麻保沙星快速检测试纸卡及制备方法技术

本发明专利技术涉及一种麻保沙星快速检测试纸卡及制备方法，试纸卡包括外壳和试纸芯，试纸芯包括底板和底板上的样品垫、胶体金标记垫、检测反应区和吸水垫，胶体金标记垫吸附有麻保沙星的特异性抗体，检测反应区设有麻保沙星偶联载体蛋白溶液印制的检测印迹，以及用羊或（兔）抗小鼠IgG、或羊抗兔IgG溶液印制的对照印迹；麻保沙星特异性抗体为胶体金标记的麻保沙星单克隆抗体或多克隆抗体。制备时底座和面板嵌合在一起，面板上检测窗与试纸芯检测反应区对应，加样孔与试纸芯样品垫对应。该试纸卡特异性强、敏感性高，检测简便、快速、时效性强，结果显示形象、直观、准确，检测费用低，适用范围广，便于推广。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及一种，试纸卡包括外壳和试纸芯，试纸芯包括底板和底板上的样品垫、胶体金标记垫、检测反应区和吸水垫，胶体金标记垫吸附有麻保沙星的特异性抗体，检测反应区设有麻保沙星偶联载体蛋白溶液印制的检测印迹，以及用羊或（兔）抗小鼠IgG、或羊抗兔IgG溶液印制的对照印迹；麻保沙星特异性抗体为胶体金标记的麻保沙星单克隆抗体或多克隆抗体。制备时底座和面板嵌合在一起，面板上检测窗与试纸芯检测反应区对应，加样孔与试纸芯样品垫对应。该试纸卡特异性强、敏感性高，检测简便、快速、时效性强，结果显示形象、直观、准确，检测费用低，适用范围广，便于推广。【专利说明】
本专利技术涉及一种快速检测麻保沙星的器具，特别是涉及一种快速检测麻保沙星的试纸卡及制备方法。技术背景麻保沙星为氟喹诺酮类抗生素，具有抗菌普广、杀菌活性强、体内分布广泛等特点，并且与其他抗菌药物无交叉耐药性。目前，该抗生素广泛应用于畜禽和水产养殖中。麻保沙星作为用于食品类动物中的药物，其在动物可食性组织和产品中的残留致癌毒性备受关注。国家对其在不同肉品中最高残留量做了严格规定。因麻保沙星价格低廉，抗菌普广、杀菌活性强，养殖户盲目追求预防和治疗效果，人为超量添加，造成在肉品中残留超标的现象普遍存在。因此，精确检测肉品中麻保沙星残留量非常重要。目前，测定麻保沙星的方法多为高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用、毛细管区带电泳与质谱联用等法。这些方法检测时间一般较长，检测成本高，对检测人员素质要求高，严重制约了在实际检测中的应用，难以推广。由于这些方法的局限性和严重滞后性，使监控麻保沙星的非法使用变得困难，无法保证食品安全监控的有效性。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题:提供一种特异强、灵敏度高，能快速、简便地检测麻保沙星的试纸卡及制备方法。本专利技术的技术方案是: 一种麻保沙星快速检测试纸卡，含有外壳和位于外壳内的试纸芯，试纸芯包括底板，底板上依次固定黏贴有样品垫、胶 体金标记垫、检测反应区和吸水垫，所述胶体金标记垫吸附有麻保沙星的特异性抗体，所述检测反应区设有麻保沙星偶联载体蛋白溶液印制的隐形检测印迹，以及用羊抗小鼠IgG、兔抗小鼠IgG或羊抗兔IgG溶液印制的隐形对照印迹；所述麻保沙星特异性抗体为胶体金标记的麻保沙星单克隆抗体或多克隆抗体。所述麻保沙星偶联载体蛋白溶液是由以下方法制备的: 称取2 mg麻保沙星溶解于500 μ?的DMF溶剂中，加入2 mg NHS和2 mg EDC，室温避光反应24h，得到活化的麻保沙星液；称取载体蛋白2 mg，充分溶解于2 ml 0.13的mol/L的PBS溶液中，将活化的麻保沙星液逐滴加入载体蛋白溶液中，密封避光于室温下搅拌4h ；将反应产物置于4°C层析柜中用0.01mol/L的PBS透析3天，离心除去沉淀，得到麻保沙星载体蛋白的偶联物，分装，_20°C保存，备用。所述麻保沙星偶联载体蛋白为甲状腺蛋白、鼠血清蛋白、牛血清白蛋白、人血清白蛋白、兔血清白蛋白、卵血清白蛋白或血蓝蛋白。所述底板由硬质塑胶条或不吸水的硬纸条制成；所述样品垫用玻璃纤维棉、尼龙膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜制成；所述吸水垫用吸水滤纸或滤油纸制成；所述检测反应区用硝酸纤维素膜、纯纤维素膜或羧化纤维素膜制成；所述胶体金标记垫用玻璃纤维、聚酯膜、醋酸纤维或尼龙膜制成。所述外壳由底座和面板构成，底座和面板通过嵌合连在一起，底座上设有放置试纸芯的凹槽，面板上设有检测窗、加样孔，检测窗与试纸芯的检测反应区相对应，加样孔与试纸芯的样品垫相对应。