微核酸-196a分子及-196b分子侦测口腔癌的方法及其引物、探针与试剂盒技术

一种用微核酸-196a分子及微核酸-196b分子侦测口腔癌的方法及其专用引物、探针与试剂盒，是检测潜在病患的肿瘤组织、血浆、血清、口水或漱口水等生物检体中miR-196a分子及miR-196b分子的表达量，其中miR-196a分子具有SEQIDNO：1所示的核苷酸序列，miR-196b分子具有SEQID?NO：2所示的核苷酸序列，若miR-196a分子或miR-196b分子的表达量异常高于正常值(其中，miR-196a的正常值为1.817±0.38，miR-196b的正常值为7.683±1.88)，即可推断该潜在病患罹患口腔癌。本发明专利技术利用反转录实时荧光定量聚合酶链式反应技术(RT-qPCR)，侦测口腔癌病患及正常者血浆中miR-196a分子和miR-196b分子的表达量，发现无论是微核酸miR-196a还是微核酸miR-196b的表达量均较正常者有明显的高度表达(p＜0.0001)，且侦测敏感度达90％，专一性达85％，证明miR-196a分子及miR-196b分子应用于口腔癌的侦测具有良好的鉴别度。

【技术实现步骤摘要】
微核酸-196a分子及-196b分子侦测口腔癌的方法及其引物、探针与试剂盒
本专利技术提供一种将微核酸-196a(miR_196a)分子及微核酸_196b (miR_196b)分子运用于侦测口腔癌的方法，尤其以miR-196a分子及miR-196b分子作为口腔癌的肿瘤标记，分析潜在病患的生物检体中miR-196a分子及miR_196b分子的表达量来推断该潜在病患罹患口腔癌的方法。
技术介绍
血液肿瘤标志具有疾病侦测、预后及监控治疗结果的价值。因此，一个临床上应用的血液型肿瘤标志可以提供更好的疾病控制。现行的血液型肿瘤标志有侦测大肠直肠癌的CEA、侦测肝癌的AFP与侦测摄护腺癌的PSA，过去也有报导指出SCC抗原与Cyfra21可以作为头颈癌的侦测标志，但目前尚未提到有临床使用的口腔癌侦测标志。此外，微核酸(miRNA)是内生性，不转译蛋白的小片段RNA，其利用结合到标的基因讯息RNA的3’不转译区域(3’UTR)，进而抑制标的基因转译而达到负向调控基因表达。微核酸被认为是一群重要的基因调控分子，估计有1/3-1/2的人类基因会受微核酸调控，此外每个微小RNA亦可以同时调控不本文档来自技高网...

【技术保护点】
用实时荧光定量PCR法侦测miR?196a分子和miR?196b分子表达量的引物和探针，其中，检测miR?196a的上游引物、下游引物及探针序列存在于Applied?Biosystems?MicroRNA?Assays试剂盒(miR?196a：000495)中，检测miR?196b的上游引物、下游引物及探针序列存在于Applied?Biosystems?MicroRNA?Assays试剂盒(miR?196b：002215)中。FSA00000758668200011.tif,FSA00000758668200012.tif

【技术特征摘要】
1.用实时荧光定量PCR法侦测miR-196a分子和miR_196b分子表达量的引物和探针，其中，检测miR-196a的上游引物、下游引物及探针序列存在于AppliedBiosystems- TaqMan? MicroRNA Assays 试剂盒(miR_196a:000495)中，检测 miR_196b 的上游引物、下游引物及探针序列存在于Applied Biosystems-TaqMan?MicroRNA Assays试剂盒(miR-196b:002215)中。2.一种用miR-196a分子和miR_196b分子侦测口腔癌的方法，是用权利要求1所述的引物、探针和实时荧光定量PCR法分析潜在病患的生物检体中miR-196a分子及miR-196b分子的表达量，其中miR-196a分子具有SEQID NO:1所示的核苷酸序列，miR_196b分子具有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列，若miR-196a分子或miR-196b分子的表达量异常高于正常值，即可推断该潜在病患罹患口腔癌，其中，miR-196a的正常值为1.817±0.38，miR-196b的正常值为7.683±1.88。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于:所述miR-196a分子高出正常值约14倍。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于:所述miR-196b分子高出正常值约10倍。5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于:所述生物检体可为肿瘤组织、血浆、血清、口水或漱口水。6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于:以血浆检体为例，所述分析潜在病患的生物检体中miR-196a分子及miR_196b分子的表达量的分析步骤为: 步骤一:首先取得血浆检体，将血浆样分装出200 μ 1，用可纯化miRNA的试剂萃取出微核酸(miRNA)，第一步加入700 μ I QIAzol使其均质化后再加入140 μ I氯仿分离萃取RNA，离心后取上清液(约525 μ I)加入750 μ I纯乙醇沉淀微核酸，然后用离心管柱分离出沉淀物(微核酸)，丢弃下层流出液，润洗管柱后，每个样本用20 μ I无核酸水解酶(RNase...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑恩加，吕雅情，
申请(专利权)人：长庚大学，
类型：发明
国别省市：