一种TAFI含量的体外检测试剂盒及其检测方法技术

一种TAFI含量的体外检测试剂盒，其特征在于：所述该TAFI含量的体外检测试剂盒组成包括：含有与TAFI特异性结合的单克隆抗体纳米金标记物R试剂；用于制作计算待检样品中的TAFI抗原含量的标准曲线的TAFI标准品和TAFI质控品。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及一种TAFI含量的体外检测试剂盒及其检测方法。所述该TAFI含量的体外检测试剂盒组成包括：含有与TAFI特异性结合的单克隆抗体纳米金标记物R试剂；用于制作计算待检样品中的TAFI抗原含量的标准曲线的TAFI标准品和TAFI质控品；体外检测试剂盒的体外检测方法，利用纳米金与抗体结合的生物特性，与传统生化检测方法相结合，将其用于TAFI含量的体外检测，开辟了TAFI新的体外诊断学方法，提高了TAFI体外检测的灵敏度。它解决了现有技术存在的设备昂贵，提高相关疾病的检出率和准确率，减少被检者不必要的痛苦和医疗费用支出，提高被检者的生存质量。【专利说明】一种TAFI含量的体外检测试剂盒及其检测方法
本专利技术涉及一种用于临床预测心脑血管疾病等发生可能性的检测凝血酶激活的纤溶抑制物(thrombin-activatabIe fibrinolysis inhibitor,简称TAFI)含量的新方法，特别是一种TAFI含量的体外检测试剂盒及其检测方法。
技术介绍
众所周知，血栓性疾病是一类严重影响健康的疾病，尤其是心脑血管栓塞性疾病已成为我国人口死亡的首位原因。由于血栓性疾病的临床表现千差万别，诊断和治疗往往非常复杂，因此，早期发现、早期治疗尤为重要。目前，血栓性疾病的检查方法主要有心电图、超声心动图、胸部X射线、血压监测、头颅X射线、脑CT扫描、脑MRI检查、DSA、MRA、经颅多普勒超声检查等。射线类检查会对人体产生一定程度的电离辐射，组织血流灌注的功能性成像检查方法较多，这些检查设备通常比较昂贵，增加了成本，有的还需特殊装备，成像时间较长，无法短期获得结果。在医学检验中，尚缺乏一种简单、快捷、准确的用于临床预测心脑血管疾病等发生可能性的检测方法，不利于对疾病的早期发现，早期治疗。据相关文献报导，TAFI具有被凝血酶激活后下调纤溶活性的功能，是一种存在于血浆中的含金属Zn的羧肽酶前体，又被称为血浆羧肽酶原B、血浆羧肽酶原U、血浆羧肽酶原R。TAFI前体由肝脏合成，是一条包含423个氨基酸的单链糖蛋白，在循环至血液中的过程中，切掉N端22个氨基酸的信号肽，形成401个氨基酸的56kDa的TAFI ；TAFI也存在于血小板内，血小板激活时释放至血液。凝血酶、胰蛋白酶、纤溶酶等蛋白水解酶可以作用于TAFI的Arg92，将其切割成20kDa的激活肽和具有羧肽酶活性的36kDa的TAFIa。TAFIa具有切除部分降解的纤维蛋白C端Arg或Lys的能力，使纤溶蛋白酶原不能被激活，因而具有下调纤溶系统的功能，但其构象具有高度不稳定性。TAFI于1988年被首次发现，活化后具有内在不稳定性，通常在37°C条件下孵育2h失去活性，并且能特异性地分解底物上精氨酸。后经多位科技工作者对其cDNA进行分离以及测定，并利用纤溶酶原-琼脂糖柱层析的方法从血浆中分离、提纯其酶原蛋白pro-pCPB，进一步分析发现TAFI通过凝血酶激活后具有羧肽酶活性，发挥纤溶抑制作用。TAFI与心脑血管疾病有一定关系。动脉粥样硬化(atherosclerosis,简称AS)是缺血性心脑血管疾病(如心绞痛、心肌梗死、脑卒中等)共同的病理基础,也是导致血管内血栓形成的主要原因。近几年的研究表明，AS的发生发展与炎症、凝血-纤溶调节系统密切相关。目前研究表明，TAFI通过降低纤溶活性可促进静脉血栓的形成，血浆高TAFI水平能增加静脉血栓事件。目前，用来检测TAFI水平的方法主要有两类，一类是通过测定酶活力的方法间接测定TAFI含量，即利用凝血酶和凝血酶调节蛋白激活TAFIdIUS TAFIa的酶活力；另一类是免疫学方法，包括酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)和火箭免疫电泳。