生产成本降低。其充分利用海蜇丰富的蛋白质资源，通过去金属离子处理将海蜇体内各种金属离子基本去除干净，使后续酶解和应用更加安全。用高血压SHR大鼠模型进行海蜇降压肽降压活性试验结果显示：本发明专利技术组与空白对照组相比差异有显著性，本方法制备的海蜇降压肽具有与阳性对照卡托普利相似的降血压活性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种多肽混合物的制备方法，尤其涉及。
技术介绍
高血压是对人类健康危害严重的一种疾病，也是引起心血管疾病的主要因素，其危害是造成脑、心、肾等重要器官的损害。脑卒中和冠心病是高血压最严重的并发症。资料表明，世界各国的平均发病率为10% 20%，每年因高血压死亡的人数达1200万。目前，我国现有高血压患者已超过1.2亿人口。因此，治疗和预防高血压病是当今社会十分重要的课题。现阶段高血压病的医学研究主要集中在ACE的抑制物质(ACEI)方面。目前， 大多用化学合成的ACEI如卡托普利(Captopril)、依那普利(Enalapril)、赖诺普利 (Listinopril)等药物来治疗高血压。这类药物具有作用时间短，停药后血压易反弹等缺点，以及引起咳嗽、味觉丧失、肾脏损伤及血管神经性水肿等副作用。血管紧张素源(RAS)和激肽源(KXS)在血压调节方面是一对相互拮抗的体系，而血管紧张素转化酶(ACE)则对两者起到调控作用，现在科学研究普遍认为，ACE过高是导致高血压病的根本病因。所以要从根本上控制甚至治疗高血压病，必须要从一定程度上抑制 ACE的分泌。海蜇体内含有较高的蛋白质及钙、磷、碘、铁等无机盐，素有“水产瑰宝”之美称，中医学认为海蜇具有扩张血管，降低血压之功效。近代研究亦表明，海蜇具有治疗高血压，改善心血管功能作用。有关研究资料报道，海蜇中含有一种降压短肽，被人体吸收后能发挥降血压作用。国内外已有报道利用海蜇或其他海洋动植物资源提取得到降压肽，但得到的产物基本是粗体蛋白质或者离心上清液，降压肽部分得率低、纯度低以及活性保存不好，作为降压产品原料存在诸多不足。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术提供一种提取效率较高、产品活性保存较好、成本低， 且操作简单的海蜇降压肽的制备方法。本专利技术海蜇降压肽的制备方法，包括以下步骤(1)、去除金属离子，将盐渍海蜇和超纯水按照1:1-2的比例混合，采用超纯水机抽取去离子水去除海蜇体内的各种金属离子；(2)、将去除金属离子后的海蜇浙干水分，破碎并搅拌，然后用勻浆机勻浆；(3)、对步骤(2)得到的海蜇浆料按照8000U/g标准加入中性蛋白酶制作酶解体系，在温度40-60°C下，酶解1-2小时；酶解后的酶解液送入发酵罐进行灭酶灭菌，将灭酶灭菌后的酶解液冷却至室温，离心，收集上清液；将该上清液用滤纸过滤后置于旋转蒸发仪中进行真空浓缩，得浓缩液；(4)、在步骤(3)所得浓缩液中加入体积分数为95%的乙醇溶液直至体系中乙醇体积分数达50%，静置，离心，收集上清液；(5)、取步骤(4)所得的上清液用阻抗值不低于18的超纯水稀释50倍，加入超滤系统的超滤杯中，安装截留分子量为2. 5kDa的超滤膜包，进行超滤，收集滤出液并浓缩，冷冻干燥后得成品。其中，所述步骤(1)去除金属离子步骤以下1)从超纯水机抽取去离子水，所述去离子水阻抗值不低于10，按照盐渍海蜇比超纯水为1:2的质量比将两者混合，搅拌30分钟；2)再从超出水机抽取去离子水，所述去离子水阻抗值不低于15，按照盐渍海蜇比超纯水为1:2的质量比将两者混合，搅拌30分钟；及3)三次从超纯水机抽取去离子水，所述去离子水阻抗值不低于18，按照盐渍海蜇比超纯水为1:1的质量比将两者混合，搅拌15分钟。所述步骤(2)中，破碎后海蜇在勻浆机中以4500-6000r/min勻浆8_20分钟。所述步骤(2)中勻浆后，还将勻浆好的海蜇浆料用阻抗值不低于18的超纯水稀释 100倍，在80°C下加热10分钟，再进行酶解。所述步骤(2)勻浆后，还可以将勻浆后的海蜇浆料在干燥机内45-55°C通风干燥2 小时，制成海蜇粉末使用。所述步骤(3)中离心速率为4000r/min，离心时间为15分钟。所述步骤(3)中将过滤后的上清液通过旋转蒸发仪浓缩至原体积的1/4。所述步骤(5)中超滤压力为 20 30psig。本专利技术海蜇降压肽的制备方法充分利用海蜇丰富的蛋白质资源，通过去金属离子处理将海蜇体内各种金属离子基本去除干净，使后续的酶解和应用更加安全。