本发明专利技术提供了一株糖苷酶产生菌——链霉菌（Streptomyces?sp.）RW-2，及其在生物转化葫芦素B-2-O-葡萄糖苷制备葫芦素B中的应用。该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，邮编：430072，保藏编号：CCTCC?No：M2013330，保藏日期2013年7月17日。本发明专利技术的有益效果主要体现在：（1）链霉菌是发酵工业中常用菌种，无毒无害，使用安全；（2）链霉菌RW-2营养要求简单、生长迅速、容易培养；（3）链霉菌RW-2产生的糖苷酶为胞外酶，分离除去菌体，粗酶液或经稀释后，即可作为生物转化体系，（4）从甜瓜蒂提取的总葫芦素经生物转化处理后，其中的葫芦素B-2-O-葡萄糖苷几乎能全部转化为葫芦素B，葫芦素B的含量可提高1～2.7倍。
【技术实现步骤摘要】
产糖苷酶的链霉菌及其在生物转化制备葫芦素B中的应用(一)
本专利技术涉及一株产糖苷酶的链霉菌及其在生物转化制备葫芦素B中的应用。(二)
技术介绍
甜瓜蒂为葫芦科一年生草质藤本植物甜瓜(Cucumis melo)成熟后的干燥果柄，别名也叫瓜蒂、瓜丁、苦丁香，始载于《神农本草经》，为上品之药，系《中国药典》一部1977年版收载品种，味苦，性寒，入脾、胃经。具有涌吐痰食、祛湿退黄之功。现代临床多用于治疗食积不化，食物中毒，癫痫痰盛以及急、慢性肝炎和肝硬化等。甜瓜蒂的药效成分为葫芦素(cucurbitacins)，葫芦素是一类四环三萜类化合物，现已发现40余种，如葫芦素B、葫芦素D和葫芦素E等，它们具有护肝消炎和抗肿瘤等多种生物学活性。在甜瓜蒂中，葫芦素B占总葫芦素的比例最高，并且活性最好，是抗肝炎、肝癌的最有效单体，对因湿热毒盛所致迁延性肝炎、慢性肝炎及原发性肝癌有很好的辅助治疗效果。上世纪70~80年代，国内已研发出药物葫芦素片，临床用于肝炎和原发性肝癌的辅助治疗。葫芦素片是用乙醇从甜瓜蒂提取的总葫芦素经纯化后加辅料压片而成，葫芦素B是主要药效成分，也是该药品有效成分检验的指标，药典要求其含量不低于60%。从甜瓜蒂提取的总葫芦素中存在葫芦素B-2-0-葡萄糖苷(以下简称为葫芦素B糖苷)，其含量接近甚至大于葫芦素B的含量，但生物活性远远不如葫芦素B，如对人肝癌HepG-2细胞的抑制作用的仅为葫芦素B的1.1%。糖苷键连接的化合物需先经过代谢转化为苷元才能被人体吸收，但由于人体缺乏相应的酶而水解困难，几乎不能被人体吸收。(三)
技术实现思路
`本专利技术目的是提供一株糖苷酶产生菌-链霉菌(Streptomyces sp.)RW_2,及其在生物转化制备葫芦素B糖苷中的应用，能够显著提高从甜瓜蒂提取的总葫芦素中葫芦素B含量，具有成本低、工艺简单、效率高等优点。本专利技术采用的技术方案是:链霉菌(Sti^ptomyces sp.) RW-2，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址:中国，武汉，武汉大学，邮编:430072，保藏编号=CCTCC No:M2013330，保藏日期2013年7月11日。本专利技术所述链霉菌RW-2，是由河道污水与甜瓜蒂粉末混合富集培养物中分离和筛选得到的优良菌株，再经紫外线照射诱变处理获得。所述链霉菌RW-2的菌落特征如下:在平板培养基上，30°C条件下，培养3天，菌落初期为白色，小而致密、干而不透明，不易挑起，之后逐渐变大，呈灰绿色，表面呈粉状，有褶皱，背面呈灰黑色。在显微镜下观察，基内菌丝细长，多分枝；直径为0.8~1.0 ii m ;气生菌丝略粗；分生孢子呈椭圆形，表面光滑。所述链霉菌RW-2的16s rDNA的部分核苷酸序列如SEQ ID N0.1所示:GCTTACCATGCAAGTCGAACGATGAACCACTTCGGTGGGGATTAGTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGGGCAATCTGCCCTGCACTCTGGGACAAGCCCTGGAAACGGGGTCTAATACCGGATACTGAGCCACTTGGGCATCCAAGTGGTTCGAAAGCTCCGGCGGTGCAGGATGAGCCCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTGAGGTAATGGCTCACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGCGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGAAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGCAGGGAAGAAGCGAAAGTGACGGTACCTGCAGAAGAAGCGCCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGCGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAGGCGGCTTGTCACGTCGGTTGTGAAAGCCCGGGGCTTAACCCCGGGTCTGCAGTCGATACGGGCAGGCTAGAGTTCGGTAGGGGAGATCGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGAAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACCGGTGGCGAAGGCGGATCTCTGGGCCGATACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGGTGGGCACTAGGTGTGGGCAACATTCCACGTTGTCCGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGTGCCCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGTGGCTTAATTCGACGCAACGCGAAGAACCTTACCAAGGCTTGACATACACCGGAAACGTCCAGAGATGGGCGCCCCCTTGTGGTCGGTGTACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCCCGTGTTGCCAGCAGGCCCTTGTGGTGCTGGGGACTCACGGGAGACCGCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATGTCTTGGGCTGCACACGTGCTACAATGGCCGGTACAATGAGCTGCGATACCGCGAGGTGGAGCGAATCTCAAAAAGCCGGTCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCATGAAGTCGGAGTCGCTAGTAATCGCAGATCAGCATTGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACGTCACGAAAGTCGGTAACACCCGAAGCCGGTGGCCCAACCCCTTGTGGGAGGGAGCTGTCGAAGGTGGGACTGGCGATTGGACGAAGTCGAACAAo本专利技术还涉及所述的链霉菌RW-2在微生物发酵制备糖苷酶中的应用。具体的，所述应用如下:将链霉菌RW-2菌种孢子或经过扩大培养的种子接种至产酶培养基中，25~35°C培养3~6天，获得含有糖苷酶的发酵液。所得发酵液经过滤或离心除去菌体的清液为糖苷酶粗酶液，可以直接应用于生物转化葫芦素B糖苷；也可以保藏于4°C冰箱15天内使用；也可以经过冷冻干燥，制成粗酶粉保藏于4°C冰箱长期使用。所述产酶培养基组成如下:马铃薯100~200g/L、蔗糖20~50g/L，大豆粉10~20g/L，溶剂为水，pH6.0 ~8.0。本专利技术还涉及所述的链霉菌RW-2在微生物转化葫芦素B糖苷制备葫芦素B中的应用，可提高甜瓜蒂乙醇提取的总葫芦素中葫芦素B含量。具体的，所述应用为:将链霉菌RW-2菌种孢子或经过扩大培养的种子液接种至产酶培养基中，25~35°C培养3~6天，发酵液经离心除去菌体获得糖苷酶粗酶液，粗酶液经1~5倍水稀释后，加入本文档来自技高网...
【技术保护点】
链霉菌（Streptomyces?sp.）RW?2，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，邮编：430072，保藏编号：CCTCC?No：M2013330，保藏日期2013年7月11日。
【技术特征摘要】
1.链霉菌(Sti^ptomycessp.) RW-2，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址:中国，武汉，武汉大学，邮编:430072，保藏编号=CCTCC No:M2013330，保藏日期2013年7月11日。2.如权利要求1所述的链霉菌RW-2，...
【专利技术属性】
技术研发人员：梅建凤，李莎，金航，应国清，王鸿，易喻，陈建澍，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：
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