抗发炎蛋白与制备及使用其的方法技术

本案的揭示是关于抗发炎蛋白、其用途、制备方法及其侦测方法。特定而言，本发明专利技术是关于来自麦卢卡蜂蜜的经甲基乙二醛修饰的主要蜂王浆蛋白及其片段。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗发炎蛋白与制备及使用其的方法
本专利技术是关于抗发炎蛋白、其用途及其侦测方法。
技术介绍
蜂蜜因其多种健康益处而已在世界各地藉由培养使用数个世纪。蜂蜜的两个最重要的健康益处为其抗细菌及抗发炎性质。由蜜蜂自松红梅（Leptospermumscoparium）（一种新西兰及南澳大利亚原生的植物）收集花蜜产生的麦卢卡蜂蜜（Manukahoney）已被识别为一种尤其展现有效抗细菌及抗发炎性质的蜂蜜品种。最近，已发现化学物质甲基乙二醛（MGO/2-氧代丙醛）为麦卢卡蜂蜜的抗细菌活性的主要组分。含有较高浓度的MGO的麦卢卡蜂蜜样本相较于MGO浓度较低的蜂蜜样本具有较高水平的抗细菌活性。咸信MGO赋予蜂蜜以抗细菌性质，这是因为MGO为具高度化学反应性的化合物，且MGO可容易地与细胞分子反应。MGO与细菌中的细胞分子的化学反应损伤对于细菌活力而言重要的分子，且从而MGO充当抗细菌剂。蜂蜜中存在高含量的MGO为区分麦卢卡蜂蜜与其他品种的蜂蜜的特征。大部分蜂蜜品种展现某种程度的抗细菌活性，大部分蜂蜜品种的抗细菌活性主要为蜂蜜中存在过氧化氢的结果。相较而言，麦卢卡蜂蜜主要因蜂蜜中存在MGO而展现抗细菌活性。在2004年Kohno等人在细胞激素层面上研究蜂王浆的抗发炎效应或作用。研究结果表明蜂王浆具有抗发炎作用，该抗发炎作用由抑制活化的巨噬细胞产生促发炎细胞激素（诸如TNF-α、IL-6及IL-1）所致。该研究进一步表明蜂王浆中的活性部分或组分的分子量介于5kDa与30kDa之间。此研究大概阐明大部分蜂蜜具有弱抗发炎效应是因为在蜂蜜中存在蜂王浆蛋白。虽然已了解麦卢卡蜂蜜的抗细菌活性的多重作用机制，但麦卢卡蜂蜜充当抗发炎剂的机制仍然未知。需要研发基于蜂蜜的抗发炎剂，这是因为许多当前可用的抗发炎剂在其使用方面具有较多缺点。举例而言，COX-2抑制剂（一种非类固醇抗发炎药（NSAID）形式）会提高患者的心脏病发作及中风的风险，且阿司匹林（aspirin）可能提高胃肠出血的风险。另外，皮质类固醇经报导会抑制上皮细胞生长且NSAID经报导具细胞毒性，因此此两个类别的抗发炎剂不适用于伤口护理。源自蜂蜜的抗发炎剂相较于当前可用的药物在一或多个领域中可具有较少毒性副作用，且相较于当前可用的抗发炎药物亦可提供可能的不同用途。除需要研发基于蜂蜜的抗发炎药物之外，亦需要研发一种测试蜂蜜样本的抗发炎特性的简便方法。本专利技术旨在满足该两种需要及其他未满足的需要。本专利技术人已识别出来自麦卢卡蜂蜜的约55kDa至75kDa的经修饰王浆主蛋白（apalbumin），其是得自麦卢卡蜂蜜中发现的高含量的甲基乙二醛。本专利技术人已认识到，经修饰的王浆主蛋白相较于未经修饰的王浆主蛋白具有显著较强的抗发炎性质。
技术实现思路
