β-内酰胺抗生素合成酶的高通量筛选方法技术

本发明专利技术公开了一种β-内酰胺抗生素合成用酶的高通量筛选方法，它按以下步骤进行：在酶标板的板孔中加入合成液，然后加入待测酶样品，在微孔板振荡反应器中，10-30℃，反应0.1-3小时，反应过程中每隔1-30分钟取出酶标板加入PDAB显色液显色，酶标测定其在415nm处的吸光值大小；根据吸光值变化趋势及吸光值的最低值，筛选出活性高、合成能力好的酶；所述合成液是将β-内酰胺抗生素的母核与侧链溶解于KPB溶液中制成；所述待测酶样品为β-内酰胺抗生素合成酶。本发明专利技术可以用于用于内酰胺类抗生素如阿莫西林、头孢氨苄、头孢克洛、头孢羟氨苄、氨苄西林等酶法合成用酶的筛选。具有操作简单、成本低廉、检测准确等特点，适合大规模高通量筛选合成用酶。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种β‑内酰胺抗生素合成用酶的高通量筛选方法，其特征在于它按以下步骤进行：在酶标板的板孔中加入合成液，然后加入待测酶样品，放入微孔板振荡反应器中，10‑30℃，反应0.1‑3小时，反应过程中每隔1‑30分钟取出酶标板加入PDAB显色液显色，酶标测定其在415nm处的吸光值大小；根据吸光值变化趋势及吸光值的最低值，筛选出吸光值较早到达最低值且吸光值最低值较低的酶，即为活性高、合成能力好的酶；所述合成液是：将母核与侧链溶解于KPB溶液中制成合成液，备用；所述的母核为6‑APA、7‑ADCA、7‑ACCA、7‑ACA和7‑AVCA中的任意一种，所述的侧链为HPGME·HCL或PGME·HCL；所述待测酶样品为β‑内酰胺抗生素合成酶。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘力强，贾娟娟，牛昆，范俊辉，石晨光，王召业，吕娜，武芳，王欢，杨丽萍，邸胜苗，刘东，
申请(专利权)人：华北制药河北华民药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：河北;13