本专利技术制备方法结合现代酶工程技术，提供了一种新的高效的海蜇降压肽的生产途径，提高了海蜇资源的利用效率，具有操作简单、提取率高、产物活性保存好的特点，同时降低了海蜇降压肽的生产成本。用高血压SHR大鼠模型进行海蜇降压肽降压活性试验结果显示本专利技术组与空白对照组相比差异有显著性，本方法制备的海蜇降压肽具有与阳性对照卡托普利相似的降血压活性。具体实施例方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步的阐述和说明。实施例1去除海蜇体内的各种金属离子首先采用超纯水机抽取去离子水，要求阻抗值不低于 10，按照盐渍海蜇比超纯水为1:2的质量比将两者混合，搅拌30分钟；再从超纯水机抽取去离子水，要求阻抗值不低于15，按照盐渍海蜇比超纯水为1 2的质量比将两者混合，搅拌30 分钟；最后从超纯水机抽取去离子水，要求阻抗值不低于18，按照盐渍海蜇比超纯水为1:1 的质量比将两者混合，搅拌15分钟。将去除金属离子后的海蜇浙干水分，放到组织绞肉机内绞碎；将绞碎的海蜇投放到勻浆机中，以5000r/min勻浆10分钟。将勻浆好的海蜇浆料用超纯水(超纯水的阻抗值不低于18)稀释100倍，在80°C 下加热10分钟；按照8000U/g的标准加入中性蛋白酶，充分搅拌均勻，在40°C下酶解2小时；酶解完成后，将得到的酶解液加热至沸腾并保持10分钟灭酶，然后将其在4000r/min下离心15分钟，收集上清液。将该上清液用用滤纸过滤后置于旋转蒸发仪里进行真空浓缩， 直至原体积的1/4，得浓缩液。在所得浓缩液中加入体积分数为95%的乙醇溶液直至体系中乙醇体积分数达到 50%，静置12小时，离心，收集上清液。取收集的上清液用超纯水(阻抗值不低于18)稀释50倍，加入超滤系统的超滤杯中，安装截留分子量为2. 5kDa的超滤膜包，控制压力在20psig下进行超滤，收集滤出液并浓缩，冷冻干燥后得到纯化的海蜇降压肽粉末。实施例2先将盐渍海蜇进行预处理，去除海蜇体内的各种金属离子，从超纯水机抽取去离子水， 要求阻抗值不低于10，按照盐渍海蜇比超纯水为1:2的质量比将两者混合，搅拌30分钟； 再从超纯水机抽取去离子水，要求阻抗值不低于15，按照盐渍海蜇比超纯水为1:2的质量比将两者混合，搅拌30分钟；最后从超纯水机抽取去离子水，要求阻抗值不低于18，按照盐渍海蜇比超纯水为1:1的质量比将两者混合，搅拌15分钟。将海蜇取出浙干水分，放到组织绞肉机内绞碎；将绞碎的海蜇投放到勻浆机中，以 5000r/min勻浆10分钟；勻浆后的海蜇浆料在干燥机内50°C通风干燥2小时，直至干燥成海蜇粉末，保存备用。将处理好的海蜇粉末，加入8000U/g中性蛋白酶配置成混悬液，在50°C下酶解2小时。酶解完成后，将酶解液加热至沸腾并保持10分钟灭酶，然后将其在4000r/min下离心 15分钟，收集上清液。将该上清液用用滤纸过滤后置于旋转蒸发仪里进行真空浓缩，直至原体积的1/4，得浓缩液。在所得浓缩液中加入体积分数为95%的乙醇溶液直至体系中乙醇体积分数达到 50%，静置12小时，离心，收集上清液。取收集的上清液用超纯水(阻抗值不低于18)稀释50倍，加入超滤系统的超滤杯中，安装截留分本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种海蜇降压肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（１）、去除金属离子，将盐渍海蜇和超纯水按照１：１－２的比例混合，采用超纯水机抽取去离子水去除海蜇体内的各种金属离子；（２）、将去除金属离子后的海蜇沥干水分，破碎并搅拌，然后用匀浆机匀浆；（３）、对步骤（２）得到的海蜇浆料按照８０００Ｕ／ｇ标准加入中性蛋白酶制作酶解体系，在温度４０－６０℃下，酶解１－２小时；酶解后的酶解液送入发酵罐进行灭酶灭菌，将灭酶灭菌后的酶解液冷却至室温，离心，收集上清液；将该上清液用滤纸过滤后置于旋转蒸发仪中进行真空浓缩，得浓缩液；（４）、在步骤（３）所得浓缩液中加入体积分数为９５％的乙醇溶液直至体系中乙醇体积分数达５０％，静置，离心，收集上清液；及（５）、取步骤（４）所得的上清液用阻抗值不低于１８的超纯水稀释５０倍，加入超滤系统的超滤杯中，安装截留分子量为２．５ｋＤａ的超滤膜包，进行超滤，收集滤出液并浓缩，冷冻干燥后得成品。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：林靖善，胡光耀，
申请(专利权)人：李亚有，
类型：发明
国别省市：44
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。