一种猕猴桃素及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种猕猴桃素及其制备方法和用途。所述猕猴桃素的制备方法为：将猕猴桃根的水提物用大孔树脂进行柱层析分离，将所得分离产物进行醇沉淀，收集沉淀即得。所述的大孔树脂为极性大孔树脂，其包括强碱性大孔树脂或弱碱性大孔树脂，其粒径为0.3～1.25mm，孔径为所述猕猴桃素可明显地抑制肿瘤的生长和恶化发展；同时能够有效提高T淋巴细胞的应答功能，增强小鼠脾细胞对靶细胞的杀伤力，促进NK活性，提高细胞免疫功能。该猕猴桃素抑制肿瘤生长时所引起的副作用很小，具有良好的安全性。该猕猴桃素作为一种新型低毒的抗肿瘤药物，有可能发展成为治疗癌症的中药新药。

【技术实现步骤摘要】
一种猕猴桃素及其制备方法和应用
本专利技术具体涉及一种猕猴桃素及其制备方法和应用。
技术介绍
猕猴桃药用历史悠久，唐《本草拾遗》、宋《本草衍义》、明《本草纲目》均有记载，用于治疗肝炎、水肿、风湿性关节炎、跌打损伤、痢疾、丝虫病、胃癌、乳腺癌等。现代药学研究表明猕猴桃具有降血脂、抗脂质过氧化、清除活性氧自由基、抑制肿瘤细胞、提高免疫功能等方面的药理活性。如猕猴桃果汁对环磷酰胺(CP)诱发的大鼠外周血双核淋巴细胞微核细胞的致突变作用有显著抑制效果，Collinsetal.的单细胞凝胶试验表明猕猴桃果汁有明显的抗DNA氧化的作用，猕猴桃根具有抗多种肿瘤作用。肺癌作为常见恶性肿瘤，患者逐年增多，大约每年有118万人死亡。其中80％为非小细胞肺癌。患者5年生存率仅约15％。肺癌对于传统的化疗和放疗不敏感，药物治疗仍是对抗疾病的主要手段，但目前的抗肿瘤药物副作用较大。
技术实现思路
因此，本专利技术所要解决的技术问题是针对目前临床上治疗恶性肿瘤的药物种类较少，而且化学合成类药物副作用很大的缺陷，提供一种猕猴桃素及其制备方法和应用。本专利技术提供的猕猴桃素制备方法简便，生物活性强，具有良好的抗肿瘤活性，同时其安全性高，副作用小。为解决上述技术问题，本专利技术采取的技术方案之一为：一种猕猴桃素，其中所述猕猴桃素由包括以下步骤的方法制备而得：将猕猴桃根的水提物用大孔树脂层析柱分离，将所得分离产物进行醇沉淀，收集沉淀即得。其中所述猕猴桃素优选地为猕猴桃根水提物大孔树脂30%乙醇流份的乙醇沉淀物，该猕猴桃素命名为猕猴桃素-D，或者TLG30-Ⅱ。为解决上述技术问题，本专利技术采取的技术方案之二为：上述猕猴桃素的制备方法，该制备方法包括以下步骤：将猕猴桃根的水提物用大孔树脂层析柱分离，将所得分离产物进行醇沉淀，收集沉淀即得。其中所述的猕猴桃根的水提物由本领域常规水提方法制备。其中所述的猕猴桃根为本领域常规的猕猴桃根，其中药名为藤梨根。所述猕猴桃根的来源为本领域常规来源，优选地为产自浙江省磐安县的藤梨根药材，其形态为本领域常规形态。所述水提方法较佳地为水煎法，水的添加量较佳地为猕猴桃根重量的8～10倍，优选地为猕猴桃根重量的10倍。所述水煎的温度较佳地为95～105℃，优选地为105℃，所述水煎的时间较佳地为1～3小时，优选地为3小时。其中所述的大孔树脂较佳地为极性大孔树脂，所述极性大孔树脂较佳地包括强碱性大孔树脂或弱碱性大孔树脂。所述强碱性大孔树脂较佳地包括D-201大孔树脂或D-202大孔树脂；所述弱碱性大孔树脂优选地为D-302大孔树脂。所述极性大孔树脂的粒径较佳地为0.3～1.25mm，优选地为1.0mm。所述大孔树脂孔径较佳地为优选地为其中所述的将猕猴桃根的水提物用大孔树脂层析柱分离为本领域常规的层析分离方法。所述大孔树脂层析柱分离方法较佳地包括：首先将猕猴桃根水提物的上清液上样到大孔树脂层析柱，之后以洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液即得。其中所述的上样方法条件参数为：分离层析柱体积较佳地为3～5L，分离层析柱径优选地为6～8cm，上样流速较佳地为1~1.5倍柱体积/小时，优选地为1.5倍柱体积/小时。其中所述洗脱剂较佳地包括：10%～95%乙醇溶液或15%～30%丙酮溶液，其优选地为30%乙醇水溶液，所述百分比为体积百分比。所述乙醇水溶液的流速较佳地为2~3倍柱体积/小时，优选地为3倍柱体积/小时。其中所述大孔树脂层析柱分离方法较佳地包括：将所述大孔树脂分离产物浓缩得到浸膏液，将浸膏液进行醇沉淀后，即得如上所述的猕猴桃素。所述浓缩为本领域常规浓缩技术。所述浓缩技术较佳地为减压浓缩，浓缩真空度较佳地为-0.8~1.0MPa，浓缩温度较佳地为40～50℃，优选地为50℃。浓缩后所得浸膏液的密度较佳地为1～1.5g/ml，优选地为1.25g/ml。其中所述的醇沉淀为本领域常规的沉淀方法。所述的醇较佳地包括甲醇、乙醇、乙二醇中的一种或几种，其优选地为乙醇。