本发明专利技术公开了一种粒毛盘菌胞内黑色素作为急性肝损伤的抗炎保肝药物的用途，特征是由菌种保藏编号为CCTCC No:M 2011054的粒毛盘菌制备得到的胞内黑色素LIM30，通过药理学实验证明，粒毛盘菌胞内黑色素LIM30可以显著改善急性肝损伤小鼠肝脏指数，降低ALT、AST水平，降低NF‑κB含量，降低炎性因子以及炎症相关因子水平，具有良好的抗炎保肝功效；此外，LIM30可以上调小鼠血清中抗炎因子的水平。LIM30无毒副作用，可用于制备抗炎保肝药物，并可根据需要按药剂学的常规制备方法制成各类剂型，服用方便。
The utility model relates to an intracellular melanin as the drug for acute liver injury
The present invention discloses a kind of Lachnum intracellular melanin use as anti-inflammatory hepatoprotective drugs in acute liver injury, is characterized by the preservation number is Lachnum CCTCC No:M 2011054 prepared by intracellular melanin LIM30, through pharmacological experiments prove that Lachnum intracellular black cytochrome LIM30 can significantly improve the liver index of mice with acute liver injury, reduce ALT, AST level, NF reduced kappa B content, reduce inflammatory factors and inflammation related cytokines and has anti-inflammatory and hepatoprotective effects of good; in addition, LIM30 can increase anti-inflammatory cytokine levels in serum of mice. LIM30 non-toxic side effects, can be used to prepare anti-inflammatory and liver protective drugs, and can be made according to the needs of the conventional preparation method of pharmaceutics, all kinds of dosage forms, easy to take.
【技术实现步骤摘要】
一种粒毛盘菌胞内黑色素作为急性肝损伤药物的用途
本专利技术属于粒毛盘菌胞内黑色素在制药中的应用
，具体涉及菌种保藏编号为CCTCCNo:M2011054的粒毛盘菌的胞内黑色素(简称LIM30)作为治疗急性肝损伤药物的应用。
技术介绍
急性肝损伤是一种严重的临床综合征，可在短时间内损害肝功能并导致肝细胞死亡。细菌脂多糖(LPS)与D-氨基半乳糖(D-GalN)引起的急性肝损伤通常伴随大量的炎症反应，临床上使用的治疗药物如地塞米松是一类糖皮质激素，可以快速有效的起到抗炎功效，但是长时间使用易引起不良反应，如类肾上腺皮质亢进综合征，还可能会进一步加重病情。因此，从天然产物中寻找急性肝损伤的治疗药物具有重要的意义。黑色素广泛分布在生物界。据《色素细胞研究》(PigmentCellResearch，2005,18(2):130–135.)介绍，黑色素是由多羟基酚、多羟基吲哚与吡咯氧化而成的构造不规则的化合物。本专利技术人课题组于2011年3月2日已将一种粒毛盘菌菌株保藏于武汉市武昌珞珈山武汉大学生命科学学院中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNo:M2011054，已收到保藏菌株成活的证明通知；并公开了名称为“一种水溶性粒毛盘菌黑色素及其作为促排铅药物的用途”、专利申请号为ZL201410306301.7的专利技术专利，该粒毛盘菌黑色素具有促排铅功效。《国际生物大分子》(InternationalJournalofBiologicalMacromolecules,2014,63:170-176.)报道了一种粒毛盘菌黑色素LEM404的提取方法，并发现其具有抗辐射活性。但至今未见有文献公开提及将粒毛盘菌黑色素作为对LPS/D-GalN诱导的小鼠急性肝损伤的保护剂方面的应用报道。
技术实现思路