其中，夹心ELISA法检测TAFI抗原是目前相对成熟的检测方法，检测灵敏度高，特异性强，准确性好，检测方法安全易行。2005年出现了两种针对TAFI的特异性单克隆抗体，成功运用ELISA方法检测TAF1、TAFIa和失活的TAFI。但这些方法因自身存在一定的缺陷，都没有成为国际公认的TAFI参照标准法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种TAFI含量的体外检测方法，它解决了现有技术存在的设备昂贵，检测时间较长等缺陷，与其它检测方法相比，具有操作简便、快捷、成本低廉，诊断敏感，检出限低等优点，作为用于临床预测心脑血管疾病的辅助诊断，可显著提高疾病的检出率和准确率，有利于疾病的早期发现，早期治疗；减少被检者不必要的痛苦和医疗费用支出，提高被检者的生存质量。一种TAFI含量的体外检测试剂盒，所述该TAFI含量的体外检测试剂盒组成包括:含有与TAFI特异性结合的单克隆抗体纳米金标记物R试剂；用于制作计算待检样品中的TAFI抗原含量的标准曲线的TAFI标准品和TAFI质控品，用于解释试剂盒使用方法的说明书。所述纳米金标记物R试剂是针对重组人TAFI抗原所制备的鼠抗人单克隆抗体经纳米金标记所得，鼠抗人单克隆抗体包含3B1和4E7，两种鼠抗人单克隆抗体纳米金结合物的混合比例为1:2。所述3B1为特异性结合TAFI和失活的TAFI，所述4E7仅与TAFI结合。所述生化仪设置为单试剂检测时，纳米金标记物R试剂的组分是偶联了 3B1和4E7两种抗体的纳米金及其保存液。所述生化仪设置为双试剂检测时，纳米金标记物R试剂的组分包含R1、R2试剂，Rl试剂是单4E7偶联的纳米金及其保存液，R2试剂是单3B1偶联的纳米金及其保存液。所述保存液是由TrisO-0.5% ；pvp400-l% ;BSA0_1% ；PEG200000-0.5% ;10% 蔗糖0-5% ；TWEEN200-0.8% ;叠氮钠 0-0.02%。，NaCl0.85-1.5%.PEG60001-4%,余量为水组成。本专利技术所采用的技术方案的具体操作步骤如下:步骤一采集人个体生物样品立即于30分钟内，4°C条件下离心取上清作为待检样品，置于冰盒I小时内使用或_20°C保存备用；步骤二利用体外检测试剂盒，对待检样品进行TAFI含量测定；所述该TAFI含量的体外检测试剂盒组成包括:含有与TAFI特异性结合的单克隆抗体纳米金标记物R试剂；用于制作计算待检样品中的TAFI抗原含量的标准曲线的TAFI标准品和TAFI质控品；步骤三取出试剂R放置室温下至温度平衡；步骤四将R试剂和TAFI标准品放在生化分析仪相应的位置，制定标准曲线；步骤五检测TAFI质控品，并根据线性回归，确定检测结果有效性；步骤六检测TAFI样本，设置加入R试剂100_400ul，加入样本10ul，第5点作为第一点检测，第45点为第二点检测，以两点差值为检测值，通过标准曲线回归得出最终结果。 步骤一所述样本直接用于检测，无需任何处理。步骤四所述标准品以标化TAFI作为标准品，稀释成梯度浓度为Oug/ml、10ug/ml、20ug/ml、30ug/ml、40ug/ml做标准曲线，ELISA方法测定人混合血衆浓度,根据测定结果，利用该血浆及100mMpH7.3的乙二胺四乙酸二钠溶液、IOOmM壳聚糖溶液将购买的TAFI抗原稀释并充分混匀，制成终浓度为含TAF1、乙二胺四乙酸二钠5mM和壳聚糖20mM本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种TAFI含量的体外检测试剂盒，其特征在于：所述该TAFI含量的体外检测试剂盒组成包括：含有与TAFI特异性结合的单克隆抗体纳米金标记物R试剂；用于制作计算待检样品中的TAFI抗原含量的标准曲线的TAFI标准品和TAFI质控品。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李文欣，刘峰，
申请(专利权)人：辽宁迈迪生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：