一种合成帕瑞肽的方法技术

本发明专利技术涉及医药合成领域，公开了一种合成帕瑞肽的方法。所述方法将N端和C端有保护基的赖氨酸在有机碱作用下与树脂偶联，得到肽树脂1；按照帕瑞肽线性C端到N端的氨基酸顺序，从肽树脂1出发，在缩合试剂和活化试剂作用下，将其余保护氨基酸进行逐一延伸偶联，每次延伸偶联后均得到对应肽树脂，完成偶联后去除保护基，在缩合试剂和活化试剂作用下进行环化，最终获得帕瑞肽树脂，然后酸解获得帕瑞肽粗品；帕瑞肽粗品纯化得到帕瑞肽纯品。本发明专利技术选择合适的合成方案，选择恰当原料直接完成羟脯氨酸的偶联环节，并优化了整个合成工艺，调整酸解液、偶联试剂以及树脂的组合搭配，大幅提高了帕瑞肽粗品的纯度，具有较高的总收率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医药合成领域，具体涉及一种合成帕瑞肽的方法。
技术介绍
帕瑞肽(Pasireotide)为一种生长激素抑制剂类似物，可通过与其受体结合抑制ACTH的释放从而减少皮质醇分泌。帕瑞肽为6环肽，结构中有6个氨基酸残基，氨基酸序列如下：Cyclo[Tyr(Bzl)1-Phe2-Hyp(2-aminoethylcarboxyl)3-Phg4-D-Trp5-Lys6]帕瑞肽结构式为：帕瑞肽由瑞士诺华制药有限公司制造。2012年4月25日，帕瑞肽已获欧洲药品管理署(EMA)下属人用药品委员会(CHMP)批准用于治疗无法手术或手术治疗失败的成人库欣病患者。帕瑞肽的安全性和有效性是通过一项前瞻性、随机、双盲的Ⅲ期临床试验进行评估的，纳入162名尿游离皮质醇(UFC)水平为正常上限值的1.5倍且无法进行手术治疗的库欣病患者，患者随机接受帕瑞肽900μg或600μg皮下注射,6个月后，900μg治疗组患者UFC水平达到主要终点。结果显示，试验中接受帕瑞肽治疗的患者24小时尿量中皮质醇水平降低，这一降低在启动该药治疗后的一个月时即可见到，有20％的患者的皮质醇水平可降至正常范围。国内外已有关于帕瑞肽制备方法的，中国专利CN 1446229A采用固相方法得到线性保护肽，在液相中环化，酸解去保护，但是液相环化收率低，严重地影响了产品总收率，大幅度增加了产品的生产成本。中国专利CN 103641894A虽然改善了环化方法，但在制备线性保护肽过程中使用了侧链没有保护的羟脯氨酸，再用Boc-NH-C2H4-NH-COOH与羟脯氨酸的侧链羟基反应，其同样会产生侧链杂质而影响帕瑞肽的收率和品质。另外，该方案在其他合成步骤的设置不够合理也是造成收率和纯度不高的原因之一。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种合成帕瑞肽的方法，使得所述方法能够提高帕瑞肽粗品的纯度。本专利技术的另一个目的在于提供一种合成帕瑞肽的方法，使得所述方法能够提高帕瑞肽的总收率。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种合成帕瑞肽的方法，包括以下步骤：步骤1、N端和C端有保护基的赖氨酸在有机碱作用下与树脂进行偶联，得到肽树脂1；步骤2、按照帕瑞肽线性肽氨基酸序列C端到N端的顺序，从肽树脂1出发，在缩合试剂和活化试剂作用下，将其余保护氨基酸进行逐一延伸偶联，每次延伸偶联后均得到对应的肽树脂，完成所有保护氨基酸的偶联后去除保护基，在缩合试剂和活化试剂作用下进行环化，最终获得帕瑞肽树脂，然后酸解获得帕瑞肽粗品；其中，所述其余保护氨基酸包含Fmoc-Hyp(Boc-(2-aminoethyl)carboxyl)；步骤3、帕瑞肽粗品纯化得到帕瑞肽纯品。本专利技术所述帕瑞肽线性肽的氨基酸序列为本领域技术人员所公知，具有如下结构：Tyr(Bzl)1-Phe2-Hyp(2-aminoethylcarboxyl)3-Phg4-D-Trp5-Lys6本专利技术针对现有技术中采用的合成工艺易造成帕瑞肽总收率以及粗品纯度较低的缺陷，特别选择了Fmoc-Hyp(Boc-(2-aminoethyl)carboxyl)作为原料，并优化了整个合成工艺，调整酸解液、偶联试剂以及树脂的组合搭配，解决了技术问题。本专利技术所述方法既可以采用固相合成，也可以采用液相合成。本专利技术所述保护基是在氨基酸合成领域常用的保护氨基酸主链以及侧链上氨基、羧基等干扰合成的基团的保护基团，防止氨基、羧基等在制备目标产物过程中发生反应，生成杂质，对于本专利技术中需要保护侧链的氨基酸来说，本领域技术人员公知其侧链结构以及知晓采用常用保护基来保护氨基酸侧链上的氨基、羧基等基团，例如，本专利技术通过Boc保护基保护D-Trp的侧链，通过All保护赖氨酸的C端(即羧基端)。此外，在本专利技术所述方法涉及的保护氨基酸中，N端均优选通过Fmoc保护基进行保护。被保护基保护的氨基酸称为保护氨基酸。作为优选，所述其余保护氨基酸为Fmoc-D-Trp(Boc)、Fmoc-Phg、Fmoc-Hyp(Boc-(2-aminoethyl)carboxyl)、Fmoc-Phe和Fmoc-Tyr(Bzl)。作为优选，所述去除保护基为去除肽树脂N端、C端保护基。在除去C端All保护基时通过四三苯基膦钯和苯硅烷除去，两者摩尔比例为1:10。