【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种克隆梅花中LFY同源基因编码区全序列的方法,其特征在于,包括以下步骤:A、基因组水平克隆A1、提取梅花叶片中的DNA;A2、引物的设计及PCR反应:设计一对简并引物,上游引物在起始密码子的上游区域设计,下游引物在终止密码子的下游区域设计;设计的引物为:上游引物P1:5′?GGAAAATATGGATCCRGA?3′下游引物P2:5′?TCARTAGGGYAGGTGMTC?3′用DNA为模板进行PCR操作扩增LFY同源基因,PCR反应体系为20ul体系:2μL10×EX?Taq?buffer,1.6μL?dNTP(10mmol·L?1),0.2μL的Ex?Tap酶,上下游引物各0.4μL,1μL的DNA,14.4μL的ddH2O,反应条件为95℃预变性5min,30个循环:94℃,50s;58℃,50s;72℃,1min30s,最后72℃,10min;A3、PCR产物的回收和纯化;A4、克隆;B、基因编码区全序列克隆B1、提取梅花叶片中的总RNA,然后将总RNA反转录成cDNA;B2、引物的设计及PCR反应:在基因组测序结果的基础上设计一对特异性引物,上下游引物分别包括起始密码子和终止 ...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员:郑炳松,江波,任韡,方仲相,方佳,何勇清,
申请(专利权)人:浙江农林大学,
类型:发明
国别省市:
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