防止细胞转化和癌症转移的组合物和方法技术

本申请提供了用于表征微泡或其他膜结构的方法。所述方法包括检测样品中的微泡或其他膜结构，并且在某些方面包括确定存在或不存在组织谷氨酰胺转移酶（tTG）和/或交联纤连蛋白（FN）。可以使用重组tTG或其衍生物，或者tTG或FN结合配体从样品中分离所述微泡或其他膜结构。本申请还提供了抑制物质从含有tTG的微泡转移至一个或多个细胞的方法。所述方法包括给予个体tTG抑制剂，如具有细胞不透性的tTG抑制剂。本申请还提供了组合物，所述组合物含有微泡或其他膜结构群，其中所述群附着于tTG或其衍生物，或者附着于tTG或FN的结合配体之上。本申请还提供了用于实施所述方法的试剂盒，所述试剂盒包括试剂和其他组分。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本申请提供了用于表征微泡或其他膜结构的方法。所述方法包括检测样品中的微泡或其他膜结构，并且在某些方面包括确定存在或不存在组织谷氨酰胺转移酶（tTG）和/或交联纤连蛋白（FN）。可以使用重组tTG或其衍生物，或者tTG或FN结合配体从样品中分离所述微泡或其他膜结构。本申请还提供了抑制物质从含有tTG的微泡转移至一个或多个细胞的方法。所述方法包括给予个体tTG抑制剂，如具有细胞不透性的tTG抑制剂。本申请还提供了组合物，所述组合物含有微泡或其他膜结构群，其中所述群附着于tTG或其衍生物，或者附着于tTG或FN的结合配体之上。本申请还提供了用于实施所述方法的试剂盒，所述试剂盒包括试剂和其他组分。【专利说明】 相关申请的交叉引用本申请要求2011年2月17日提交的申请号为61/443，978的美国临时专利申请的优先权，其公开的内容通过引用并入本文。专利
本专利技术一般地涉及癌症的诊断和治疗，更具体地涉及基于从癌细胞上脱落的微泡的新型癌症标记物和疗法。 专利技术背景肿瘤进展涉及癌细胞在其微环境中彼此间以及与邻近的正常细胞之间相互沟通的能力。来源于人体癌细胞的微泡(MV)已受到关注，因为其明显能够参与信号蛋白在癌细胞之间的水平转移，并且促进癌细胞的侵袭活性。不同类型的高级或侵袭形式的人癌细胞释放MV至其周围环境，这已越来越多的被认为是一种肿瘤生物学的特征。然而，对这些结构是如何产生的及其在癌症进展中的重要性目前仍知之甚少。因此，探索MV在癌症中迄今为止尚未被确认的作用，并利用这些作用开发涉及诊断方法和治疗干涉的组合物和方法具有持续和尚未满足的需求。本专利技术满足了这些需求。 专利技术简述本专利技术部分地基于我们的发现，即在微泡(MV)介导的正常细胞转化中，从癌细胞脱落的(MV)必需包含组织谷氨酰胺转移酶(tTG)。在这方面，我们发现从多种类型的人癌细胞上脱落的MV都能够赋予正常细胞(以成纤维细胞和上皮细胞为代表的非癌细胞)转化的表型，通过类似存活能力的增强和锚定非依赖性生长，能够证明这种转化表型。我们还发现tTG本身不足以转化正常细胞。相反，tTG必需和一种与其相结合和交联的蛋白(纤连蛋白(FN)) —起参与到正常细胞的转化过程中。因而，本专利技术的一个方面是鉴定具有诱导细胞转化能力的MV，所述转化依赖于tTG的存在。在另一个方面，本专利技术提供了通过调节与微泡相结合的tTG的作用来抑制诱导正常细胞转化的方法。在一个实施方式中，本专利技术提供了 一种表征微泡的方法。所述方法包括获取含有微泡的样品和检测微泡中的tTG。基于对MV的检测确定MV是否含有tTG和/或交联的FN，如果在样品中存在与微泡相结合的tTG则将所述MV鉴定为tTG阳性，相反，如果在样品中不存在与微泡相结合的tTG则将所述微泡鉴定为tTG阴性。在另一个实施方式中，所述方法包括检测tTG阳性微泡的存在情况。所述方法包括获取样品和对所述样品进行分析以检测与tTG结合的微泡的存在情况。在另一个实施方式中，所述方法包括获取含有微泡的样品，并对所述微泡进行检测以确定其是否包含交联的FN。如果样品中存在与微泡相结合的交联FN则将所述MV鉴定为交联FN阳性，相反如果样品中不存在与微泡相结合的交联FN则将所述微泡鉴定为交联FN阴性。所述方法适于分析含有MV的任意样品。