所述隐形检测印迹和隐形对照印迹的排列方式为“ I |”、“ + + ”或“.?”。所述麻保沙星快速检测试纸卡的制备方法，包括以下步骤: (1)麻保沙星与载体蛋白的偶联: 称取2 mg麻保沙星溶解于500 μ?的DMF溶剂中，加入2 mg NHS和2 mg EDC，室温避光反应24h，得到活化的麻保沙星液；称取载体蛋白2 mg，充分溶解于2 ml 0.13的mol/L的PBS溶液中，将活化的麻保沙星液逐滴加入载体蛋白溶液中，密封避光于室温下搅拌4h ；将反应产物置于4°C层析柜中用0.01mol/L的PBS透析3天，离心除去沉淀，得到麻保沙星载体蛋白的偶联物，分装，_20°C保存，备用； (2)抗麻保沙星特异性抗体的制备； (3)麻保沙星特异性抗体的制备； 在沸腾的200mL 0.01?0.02%氯金酸溶液中加入新鲜配制的I %柠檬酸钠8mL，获得直径为10-20nm的胶体金溶液，用0.lmol/L的K2CO3调pH值至8.5?9.5，置2?8°C保存，备用；以1:2000的标记比将待标记的麻保沙星单克隆抗体或多克隆抗体加入pH8.5?9.5的金溶胶中，标记IOmin后加入20%的PEG10000至终浓度为0.05%,4°C>1500?3000rpm离心20min,除去未结合的胶体金颗粒,4°C、15000rpm离心lh,弃上清,获初步纯化的胶体金标记物蛋白混合物，再 用丙烯葡聚糖S-400柱层析进行分离纯化，获得麻保沙星胶体金标记抗体； (4)羊抗或兔抗小鼠IgG抗体的制备； 用麻保沙星特异性抗体制备胶体金标记垫；用麻保沙星偶联载体蛋白溶液印制隐形检测印迹，用羊抗或兔抗小鼠IgG抗体溶液印制隐形对照印迹；然后在底板上依次固定黏贴样品垫、胶体金标记垫、检测反应区和吸水垫，组装成试纸芯，将试纸芯装于外壳中进而组装成试纸卡。本专利技术的检测试纸卡具有下列优点: ￠:特异性强，敏感性高。该胶体金层析检测试纸卡以胶体金标记高亲和力的单克隆抗体或多克隆抗体为基础制备而成，胶体金标记物中金颗粒与抗体分子之间无共价键形成，二者通过异性电荷间的范德华力相结合，胶体金标记对抗体的特异性和亲和力影响很小，且具有较高的标记率。因此，试纸卡具有较强的特异性和较高的敏感性，检出麻保沙星最低限量可达到IOppb。:f:简便、快速、时效性强。使用该检测试纸卡，无需任何其它试剂和仪器，可现场操作，试纸卡加入被检样品液后，在5分钟内即可判定检测结果。:f;结果显示形象、直观、准确。试纸卡以显示红色线“ I ”和“ I I ”作为检测结果的阳性和阴性标记，即在检测反应区上显示一条红色线“ I ”时，表示在被检样品中含有麻保沙星；显示两条红色线“ I I ”时，表示在被检样品中不含麻保沙星。结果判定形象、直观、准确，简单明了，不易出现假阳性和假阴性等人为误判。:?节省费用，适用范围广，便于推广。使用检测试纸卡，比用仪器分析和进口ELISA试剂盒的费用大幅下降。此检测工具不需要专业人员操作，可快速准确检测样品的麻保沙星的含量，弥补了分光光度高效液相色谱检测的不足。另外，试纸卡适用范围广，可满足不同层次人员需要，包括实验室检验、口岸检验、集贸市场卫生监督、加工企业和养殖场户等，便于推广应用，具有广阔的市场前景和明显的经济社会效益。⑤本专利技术采用柠檬酸钠还原法制备胶体金溶液，该方法反应过程比较温和，可在常温和中性PH条件下进行，易于操作和控制。采用EDC法制备麻保沙星载体蛋白偶联物，该方法操作步骤比较少，可以节省时间，以减少对样品的处理，提高偶联的效率。【专利附图】【附图说明】图1、麻保沙星快速检测试纸卡俯视结构示意图； 图2、图1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种麻保沙星快速检测试纸卡，含有外壳和位于外壳内的试纸芯，试纸芯包括底板，底板上依次固定黏贴有样品垫、胶体金标记垫、检测反应区和吸水垫，其特征是：所述胶体金标记垫吸附有麻保沙星的特异性抗体，所述检测反应区设有麻保沙星偶联载体蛋白溶液印制的隐形检测印迹，以及用羊抗小鼠IgG、兔抗小鼠IgG或羊抗兔IgG溶液印制的隐形对照印迹；所述麻保沙星特异性抗体为胶体金标记的麻保沙星单克隆抗体或多克隆抗体。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张改平，孙亚宁，王方雨，滕蔓，李青梅，杨继飞，柴书军，
申请(专利权)人：河南省农业科学院，
类型：发明
国别省市：