一种维生素C混合菌的保藏方法技术

本发明专利技术涉及一种维生素C混合菌的保藏方法，该方法将大、小菌搭配培养的维生素C混合菌种之斜面，用体积浓度为50%的甘油制备成悬浮液，再封装于无菌冻存管中，置于-70±2℃温度下保存。采用本发明专利技术方法保藏的VC二步菌菌种，其菌种死亡率在1%以下，变异率为零，其菌种的特性和稳定性可保持五年以上，且需用时操作方法简单易行，活化后的二步菌发酵水平都基本保持在115-125mg/ml的水平，二步转化率在94%以上，生产得到了稳定，避免了因频繁传代带来的风险。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及一种维生素C混合菌的保藏方法，该方法将大、小菌搭配培养的维生素C混合菌种之斜面，用体积浓度为50%的甘油制备成悬浮液，再封装于无菌冻存管中，置于-70±2℃温度下保存。采用本专利技术方法保藏的VC二步菌菌种，其菌种死亡率在1%以下，变异率为零，其菌种的特性和稳定性可保持五年以上，且需用时操作方法简单易行，活化后的二步菌发酵水平都基本保持在115-125mg/ml的水平，二步转化率在94%以上，生产得到了稳定，避免了因频繁传代带来的风险。【专利说明】一种维生素C混合菌的保藏方法
本专利技术属于生物发酵
，特别是涉及一种维生素C混合菌的保藏方法。
技术介绍
维生素C (VitanunC, Vc)是人体营养必需的维生素，其不仅作为重要的医药产品用于治疗多种疾病，也广泛用于食品、饲料及化妆品中。随着维生素C应用范围的增加，市场需求量日益增大，使人们对VC生产技术不断地进行研究、改进。现行技术中维生素C的发酵生产通常采用的都是二步法，其中古龙酸的合成:采用巨大芽孢杆菌(俗称大菌，大菌为革兰氏阳性芽孢杆菌，可染噬菌体，较易分化，)和氧化葡萄糖酸杆菌(俗称小菌，小菌为革兰氏阴性无芽孢杆菌，菌体呈短杆，近呈球体)两者混合发酵，因为小菌适宜在中性条件下生长，可以氧化山梨糖成古龙酸，但小菌单独培养生长欠佳，且产酸甚微，需与大菌混合培养，其与小菌共同发酵有明显促进小菌产酸的作用，大菌为小菌的伴生菌，在整个发酵中小菌起到关键的作用，且需要掌握大小菌的合适比例。原有古龙酸生产技术环节中，一般不进行常规的菌种保藏，其保藏方式是制备的种子液一部分进罐发酵生产，一部分经过分离制备成斜面，再制备种子液，制备的种子液一部分进罐生产，一部分经过分离制备成斜面，通过对产生菌采用反复循环、活化、传代的方式为生产提供种子液。由于频繁传代、活化，菌种很容易出现大小菌比例失调，产酸能力下降，甚至因为反复移种、传代极易造成大面积染菌现象，从而使生产的稳定性不能得到有效的控制和保障，因为发酵生产水平的波动，给后工序生产同时带来了技术难度，为产品的质量问题也埋下了隐患。
技术实现思路
本专利技术的目的就在于`克服上述现有技术的缺陷，提供一种维生素C混合菌的保藏方法，利用该方法可保证菌种的相对稳定性，防止因菌种质量的不稳定性给生产造成波动。为实现上述专利技术目的所采取的技术方案为:一种维生素C混合菌的保藏方法，其特征是:将大、小菌搭配培养的维生素C混合菌种之斜面，用体积浓度为50%的甘油制备成悬浮液，再封装于无菌冻存管中，置于_70±2°C温度下保存。上述大、小菌搭配培养的过程为:a.将经过摇瓶筛选，且生产性能优良的原始菌菌株的种子液分离于平板，涂布均匀，置29.5±1°C培养箱培养60~72小时；b.在无菌条件下挑外观生长良好，半透明，分布均匀，无杂菌的小菌放入无菌水中，使小菌水呈乳白色，接种至茄形瓶斜面上，放入29.5±1°C恒温室培养22~24小时，观察无杂菌生长后，接入生长良好，大小适中，边缘齐整的大菌，在同等温度条件下继续培养46~50小时。上述冷冻的菌体经过三代活化培养后用于大生产。本专利技术将优质的菌株增殖培养，用甘油制成悬浮液后进行批量的冷冻保藏，保证每个周期的菌种质量都是一致的，且只使用一个生产周期，并且每个生产周期使用的菌种是独立包装保存的，生产过程不需常年依靠转种的方式保留菌种，有效防止染菌或种液质量退化现象，使发酵过程更趋于稳定，为提炼工序打下良好基础，产品质量得到保障。采用本专利技术方法保藏的VC 二步菌菌种，其菌种死亡率在1%以下，变异率为零，其菌种的特性和稳定性可保持五年以上，且需用时操作方法简单易行。采用冻存管活化三代种液进罐生产以来，无论是从试验罐到大生产，二步菌发酵水平都基本保持在115-125mg/ml的水平，二步转化率在94%以上，生产得到了稳定，也避免了因频繁传代带来的风险。按照此菌种保藏方法，经过近四年的保藏，维生素C混合菌菌种的性能丝毫未减，生产各项指数稳定，避免了反复传代带来的波动及染菌的风险对生产的影响。应用本专利技术的方法，既简化了操作工艺，又稳定了生产，且在种子制备环节，减少了人员操作，降低了人工成本。【权利要求】1.一种维生素C混合菌的保藏方法，其特征是:将大、小菌搭配培养的维生素C混合菌种之斜面，用体积浓度为50%的甘油制备成悬浮液，再封装于无菌冻存管中，置于-70±2°c温度下保存。2.按照权利要求1所述的维生素C混合菌的保藏方法，其特征在于上述大、小菌搭配培养的过程为: a.将经过摇瓶筛选，且生产性能优良的原始菌菌株的种子液分离于平板，涂布均匀，置29.5±1°C培养箱培养48~72小时； b.在无菌条件下挑外观生长良好,半透明，分布均匀，无杂菌的小菌放入无菌水中，使小菌水呈乳白色，接种至茄形瓶斜面上，放入29.5± I°C恒温室培养22~24小时，观察无杂菌生长后，接入生长良好，大小适中，边缘齐整的大菌，在同等温度条件下继续培养46~50小时。3.按照权利要求1所述的维生素C混合菌的保藏方法，其特征是:冷冻的菌体经过三代活化培养后用于大生产。【文档编号】C12N1/04GK103497895SQ201310443256【公开日】2014年1月8日 申请日期:2013年9月26日 优先权日:2013年9月26日 【专利技术者】李学兵, 于新燕, 胡继红, 陈惠琴 申请人:宁夏启元药业有限公司本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种维生素C混合菌的保藏方法，其特征是：将大、小菌搭配培养的维生素C混合菌种之斜面，用体积浓度为50%的甘油制备成悬浮液，再封装于无菌冻存管中，置于?70±2℃温度下保存。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李学兵，于新燕，胡继红，陈惠琴，
申请(专利权)人：宁夏启元药业有限公司，
类型：发明
国别省市：