本专利技术提供一种粒毛盘菌胞内黑色素作为急性肝损伤的抗炎保肝药物的用途，以满足人们对抗炎保肝药物的需求。本专利技术粒毛盘菌胞内黑色素作为急性肝损伤药物的用途，其特征在于：所述粒毛盘菌胞内黑色素，是将菌种保藏编号为CCTCCNo:M2011054的粒毛盘菌的菌株子实体接种于发酵罐，培养基配方为：葡萄糖20g/L，酵母膏5.0g/L，蛋白胨5.0g/L，pH自然，装料系数体积比为0.7，接种量体积比为5％，培养温度为28℃，通气量为1.0L/min，搅拌转速为180r/min，发酵时间为12d；将发酵液抽滤，收集菌丝体，60℃烘干，按菌丝体的质量(g)与浓度为1mol/L的氢氧化钠水溶液的体积(mL)比为1:50(g/mL)混匀，室温静置24h，抽滤得浸提液；向上述浸提液加入浓度1mol/L的HCl调节pH为1～2，静置12h后将上述悬浮液离心，所得到的沉淀经去离子水洗涤至pH为7后，真空冷冻干燥，即得黑色素粗品；再将该黑色素粗品加入6mol/LHCl后于100℃酸解6h。酸解后，抽滤得沉淀，沉淀经双蒸水洗涤至上清液pH值为7时重新溶于0.5mol/LNH3·H2O溶液，水浴蒸去NH3至溶液pH为中性后，依次经氯仿、乙酸乙酯萃取，加入无水乙醇，旋转蒸发除去有机相，使用200Da透析袋流水透析48h，去离子水透析24h，真空冷冻干燥，所得到的粒毛盘菌胞内黑色素LIM30(本专利技术人课题组自己的命名代码)，通过将该粒毛盘菌胞内黑色素LIM30对LPS/D-GlaN诱导的急性肝损伤治疗作用的药理实验，确认其具有抗炎保肝活性，并确定其有效剂量，从而将其用于治疗急性肝损伤的抗炎保肝药物----可按药剂学的常规制备方法，将有效量的粒毛盘菌胞内黑色素LIM30与药用辅料混合，加工制备成片剂或胶囊。本专利技术通过药理学试验，首次证实粒毛盘菌胞内黑色素LIM30可以通过降低炎性因子水平、提高抗炎因子水平、降低炎性介质水平达到抗炎保肝的作用，并且无毒，该种药物可以通过胶囊、片剂形式给药，是一种优良的抗炎保肝药物。同时，使用粒毛盘菌发酵生产，为大规模生产该黑色素及相关产品提供可能，不产生污染，能产生较好的规模效益。附图说明图1给出了作比较的小鼠肝脏组织病理学检查放大400倍的光学显微镜照片(400×)。具体实施方式实施例1：(一)粒毛盘菌胞内黑色素LIM30的制备将本专利技术人课题组2011年3月2日保藏于武汉市武昌珞珈山武汉大学生命科学学院中国典型培养物保藏中心，菌种保藏编号为CCTCCNo:M2011054的粒毛盘菌的菌株子实体接种于发酵罐，培养基配方为：葡萄糖20g/L，酵母膏5.0g/L，蛋白胨5.0g/L，pH自然，装料系数体积比为0.7，接种量体积比为5％，培养温度为28℃，通气量为1.0L/min，搅拌转速为180r/min，发酵时间为12d；将发酵液抽滤，收集菌丝体，60℃烘干，按菌丝体的质量与浓度为1mol/L的氢氧化钠水溶液体积比为1:50混匀，室温静置24h，抽滤得浸提液；向上述浸提液加入1mol/LHCl调节pH为1～2，静置12h后将上述悬浮液离心，所得到的沉淀经去离子水洗涤至pH为7后，真空冷冻干燥，即得黑色素粗品；再将该黑色素粗品加入6mol/LHCl后于100℃酸解6h。酸解后，抽滤得沉淀，沉淀经双蒸水洗涤至上清液pH值为7时重新溶于0.5mol/LNH3·H2O溶液，水浴蒸去NH3至溶液pH为中性后，依次经氯仿、乙酸乙酯萃取，加入无水乙醇，旋转蒸发除去有机相，使用200Da透析袋流水透析48h，去离子水透析24h，真空冷冻干燥，即得到粒毛盘菌胞内黑色素LIM30(本专利技术人课题组自己命名的名称代码)。(二)药理实验(1)实验小鼠选用雄性昆明小鼠(20±2g)在室温25±1℃下在12h光照/黑暗循环下饲养在动物护理设施中，并给予自由饮食和饮水。在治疗之前，将小鼠放置7d以适应新的环境。(2)模型药物为脂多糖(LPS)，D-氨基半乳糖(D-GalN)；阳性药物为地塞米松注射液(购自江西博莱大药厂)。(3)将小鼠随机分为以下7组：正常组：生理盐水，灌胃；模型组：500mg/kgD-GalN+25μg/kgLPS，腹腔注射；阳性组：LPS+GalN+地塞米松1mg/kg，腹腔注射；LIM30低剂量实验组：(50mg/kgLIM30，灌胃)+(LPS+D-GalN，腹腔注射)；LIM30高剂量实验组：(100mg/kgLIM30，灌胃)+(LPS+D-GalN，腹腔注射)；LIM30低剂量对照组：50mg/kgLIM30，灌胃；LIM30高剂量对照组：100mg/kgLIM30，灌胃。所有组每天灌胃一次，连续7d。在第7d灌胃后1h腹腔内注射溶解在生理盐水中的LPS、D-GalN，注射阳性药物。5h后，眼球取血，收集血清和肝组织用于随后的分析。(4)检测指标有：小鼠体重和器官指数测定：称量小鼠体重；小鼠取血后处死，取其肝脏、脾脏及胸腺并称重，分别计算脏器指数。脏器指数＝脏器质量/体质量×100。小鼠生化指标测定：血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、iNOs合酶(试剂盒购自南京建成生物工程研究所)，肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-8(IL-8)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-4(IL-4)、白介素-10(IL-10)、NO含量和肝脏核转录因子kappaB(NF-κB)含量(试剂盒购自上海研生生物技术有限公司)。本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种粒毛盘菌胞内黑色素作为药物的用途，其特征在于该粒毛盘菌胞内黑色素是由菌种编号CCTCC No:M 2011054得到的粒毛盘菌胞内黑色素LIM30，用于作为治疗急性肝损伤的抗炎保肝药物。
【技术特征摘要】
1.一种粒毛盘菌胞内黑色素作为药物的用途，其特征在于该粒毛盘菌胞内黑色素是由菌种编号CCTCCNo:M2011054得到的粒毛盘菌胞内黑色素LIM30，用于作为治疗急性肝损伤的抗炎保肝药物。2.如权利要求1所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：叶明，徐灿，杨柳青，李井雷，杨柳，
申请(专利权)人：合肥工业大学，
类型：发明
国别省市：安徽,34
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