在一个实施方式中，所述样品包括来自诊断为患有癌症、疑似患有癌症、或存在癌症风险的个体的液体生物样品。在一个实施方式中，所述样品来自正在接受癌症治疗的个体。本专利技术的一个方面包括将个体诊断为具有循环微泡的方法，所述循环微泡为tTG和/或交联的FN阳性或者tTG和/或交联的FN阴性。所述方法包括检测来自个体的样品中的与微泡相结合的tTG和/或交联的FN，如果分别存在tTG和/或交联的FN，则将所述个体鉴定为具有与tTG和/或交联的FN相结合的循环微泡，如果均不存在与微泡相结合的tTG和/或交联的FN，则将所述个体鉴定为不具有与tTG和/或交联的FN相结合的循环微泡。在不同实施方式中，检测所述微泡包括采用任意适合的技术从液体生物样品中分离微泡。在一个实施方式中，分离所述MV包括使用结合配体捕获。可以使用能够选择性结合tTG或FN，或者选择性结合包括tTG和FN的复合物的任意试剂。在某些实施方式中，所述结合配体选自FN、抗-FN抗体或其抗体结合片段或衍生物、重组tTG和经修饰的tTG、tTG或经修饰的tTG的片段、抗-tTG抗体或其抗体结合片段或衍生物、以及上述试剂的组合。可以使用任意适合的技术和试剂检测是否存在tTG。在不同实施方式中，可以使用上述结合配体中的一种或组合进行检测，其中所述结合配体已被检测标记和/或附着于基质上。在另一个方面，本专利技术包括从样品中分离膜结构的方法。该实施方式包括提供可能含有所述膜结构的样品并将所述样品与tTG或其衍生物混合，如果样品中存在所述膜结构，则允许其形成膜结构与tTG或其衍生物的复合物。如果存在所述膜结构，将所述tTG和膜结构的复合物与样品的其余部分分离。本专利技术的另一个方面包括抑制物质从含有tTG的微泡转移至个体中的一个或多个细胞的方法。所述方法包括给予所述个体tTG抑制剂。所述tTG抑制剂可以是具有细胞不透性的tTG抑制剂，如生物试剂，包括但不限于抗体，或者其可以是药学试剂，如小分子tTG抑制剂。本专利技术还提供了一种包括分离的微泡群的组合物，其中所述微泡包含tTG，其中所述分离的微泡群附着于tTG或FN结合配体。本专利技术还提供了用于检测tTG阳性微泡的试剂盒。 附图的简要说明图1.利用扫描电子显微镜SEM (左图)和使用与罗丹明偶联的鬼笔环肽的免疫荧光显微镜检测F-肌动蛋白(右图)来对MDAMB231细胞进行分析。一些最大的MV如箭头所/Jn ο图2.对在血清饥饿或EGF刺激条件下培养的多种细胞系中产生的MV进行定量。通过使用与罗丹明偶联的鬼笔环肽标记所述样品对产生MV的细胞进行检测。数据以平均值土 s.d.表示，其来自三次独立实验。图3.图2所示实验中细胞的图像。一些MV如箭头所示。图4.用实时成像的荧光显微镜观察MDAMB231细胞，所述MDAMB231细胞瞬时表达来自Lyn酪氨酸激酶(GFP-PM)的质膜靶序列的GFP标记形式。其显示了以2分钟间隔拍摄的转染子的一系列延时图像。箭头表示形成并从细胞中脱落的W。图5.将模拟转染或使用pEGFP (编码GFP的质粒)转染的去血清的MDAMB231细胞裂解，并将通过转染子脱落至培养基中的MV分离和裂解。然后使用针对GFP、MV-标记物脂筏标记蛋白_2 (flotillin-2)、和细胞质特异性标记物ΙκΒα的抗体对全细胞裂解物(WCL)和MV裂解物进行的免疫印迹法分析。图6.使用针对MV-标记物肌动蛋白和脂筏标记蛋白-2、细胞质特异性标记物I K B α、和活化的(磷酸基)-EGF-受体的抗体对血清饥饿的MDAMB231和U87细胞的全细胞裂解物(WCL)以及这些细胞脱落的MV的裂解物进行免疫印迹法分析。图7.如图所示将多组去血清的ΝΙΗ3Τ3成纤维细胞与无血清培养基、含2%小牛血清(CS)的培养基、或补充了来源于MDAMB231或U87细胞的完整MV的培养基共同培养。暴露于不同培养条件下指定时长后，将一组细胞裂解，并使本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·塞立昂，M·安东雅克，W·K·塞立昂，李波，
申请(专利权)人：康奈尔大学，
类型：
国别省市：