一种凝花菜无菌外植体的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种凝花菜无菌外植体的制备方法，包括以下步骤：以凝花菜的叶状体作为外植体，用无菌过滤海水冲洗干净后置于3%的广谱抗生素和抗真菌素的混合制剂中浸泡15-18h；取出凝花菜外植体将其置于1%-3%的碘化钾溶液中2-5min；取出凝花菜置于3%-10%的次氯酸钠溶液中浸泡3-10min，无菌过滤海水清洗干净后即可获得无菌的红藻外植体。本发明专利技术以广谱抗生素、抗真菌剂、碘化钾和次氯酸钠酸钠为消毒剂，配合使用，可以有效的杀死凝花菜外植体表面的细菌、真菌和病毒且不损害植株的生长，可以获得90%无菌可行的外植体。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物组织培养
，具体涉及。
技术介绍
凝花菜acerosa (Forsskal))是工业生产琼脂产品的重要原材料之一。凝花菜的琼脂凝胶产量很高，每平方厘米的叶状体的产量可以达到600g，如此高的琼脂产量使人们更青睐于用凝花菜作为提取琼脂的原材料。每年，从自然种群收获的200-300吨凝花菜干材料用来本土琼脂生产，由于生物技术工业在国内的兴起，对琼脂的需求日益增多，导致其他琼脂海藻的使用，也导致了为了满足凝花菜日益增长的市场需求而带来的过度采集。因为凝花菜分布局限，固有生长和繁殖慢，因此恢复和保护过度开发的凝花菜自然藻床的努力受抑制。植物组织培养技术可以在短时间内繁育大量的微繁体，微繁体与母体的性质完全一样，因而植物组织培养技术成为目前最受欢迎的快速繁育植株的方法。与高等陆生植物组织培养技术相比，海洋植物组织培养技术的研究比较落后，海藻组织培养面临最大的难题就是无法获得无菌可行的海藻外植体，因为海洋植物是由单层或多层细胞构成的，其的组织结构与陆生植物有很大的差异，没有高等植物茎叶所具有的维管束结构，也没有坚硬的表皮保护；陆生植物常用的酒精、升汞等消毒剂非常容易侵入海藻细胞的内部而造成外植体死亡。目前，大型海藻的组织培养技术相对落后，已知资料中常用抗生素浸泡或洗涤剂清洗来达到消毒灭菌的目的，但是，洗涤剂消毒，清洗是非常棘手的问题，而抗生素有很多方面的危害，对处理后的外植体以及再生的植株有怎样的危害还不得知，上述处理凝花菜外植体的可行性非常低，最多只能获得50%的无菌外植体。
技术实现思路
针对现有技术存在的缺陷，本专利技术所要解决的技术问题是提供，本方法简单、易行、安全，短时间内为凝花菜组织培养提供充足的高效、可行的无菌外植体来源。为了解决上述技术问题，本专利技术的技术方案如下: ，包括以下步骤:以凝花菜的叶状体作为外植体，用无菌过滤海水冲洗干净后置于3%的广谱抗生素和抗真菌素的混合制剂中浸泡15-18h ;取出凝花菜外植体将其置于1%_3%的碘化钾溶液中2-5min ;取出凝花菜置于3%_10%的次氯酸钠溶液中浸泡3-10min，无菌过滤海水清洗干净后即可获得无菌的红藻外植体。一种鉴定凝花菜外植体无菌性的方法，以按照上述消毒方法获得的外植体作为实验对象，将实验对象切成3_5mm的切段，将切段接种于无菌检测培养基中培养I周检测无菌性；所述的无菌检测培养基的配方为，IL VS培养基中添加5g琼脂、15g葡萄糖和IOg细菌培养用蛋白胨。进一步的，所述的抗真菌素为青霉素、土霉素、链霉素、制霉菌素中的任意一种。本专利技术的有益效果是: 本专利技术以广谱抗生素、抗真菌剂、碘化钾和次氯酸钠酸钠为消毒剂，配合使用，可以有效的杀死凝花菜外植体表面的细菌、真菌和病毒且不损害植株的生长，可以获得90%无菌可行的外植体。【具体实施方式】以下通过实施例进一步阐述本专利技术的有益效果: 实施例1: :以凝花菜的叶状体作为外植体，用无菌过滤海水冲洗干净后置于3%的广谱抗生素和青霉素的混合制剂中浸泡16h ;取出凝花菜外植体将其置于2%的碘化钾溶液中3min ;取出凝花菜置于5%的次氯酸钠溶液中浸泡5min，无菌过滤海水清洗干净后切成3-5mm的切段，将切段接种于无菌检测培养基中培养I周检测无菌性；所述的无菌检测培养基的配方为，IL VS培养基中添加5g琼脂、15g葡萄糖和IOg细菌培养用蛋白胨。每个切段单独接种于一个培养皿中，共接种100块，其中有8块被污染，2块变黑死亡，可以获得90%的无菌外植体。