作为优选，所述酸解采用由体积百分比为80-95％的TFA、体积百分比为1-10％的EDT、体积百分比为0-2％的Tis、余量为水组成的混合酸解液酸解。作为优选，步骤1所述N端保护基为Fomc保护基，C端保护基为All保护基。作为优选，所述树脂为2-CTC树脂。作为优选，步骤1所述N端和C端有保护基的赖氨酸和树脂的摩尔比为1-6:1，更优选为2.5-3.5:1，最优选为3:1。作为优选，所述树脂的取代值为0.2-1.2mmol/g树脂，更优选为0.4-0.6mmol/g树脂。作为优选，所述缩合试剂优选为N,N-二异丙基碳二亚胺(DIC)、N,N-二环己基碳二亚胺(DCC)，六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷/有机碱(PyBOP/有机碱)、2-(7-氮杂-1H-苯并三氮唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯/有机碱(HATU/有机碱)、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐/有机碱(HBTU/有机碱)、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯/有机碱(TBTU/有机碱)中的一种。所述缩合试剂的摩尔用量优选为肽树脂中氨基总摩尔数的1～6倍，更优选为2.5～3.5倍，最优选为3倍。需要说明的是，所述PyBOP/有机碱、HATU/有机碱、HBTU/有机碱、TBTU/有机碱，在本专利技术中属于四种双体系的缩合试剂，即PyBOP、HATU、HBTU在使用时需要分别和有机碱组合在一起成为一种缩合试剂使用，其中所述有机碱和PyBOP、HATU、HBTU、TBTU的摩尔比优选为为1.3-3.0:1，更优选为1.3-2:1。作为优选，所述有机碱为N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)、三乙胺(TEA)或N-甲基吗啡啉(NMM),更优选为DIPEA。作为优选，所述活化试剂为1-羟基苯并三唑(HOBt)或N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑(HOAt)。所述活化试剂的用量优选为肽树脂中氨基总摩尔数的1～6倍，更优选为2.5～3.5倍，最优选为3倍。作为优选，所述环化和偶联的反应溶剂均采用DMF。本发本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种合成帕瑞肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、N端和C端有保护基的赖氨酸在有机碱作用下与树脂进行偶联，得到肽树脂1；步骤2、按照帕瑞肽线性肽氨基酸序列C端到N端的顺序，从肽树脂1出发，在缩合试剂和活化试剂作用下，将其余保护氨基酸进行逐一延伸偶联，每次延伸偶联后均得到对应的肽树脂，完成所有保护氨基酸的偶联后去除保护基，继续在缩合试剂和活化试剂作用下进行环化，最终获得帕瑞肽树脂，然后酸解获得帕瑞肽粗品；其中，所述其余保护氨基酸包含Fmoc‑Hyp(Boc‑(2‑aminoethyl)carboxyl)；步骤3、帕瑞肽粗品纯化得到帕瑞肽纯品。

【技术特征摘要】
1.一种合成帕瑞肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1、N端和C端有保护基的赖氨酸在有机碱作用下与树脂进行偶联，
得到肽树脂1；
步骤2、按照帕瑞肽线性肽氨基酸序列C端到N端的顺序，从肽树脂1
出发，在缩合试剂和活化试剂作用下，将其余保护氨基酸进行逐一延伸偶联，
每次延伸偶联后均得到对应的肽树脂，完成所有保护氨基酸的偶联后去除保
护基，继续在缩合试剂和活化试剂作用下进行环化，最终获得帕瑞肽树脂，
然后酸解获得帕瑞肽粗品；其中，所述其余保护氨基酸包含
Fmoc-Hyp(Boc-(2-aminoethyl)carboxyl)；
步骤3、帕瑞肽粗品纯化得到帕瑞肽纯品。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述酸解采用由体积百分比
为80-95％的TFA、体积百分比为1-10％的EDT、体积百分比为0-2％的Tis、
余量为水组成的混合酸解液酸解。
3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤1所述N端保护基为
Fomc保护基，C端保护基为All保护基。
4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述树脂为2-CTC树脂。
5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤1所述N端和C端有保
...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭德文，曾德志，董华建，文永均，
申请(专利权)人：成都圣诺生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51