一种耐高温产酮古洛糖酸菌菌株及其用途、应用方法技术

本发明专利技术涉及一种耐高温产酮古洛糖酸菌菌株及其用途、应用方法，本发明专利技术采用多次离子体注入诱变方法结合循序渐进提高摇瓶选育温度筛选法最终获得耐高温的普通产酮古洛糖酸菌VC2

【技术实现步骤摘要】
一种耐高温产酮古洛糖酸菌菌株及其用途、应用方法


[0001]本专利技术属于微生物
，特别是涉及一种耐高温产酮古洛糖酸菌菌株及其用途、应用方法。

技术介绍

[0002]维生素C(VC)是人体必需的一种维生素，在抗氧化和维持新陈代谢平衡等方面具有广泛的生理作用。在医药工业、食品工业、饲料行业以及化妆品行业上均有重要用途。其应用范围广阔，市场规模也巨大。
[0003]目前，全球90％以上的VC生产，均利用我国专利技术的“二步发酵法”，即第一步是单菌发酵，在氧化葡萄糖杆菌(泰国葡糖杆菌)的作用下将D
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山梨醇转化成L
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山梨糖；第二步是混合菌发酵，通过普通产酮古洛糖酸菌(俗称小菌)和巨大芽孢杆菌(俗称大菌)的共同作用将L
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山梨糖转化成2
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酮基
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L
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古龙酸(2
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KGA)，2
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酮基
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L
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古龙酸再经过提取和转化生成维生素C。在其混合菌系中：普通产酮古洛糖酸菌(俗称小菌)是产2
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KLG的关键菌株，具有氧化底物L
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山梨糖为2
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KLG的酶系统，但该菌(小菌)独立生长及产2
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KLG能力非常弱，需要巨大芽孢杆菌(俗称大菌)提供某些效应物促进其生长及产2
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KLG；大菌本身能独立生长，却不能转化L
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山梨糖为2
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KLG，两者协同作用。
[0004]在实际生产中，通常采用诱变育种方式筛选高产菌株以获得产能，未能充分考虑到菌株的耐高温性，导致无法解决夏季生产中发酵罐温度过高对VC产生菌的影响而导致的发酵波动问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的就在于提供一种耐高温产酮古洛糖酸菌菌株。
[0006]本专利技术的另一目的是提供上述耐高温产酮古洛糖酸菌菌株的用途。
[0007]本专利技术的另一目的是提供上述耐高温产酮古洛糖酸菌菌株的应用方法。
[0008]为实现上述专利技术目的所采取的技术方案为：
[0009]一种耐高温产酮古洛糖酸菌菌株，其特征在于，所述菌株为普通产酮古洛糖酸菌VC2
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M
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180914
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145(小菌)，于2020年8月21日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为：CCTCC NO：M 2020400，保藏地址，武汉大学，中国武汉。
[0010]将上述普通产酮古洛糖酸菌VC2
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M
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145(小菌)应用在维生素C二步发酵法中，主要是将其作为二步混合菌发酵的小菌使用。
[0011]本专利技术采用多次离子体注入诱变方法结合循序渐进提高摇瓶选育温度筛选法最终获得耐高温的普通产酮古洛糖酸菌VC2
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M
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145(小菌)，解决菌体高温下酶活力降低，产酸量下降的现状，有效的保障生产的稳定性。
[0012]本专利技术的普通产酮古洛糖酸菌VC2
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M
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145(小菌)相比正常温度选育的菌株，产酸更加稳定，且产酸高于正常温度选育菌株，说明在夏季高温环境下，菌株VC2
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145(小菌)更易适应高温环境下代谢。
[0013]本专利技术的普通产酮古洛糖酸菌VC2
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145(小菌)可通过液态发酵生产2
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KLG，产量稳定。
[0014]本专利技术的普通产酮古洛糖酸菌VC2
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145(小菌)生物学特性：菌株革兰氏染色为革兰阴性菌，在固体培养基上培养的。
[0015]使用FMIC
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QO01
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001
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2015微生物学检测，细菌多相鉴定检测方法对该菌株进行菌种鉴定。鉴定结果如下：
[0016]1、生物学特性：使用TSA培养基，在固体培养基上30℃培养24h,菌落形态凸起，完整，光滑的圆形菌落，菌落表面呈油状，透明。菌落表面湿润光滑呈黄色油状，不透明。显微镜观察菌体呈短杆，可形成短链或丝状体，，革兰氏染色为革兰阴性菌。
[0017]2、生理生化特征：通过VITEK BCL鉴定卡对其代谢利用的碳源、氮源的种类的检测，可确定其有无特殊营养需要，存在的酶的种类等代谢特性。
[0018][0019][0020]符号说明：“+”阳性：
“‑”
阴性。
[0021]本专利技术菌株的保藏信息如下：
[0022]分类命名：普通产酮古洛糖酸菌VC2
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145(小菌)
[0023]Ketogulonicigenium vulgare VC2
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M
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145(小菌)
[0024]保藏编号：CCTCC NO：M 2020400，
[0025]保藏时间：2020年8月21日，
[0026]保藏单位：中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，
[0027]保藏地址：中国武汉，武汉大学。
附图说明
[0028]图1为本专利技术普通产酮古洛糖酸菌VC2
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M
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145(小菌)的保藏证明。于2020
年8月6日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为：CCTCC NO：M 2020400。
具体实施方式
[0029]下面用实例予以说明本专利技术，应该理解的是，实例是用于说明本专利技术而不是对本专利技术的限制。本专利技术的范围与核心内容依据权利要求书加以确定。
[0030]下述大小菌来源于原始引进菌种080322。本企业技术部门人员通过自然选育的方式对原种菌种(080322:大小菌混菌菌种)进行定期复壮逐步获得留种菌株，将留种菌株试管斜面上的混菌菌体用甘油当保护剂刮下后，转移至冻存管在
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70℃深冷冰箱保存。使用时取出留种菌株冻存管中的冻存液菌体接入种液培养基进行活化，将活化种液直接梯度稀释后分离平板。分离平板生长3天结束培养，分离平板上生长着大小菌2种菌，从混菌分离平板上仅挑取一定数量的饱满、边缘整齐的小菌至灭菌的定量纯化水中即可得到小菌悬浮液。
[0031]一、本专利技术普通产酮古洛糖酸菌VC2
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145(小菌)的筛选方法。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种耐高温产酮古洛糖酸菌菌株，其特征在于，所述菌株为普通产酮古洛糖酸菌VC2
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145（小菌），于2020年8月21日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为：CCTC...

【专利技术属性】
技术研发人员：马学霞，郭惠芬，董春宁，朱娜，蒋鸿，柳小强，孙瑞君，胡继红，
申请(专利权)人：宁夏启元药业有限公司，
类型：发明
国别省市：