实施例2: :以凝花菜的叶状体作为外植体，用无菌过滤海水冲洗干净后置于3%的广谱抗生素和 土霉素的混合制剂中浸泡16h ;取出凝花菜外植体将其置于2%的碘化钾溶液中3min ;取出凝花菜置于5%的次氯酸钠溶液中浸泡5min，无菌过滤海水清洗干净后切成3-5mm的切段，将切段接种于无菌检测培养基中培养I周检测无菌性；所述的无菌检测培养基的配方为，IL VS培养基中添加5g琼脂、15g葡萄糖和IOg细菌培养用蛋白胨。每个切段单独接种于一个培养皿中，共接种100块，其中有10块被污染，5块变黑死亡，可以获得85%的无菌外植体。实施例3: :以凝花菜的叶状体作为外植体，用无菌过滤海水冲洗干净后置于3%的广谱抗生素和链霉素的混合制剂中浸泡16h ;取出凝花菜外植体将其置于2%的碘化钾溶液中3min ;取出凝花菜置于5%的次氯酸钠溶液中浸泡5min，无菌过滤海水清洗干净后切成3-5mm的切段，将切段接种于无菌检测培养基中培养I周检测无菌性；所述的无菌检测培养基的配方为，IL VS培养基中添加5g琼脂、15g葡萄糖和IOg细菌培养用蛋白胨。每个切段单独接种于一个培养皿中，共接种100块，其中有14块被污染，5块变黑死亡，可以获得81%的无菌外植体。实施例4: :以凝花菜的叶状体作为外植体，用无菌过滤海水冲洗干净后置于3%的广谱抗生素和制霉菌素的混合制剂中浸泡16h ;取出凝花菜外植体将其置于2%的碘化钾溶液中3min ;取出凝花菜置于5%的次氯酸钠溶液中浸泡5min，无菌过滤海水清洗干净后切成3-5mm的切段，将切段接种于无菌检测培养基中培养I周检测无菌性；所述的无菌检测培养基的配方为，IL VS培养基中添加5g琼脂、15g葡萄糖和IOg细菌培养用蛋白胨。每个切段单独接种于一个培养皿中，共接种100块，其中有13块被污染，10块变黑死亡，可以获得77%的无菌外植体。实施例5: :以凝花菜的叶状体作为外植体，用无菌过滤海水冲洗干净后置于3%的广谱抗生素和青霉素的混合制剂中浸泡15h ;取出凝花菜外植体将其置于1%的碘化钾溶液中2min ;取出凝花菜置于3%的次氯酸钠溶液中浸泡3min，无菌过滤海水清洗干净后切成3-5mm的切段，将切段接种于无菌检测培养基中培养I周检测无菌性；所述的无菌检测培养基的配方为，IL VS培养基中添加5g琼脂、15g葡萄糖和IOg细菌培养用蛋白胨。每个切段单独接种于一个培养皿中，共接种100块，其中有22块被污染，5块变黑死亡，可以获得73%的无菌外植体。实施例6: :以凝花菜的叶状体作为外植体，用无菌过滤海水冲洗干净后置于3%的广谱抗生素和青霉素的混合制剂中浸泡18h ;取出凝花菜外植体将其置于3%的碘化钾溶液中5min ;取出凝花菜置于10%的次氯酸钠溶液中浸泡lOmin，无菌过滤海水清洗干净后切成3-5mm的切段，将切段接种于无菌检测培养基中培养I周检测无菌性；所述的无菌检测培养基的配方为，IL VS培养基中添加5g琼脂、15g葡萄糖和IOg细菌培养用蛋白胨。每个切段单独接种于一个培养皿中，共接种100块，其中有3块被污染，15块变黑死亡，可以获得82%的无菌外植体。上述实例只是为说明本专利技术的技术构思以及技术特点，并不能以此限制本专利技术的保护范围。凡根据本专利技术的实质所做的等效变换或修饰，都应该涵盖在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种凝花菜无菌外植体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：以凝花菜的叶状体作为外植体，用无菌过滤海水冲洗干净后置于3%的广谱抗生素和抗真菌素的混合制剂中浸泡15?18h；取出凝花菜外植体将其置于1%?3%的碘化钾溶液中2?5min；取出凝花菜置于3%?10%的次氯酸钠溶液中浸泡3?10min，无菌过滤海水清洗干净后即可获得无菌的红藻外植体。

【技术特征摘要】
1.一种凝花菜无菌外植体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤:以凝花菜的叶状体作为外植体，用无菌过滤海水冲洗干净后置于3%的广谱抗生素和抗真菌素的混合制剂中浸泡15-18h ;取出凝花菜外植体将其置于1%_3%的碘化钾溶液中2-5min ;取出凝花菜置于3%-10%的次氯酸钠溶液中浸泡3-10min，无菌过滤海水清洗干净后即可获得无菌的红藻外植体。2.一种检验权利要求1所述的外植体...

【专利技术属性】
技术研发人员：张亚丽，
申请(专利权)人：张亚丽，
类型：发明
国别省市：