其中所述的乙醇较佳地为90%～95%的乙醇水溶液，优选地为95%的乙醇水溶液，所述百分比为体积百分比。所述95%乙醇水溶液的添加量较佳地为所得浸膏液的3～5倍体积，优选地为浸膏液的5倍体积。将所得混合物静置沉淀析出，固液分离，取固体，即得所述猕猴桃素，其中所述静置的时间较佳地为15～18小时。更佳地，将所得固体洗涤后真空干燥，即得本专利技术所述猕猴桃素。为解决上述技术问题，本专利技术采取的技术方案之三为：上述猕猴桃素在制备抗肿瘤药物中的用途。其中所述肿瘤为本领域常规肿瘤。所述肿瘤较佳地包括：白血病，肝癌，肺癌，皮肤癌，胃癌，肝癌，口腔癌或淋巴瘤。其中所述白血病优选地为人慢性髓原白血病，所述肺癌优选地为人大细胞肺腺癌或肺非小细胞癌，所述胃癌优选地为人低分化胃腺癌，所述口腔癌优选地为人口腔表皮癌。在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本专利技术各较佳实例。本专利技术所用试剂和原料均市售可得。本专利技术的积极进步效果在于：1、本专利技术所述猕猴桃素制备方法步骤简单，提取效率较高，所制备的猕猴桃素抗肿瘤活性较强。2、本专利技术提供的猕猴桃素可明显地抑制裸鼠A549肺癌、小鼠Lewis肺癌的生长，抑制肿瘤的恶化发展；同时有效提高T淋巴细胞的应答功能，增强小鼠脾细胞对靶细胞的杀伤力，促进其NK活性，并提高其细胞免疫功能。3、在实验中所用的猕猴桃素浓度下，观察到荷瘤小鼠的体重无明显变化，小鼠状态良好，外观、毛色、活动等均正常，表明本专利技术提供猕猴桃素在抑制肿瘤生长时所引起的副作用很小，具有良好的安全性。因此，猕猴桃素作为一种新型低毒的抗肿瘤药物，有可能发展成为治疗癌症的中药新药，具有较大的社会和经济效益。附图说明图1为猕猴桃素制备工艺流程图。具体实施方式下面通过实施例的方式进一步说明本专利技术，但并不因此将本专利技术限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。猕猴桃根（中药名藤梨根）来源：藤梨根药材，产地：浙江省磐安县。大孔树脂（天津市大钧科技开发有限公司生产，型号为D-201型、D-202型和D-302型）粒径为0.3～1.25mm，孔径为小鼠Lewis肺癌细胞，人非小细胞肺癌细胞A549，Yac-1细胞，K562人慢性髓原白血病细胞，H460人大细胞肺癌细胞，A431人表皮癌细胞，BGC-823人低分化胃腺癌细胞，KB人口腔表皮癌细胞和QGY人肝癌细胞，上述细胞均购自中科院上海生命科学院细胞库。环磷酰胺（CTX），江苏恒瑞医药股份有限公司生产。云芝肝泰胶囊（Yunzhi），上海中西药业股份有限公司新冈制药厂生产。DMEM培养基干粉、新生牛血清及0.5%胰蛋白酶/0.02EDTA均购自GIBCO公司。3H-TdR：上海原子核研究所，放射性浓度1mci/ml。刀豆球蛋白(ConA)：50g/ml，购自Sigma公司。C57BL/小鼠(SPF级)，上海斯莱克实验动物责任有限公司[SCXK（沪）2008-0016]，雄性19～21g，雌性18～20g。BALB/C裸鼠(SPF级)，上海斯莱克实验动物责任有限公司[SCXK（沪）2007-0005]，雄性，18～20g/6周龄。多头细胞收集器，绍兴市卫星医疗设备制造有限公司，型号：ZT1-3型。液闪仪，上海原子核本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猕猴桃素，其特征在于，所述猕猴桃素由包括以下步骤的方法制备而得：将猕猴桃根的水提物用大孔树脂层析柱分离，将所得分离产物进行醇沉淀，收集沉淀即得。

【技术特征摘要】
1.一种猕猴桃素，其特征在于，所述猕猴桃素由包括以下步骤的方法制备而得：将猕猴桃根的水提物用大孔树脂层析柱分离，洗脱剂为30％乙醇水溶液，所述百分比为体积百分比，将所得分离产物进行醇沉淀，收集沉淀即得。2.一种猕猴桃素的制备方法，其特征在于，该制备方法包括以下步骤：将猕猴桃根的水提物用大孔树脂层析柱分离，洗脱剂为30％乙醇水溶液，所述百分比为体积百分比，将所得分离产物进行醇沉淀，收集沉淀即得。3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述大孔树脂为极性大孔树脂，大孔树脂粒径为0.3～1.25mm，大孔树脂孔径为4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述极性大孔树脂包括强碱性大孔树脂或弱碱性大孔树脂。5.如权利要求2所...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈龙海，安泳潼，尹蓓珮，刘畅，吴彤，刘英，
申请(专利权)人：上海医药工业研究院，中国医药工业研究总院，
类型：发明
国别省市：