【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种分离脐带间充质干细胞的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)脐带间充质干细胞的分离:将两头结扎的脐带组织用无菌等渗溶液清洗,从一端结扎处内侧1?2厘米处剪断,从断端的脐静脉插入无菌管子,并使得无菌管子在脐带外留出2厘米以上,在脐带断端内侧1?2厘米左右处固定脐带与管子,从外侧预留管子处注入无菌等渗溶液5?20毫升清洗脐静脉,清洗2次以上;再从管子注入10?25毫升trypLETM酶溶液,37℃消化0.3?0.5小时,排出消化液;然后,用无菌等渗溶液清洗一次;再次从管子注入5?20毫升trypLETM酶溶液,37℃消化0.5?1小时,收集第二次消化后的消化液,将消化液用滤网过滤得到单细胞为主的悬液;将细胞悬液离心,即得到脐带间充质干细胞;(2)脐带间充质干细胞的培养:将上述步骤(1)获得的细胞按0.5?2×104/cm2的密度接种到培养瓶中,置于37℃、饱和湿度、5%的CO2培养箱中进行原代细胞培养,细胞培养到80?90%融合时,用trypLETM消化,按分种率1:2??1:10接种到新培养瓶中培养,经过数次传代,间充质干细胞得到纯化,可以将细胞作为原代传代细胞库冻存到液氮中长期保存 ...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员:韩之海,王涛,
申请(专利权)人:北京汉氏联合生物技术有限公司,
类型:发明
国别省市:
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