本文描述一种经甲基乙二醛（MGO）化学修饰且在蜂蜜中识别出的王浆主蛋白蛋白质，其展现显著提高的抗发炎效应。在一个方式中，提供一种分离的王浆主蛋白蛋白质或其片段，其已经甲基乙二醛（MGO）化学修饰。在另一具体实施例中，该蛋白为经修饰的王浆主蛋白1（Apa1/MRJP）蛋白或其片段。在另一具体实施例中，经修饰的王浆主蛋白蛋白质或其片段是自麦卢卡蜂蜜中分离。在另一具体实施例中，蛋白或其片段具有至少17个经MGO修饰的氨基酸残基，或17至32个经MGO修饰的氨基酸残基或约32个经MGO修饰的氨基酸残基。在另一具体实施例中，经修饰的氨基酸残基为一或多个赖氨酸或精氨酸残基。在另一方式中，提供一种组成物，其包含分离的经MGO修饰的王浆主蛋白蛋白质或其片段。在另一方式中，提供一种分离的经MGO修饰的王浆主蛋白蛋白质或其片段，其具有「抗发炎能力」且包含与SEQIDNO1中所述的氨基酸序列具有至少75%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的氨基酸序列。在一个具体实施例中，分离的经MGO修饰的王浆主蛋白蛋白质或其片段是自麦卢卡蜂蜜中分离。在另一方式中，提供一种减轻蜂巢组织中的炎症的方法，其包含使包括如上文所定义的分离的经MGO修饰的王浆主蛋白蛋白质的组成物与蜂巢组织接触的步骤。在另一方式中，提供一种（i）降低免疫系统细胞的吞噬率的方法，或（ii）抑制免疫系统细胞上的用于吞噬的受体的方法，其包含投予免疫系统细胞含如上文所定义的分离的经MGO修饰的王浆主蛋白蛋白质的组成物的步骤。在另一具体实施例中，提供一种藉由修饰蜂王浆产生抗发炎分子的方法，该方法包括使蜂王浆与至少0.01%MGO或0.5%MGO或1.0%MGO反应的步骤。该方法可进一步包括自蜂王浆产物中分离经MGO修饰的王浆主蛋白（MRJP1）蛋白质的步骤。在另一方式中，提供一种识别蜂蜜样本的（i）抗发炎能力或（ii）经MGO修饰的王浆主蛋白浓度的方法，其包含以下步骤：a）分析蜂蜜样本的荧光，及b）藉由将一蜂蜜样本的荧光量测值以及一或多种蜂蜜样本的抗发炎能力与先前已经量测的抑制吞噬作用能力比较，来使蜂蜜样本的荧光量测值与蜂蜜样本的抗发炎能力具相关性。在一个具体实施例中，经MGO修饰的王浆主蛋白为经修饰的王浆主蛋白1蛋白质。在一个具体实施例中，该方法用于使得养蜂人能够确定自蜂房收集蜂蜜以获得含有所需抗发炎能力或经MGO修饰的王浆主蛋白含量的蜂蜜样本的恰当时机。在另一具体实施例中，该方法用于使得蜂蜜生产者能够确定储存蜂蜜以获得具有所需抗发炎能力及经MGO修饰的王浆主蛋白含量的蜂蜜样本的所需持续时间。一种增强一或多种王浆主蛋白/（MRJP）蛋白质的抗发炎及荧光特性的方法，该方法是藉由用MGO化学处理来达成。一种提高蜂蜜样本的抗发炎能力及经MGO修饰的王浆主蛋白蛋白质含量的方法，其包含将MGO或MGO前驱分子添加至蜂蜜样本中的步骤。在另一具体实施例中，提供一种增强一或多种王浆主蛋白蛋白质的抗发炎能力的方法，其是藉由用MGO、甲醛、乙二醛及/或戊二醛化学处理来达成。在另一具体实施例中，提供一种增强一或多种王浆主蛋白蛋白质的抗发炎能力的方法，其是藉由用MGO、乙二醛及/或戊二醛化学处理来达成。上述概要大致描述本专利技术的某些具体实施例的特征及技术优势。其他技术优势将在随后的本专利技术的实施方式及实施例中描述。咸信为本专利技术特性的新颖特征在连同任何随附的附图及实施例一起考虑时将自本专利技术的实施方式更透彻地了解。