一种培养人羊膜间充质干细胞的方法技术

本发明专利技术涉及一种培养人羊膜间充质干细胞的方法。它包括如下步骤：取新鲜采集的人羊膜，清洗，放入羊膜保护液中2-8℃保存备用；取浸泡在羊膜保护液中不超过48小时的人羊膜，清洗，再依次置临用新配的青霉素钠和硫酸链霉素含量分别为2500-3500U/mL和3500-4500U/mL的氯化钠溶液和每毫升含30-50U注射用两性霉素B的甲硝唑注射液中进行浸洗，最后再清洗后置于一次性无菌培养皿中进行备用，然后分离，培养至细胞融合度达80-90%即得。本发明专利技术能避免动物血清及动物来源的试剂带来的潜在的危险性；48小时内均可用于羊膜间充质干细胞的培养，可操作性强；可大大减少因霉菌、厌氧菌污染造成的间充质干细胞分离培养不合格的几率。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种培养人羊膜间充质干细胞的方法，其特征在于：它包括如下步骤：????（1）取新鲜采集的人羊膜，清洗，放入羊膜保护液中2?8℃保存备用，所述的羊膜保护液是在AIM?V培养基中加入青霉素钠和硫酸链霉素得到的，其中青霉素钠和硫酸链霉素在羊膜保护液中的终浓度分别为100?200?U/mL和100?200?U?/mL；???（2）取浸泡在羊膜保护液中不超过48小时的人羊膜，清洗，再依次置临用新配的青霉素钠和硫酸链霉素含量分别为2500?3500?U?/mL和3500?4500?U?/mL的氯化钠溶液和每毫升含30?50?U两性霉素B的甲硝唑注射液中进行浸洗，最后再清洗后置于一次性无菌培养皿中进行备用；???（3）将无菌清洗过的人羊膜剪碎，加入AIM?V培养基，置分离管中用全自动组织分离器进行分离，得羊膜组织匀浆；???（4）将全自动组织分离器处理好的羊膜组织匀浆进行离心，弃上清，收集下层，置于培养瓶中，然后向其中加入无血清培养基，置于36?38℃、饱和湿度、体积分数为5%的CO2孵育箱中培养，至观察到瓶壁上形成多个大小不一、细胞数量密集的细胞岛时，则获得人羊膜间充质干细胞原代细胞混合液，然后经离心，即可获得人羊膜间充质干细胞原代细胞，再经传代培养至细胞融合度达80?90%即得。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：操春红，蔡鹏，余顺，吴珍兰，
申请(专利权)人：武汉道培胎盘干细胞生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：