将蛋白固定到自组装膜上的方法技术

本发明专利技术的目的之一在于为了使靶物质的检测灵敏度或定量精度提高而增加自组装膜所固定的蛋白的量。本发明专利技术的特征在于选自由半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯丙氨酸及甘氨酸组成的5种氨基酸中的氨基酸的1分子插入到自组装膜与蛋白的分子之间。例如，本发明专利技术提供一种将蛋白固定到自组装膜上的方法，其依次具备以下的工序（a）～（b）：工序（a）：准备具备1分子氨基酸及所述自组装膜的基材；及工序（b）：将蛋白供给到所述基材上，作为所述1分子氨基酸的羧基与所述蛋白的氨基的反应结果形成由规定化学式表示的肽键。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及。
技术介绍
为了对试样中所含的靶物质进行检测或定量，使用生物传感器。几种生物传感器 为了对靶物质进行检测或定量而具备能够与靶物质结合的蛋白。具体地，对抗原进行检测 或定量的生物传感器具备能够与该抗原特异性结合的抗体。同样地，对生物素及葡萄糖进 行检测或定量的生物传感器分别具备链霉亲和素及葡萄糖氧化酶。当含有靶物质的试样被供给至具备能够与靶物质结合的蛋白的生物传感器时，靶 物质与蛋白结合，由此被检测或定量。专利文献I公开了具备蛋白的现有的生物传感器。该专利文献I与日本特表 2002-520618号公报对应(参照专利文献I的第24页第23行?第26行、第25页第3行? 第20行、第25页第27行?第26页第13行、及第26页第14行?第22行、第28页第21 行?第23行、或者对应公报的第0080、0082、0084、0085、0095、0109、0118及0119段)。图 2表示专利文献I的图7所公开的生物传感器。根据专利文献I的与图7有关的描述，该生物传感器用于对生物体分子的活性进 行筛选。该生物传感器具备单层7、亲和性标记物8、衔接子分子9及蛋白10。单层7由化 学式X-R-Y表示的自组装膜构成(参照专利文献I的第24页第23行?第26行、第25页第 3行?第20行、第25页第27行?第26页第13行及第26页第14行?第22行。或者，参 照对应公报的第0080、0082、0084、0085段)。X、R及Y的一个例子分别是HS-、链烷基及羧 基(参照专利文献I的第25页第3行?第20行、第25页第27行?第26页第13行及第28 页第21行?第23行。或者参照对应公报的第0084、0085及0095段)。现有技术文献专利文献专利文献1:国际公开第00/04382号公报
技术实现思路
专利技术欲解决的课题为了提高靶物质的检测灵敏度或定量精度，需要增加该生物传感器上所固定的蛋 白的量。本【专利技术者】发现，通过使选自由半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯丙氨酸及甘氨酸组成 的组中的I分子氨基酸与自组装膜键合，然后将蛋白固定，能够显著增加每单位面积的蛋 白的固定量。本专利技术是基于该认识而完成的。本专利技术的目的在于提供使自组装膜上所固定的蛋白的量增加的方法、及具有通过 该方法固定的蛋白的传感器。用于解决课题的手段以下的项I?9所述的方法或传感器解决了上述课题。(I) 一种，其具备以下的工序:工序(a):准备具备I分子氨基酸及自组装膜的基材，其中，所述I分子氨基酸通过以下的化学式(I)所示的肽键与所述自组装膜键合，(R表示所述I分子氨基酸的侧链)所述I分子氨基酸选自由半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯丙氨酸及甘氨酸组成的5 种氨基酸；工序(b):将蛋白供给到所述基材上，以所述I分子氨基酸的羧基与所述蛋白的氨 基的反应的形式，形成以下的化学式(II)所示的肽键；(R表示所述I分子氨基酸的侧链)。(2)根据项I所述的方法，其中，所述工序(a)具备以下的工序(al)及(a2):工序(al):准备表面上具备自组装膜的基材，其中，所述自组装膜在一端具有羧工序(a2):将所述I分子氨基酸供给到所述基材上，以所述化学式(I)所示的所述 自组装膜的一端的所述羧基与所述I分子氨基酸的氨基之间的反应的形式，形成肽键。(3)根据项I所述的方法，其中，所述工序(a)及所述工序(b)之间还具备所述工 序(ab):工序(ab):将所述I分子氨基酸的羧基用N-羟基琥珀酰亚胺和1-乙基3- (3- 二 甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐的混合液活化。(4)根据项2所述的方法，其中，所述工序(al)及所述工序(a2)之间还具备所述 工序(ala):工序(alb):将所述自组装膜的羧基用N-羟基琥珀酰亚胺和1-乙基-3-(3-二甲 基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐的混合液活化。(5)根据项I所述的方法，其中，所述化学式(II)如以下的化学式(III)所示:自组装膜I分子氨基酸肽键自组装膜 I分子氨基酸的残基蛋白一级结构中的主链自组装膜本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种将蛋白固定到自组装膜上的方法，其具备以下的工序：工序（a）：准备具备1分子氨基酸及自组装膜的基材，其中，所述1分子氨基酸通过以下的化学式（I）所示的肽键与所述自组装膜键合，R表示所述1分子氨基酸的侧链，所述1分子氨基酸选自由半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯丙氨酸及甘氨酸组成的5种氨基酸；工序（b）：将蛋白供给到所述基材上，以所述1分子氨基酸的羧基与所述蛋白的氨基的反应的形式，形成以下的化学式（II）所示的肽键；R表示所述1分子氨基酸的侧链。FDA0000416217350000012.jpg,FDA0000416217350000011.jpg

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.07.08 JP 2011-1515731.一种将蛋白固定到自组装膜上的方法，其具备以下的工序:工序(a):准备具备I分子氨基酸及自组装膜的基材，其中，所述I分子氨基酸通过以下的化学式(I)所示的肽键与所述自组装膜键合，R表示所述I分子氨基酸的侧链，所述I分子氨基酸选自由半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯丙氨酸及甘氨酸组成的5种氨基酸；工序(b):将蛋白供给到所述基材上，以所述I分子氨基酸的羧基与所述蛋白的氨基的反应的形式，形成以下的化学式(II)所示的肽键；一肽键R表示所述I分子氨基酸的侧链。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述工序(a)具备以下的工序(al)及(a2): 工序(al):准备表面上具备自组装膜的基材，其中，所述自组装膜在一端具有羧基， 工序(a2):将所述I分子氨基酸供给到所述基材上，以所述化学式(I)所示的所述自组装膜的一端的所述羧基与所述I分子氨基酸的氨基之间的反应的形式，形成肽键。3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述工序(a)及所述工序(b)之间还具备所述工序(ab):工序(ab):将所述I分子氨基酸的羧基用N-羟基琥珀酰亚胺和1-...

【专利技术属性】
技术研发人员：畠冈由香利，
申请(专利权)人：松下电器产业株式会社，
类型：
国别省市：