然而，本文提供的附图及实施例意欲协助说明本专利技术或帮助建立对本专利技术的理解，而不意欲限制本专利技术的范围。附图说明图1描绘（a）10%具有高荧光的麦卢卡蜂蜜溶液的荧光发射光谱，及（b）藉由将10mg/ml牛血清白蛋白水溶液与400μg/mlMGO一起培育所制备的经MGO修饰的牛血清白蛋白溶液的荧光发射光谱。图2描绘许多蜂蜜样本的吞噬抑制作用（PIA）对比荧光的图。图3展示麦卢卡蜂蜜的透析保留物在180mlG-50葡聚糖凝胶管柱上的层析洗提。洗提份量为1ml。图4展示自图3中所示的G-50葡聚糖凝胶层析获得的洗提份8、14及23的吞噬作用-抑制活性。结果展示相较于未经处理的对照组得到的吞噬作用降低%。误差杠展示至少三次分析的平均值±1个SD。洗提份23因其几乎不含/不含蛋白质而纳入作为对照物。图5展示来自葡聚糖凝胶G-50层析的洗提份4至10在25mlSuperose12FP本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.12.22 NZ 5901431.一种分离的王浆主蛋白(apalbumin)蛋白质，其已经化学修饰以包含至少17个经甲基乙二醛(MGO)修饰的氨基酸残基，其具有抗发炎能力，且所述王浆主蛋白蛋白质的氨基酸序列为SEQIDNO1。2.如权利要求1的分离的蛋白质，其是自麦卢卡蜂蜜(manukahoney)分离。3.如权利要求1或2的分离的蛋白质，其具有17个至32个经MGO修饰的氨基酸残基。4.如权利要求1或2的分离的蛋白质，其具有约32个经MGO修饰的氨基酸残基。5.如权利要求4的分离的蛋白质，其中该等经修饰的氨基酸残基为赖氨酸或精氨酸。6.如权利要求4的分离的蛋白质，其中该等经修饰的氨基酸残基为赖氨酸。7.一种组成物，其包含权利要求1至6中任一项的分离的蛋白质。8.一种产生抗发炎分子的方法，其中该抗发炎分子为王浆主蛋白蛋白质，其已经化学修饰以包含至少17个经MGO修饰的氨基酸残基，且所述王浆主蛋白蛋白质的氨基酸序列为SEQIDNO1，其中该方法包括修饰蜂王浆，该方法包括使蜂王浆与至少0.5％MGO反应的步骤。9.如权利要求8的方法，其包括在反应的步骤期间加热的步骤。10.如权利要求8的方法，其包括使蜂王浆与至少1.0％MGO反应的步骤。11.如权利要求8至10中任一项的方法，其中该方法进一步包括自该蜂王浆分离经MGO修饰的王浆主蛋白蛋白质的步骤。12.一种减轻蜂巢组织中的炎症的方法，其包含使权利要求7的组成物与该蜂巢组织接触的步骤，其中该方法在活体外操作。13.一种降低免疫系统细胞的吞噬率的方法，其包含投予该免疫系统细胞权利要求7的组成物的步骤，其中该方法在活体外操作。14.一种抑制免疫系统细胞上用于吞噬的受体的方法，其包含投予该免疫系统细胞权利要求7的组成物的步骤，其中该方法在活体外操作。15.一种减少发炎细胞的呼吸爆发及活性氧物质释放的方法，其包含投予该等发炎细胞权利要求7的组成物的步骤，其中该方法在活体外操作。1...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿嫚达·比恩，彼得·莫蓝，雷·库森斯，
申请(专利权)人：曼努卡米德有限公司，
类型：
国别省市：