一种检测甲型流感病毒H7N9亚型的荧光定量RT-PCR试剂盒制造技术

本发明专利技术提供一种检测甲型流感病毒H7N9亚型的荧光定量RT-PCR试剂盒，对甲型流感病毒及H7N9型进行检测。本试剂盒包含定量RT-PCR反应液、酶混合液、引物探针混合液、标准品（甲型流感病毒、H7、N9、RNaseP）、阳性对照品（甲型流感病毒、H7、N9、RNaseP）、阴性对照品。本发明专利技术根据甲型流感病毒、H7、N9的保守区序列设计特异性的引物和探针，引入RNaseP引物探针作为内参，采用一步法四重实时荧光定量RT-PCR技术，可快速、准确的从标本中检测甲型流感病毒及H7N9亚型流感病毒。该试剂盒设计合理，具有极高的特异性、灵敏性和重复性，可应用于甲型流感病毒H7N9亚型引起暴发疫情的实验室应急诊断、快速筛查及发热呼吸道症候群中甲型流感病毒及H7N9亚型的流行病学的研究。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种检测甲型流感病毒H7N9亚型的荧光定量RT?PCR试剂盒,其特征在于，该试剂盒由定量RT?PCR反应液管（1）、酶混合液管（2）、引物探针混合液管（3）、4个标准品管（4）、4个阳性对照品管（5）、阴性对照品管（6）和盒体（7）组成，定量RT?PCR反应液管（1）装有定量RT?PCR反应液，酶混合液管（2）装有酶混合液，引物探针混合液管（3）装有引物探针混合液，4个标准品管（4）分别装有甲型流感病毒、H7、N9、RNase?P，4个阳性对照品管（5）分别装有甲型流感病毒、H7、N9、RNase?P的阳性质粒样品；其中定量RT?PCR反应液含有PCR反应缓冲液、氯化镁和三磷酸脱氧核糖核苷酸混合物，酶混合液含耐热Taq?DNA聚合酶、RNA酶抑制剂和MMLV逆转录酶，引物探针混合液包含四组引物和相应的四种不同荧光标记的探针，阴性对照为高温高压灭菌的焦碳酸二乙酯处理水，阳性对照为甲型流感病毒、H7、N9、RNase?P的阳性质粒样品；荧光定量RT?PCR检测用上游引物和下游引物以及相应的特异性探针序列如下：上游引物Influenza?A?F:?5’??GGARTGGMTAAAGACAAGACCAATC?3’下游引物Influenza?A?R：5’??GGCRTTYTGGACAAASCGTCTAC?3’特异性探针Influenza?A?P:?5’?ROX?AGTCCTCGCTCACTGGGCACGGT?BHQ2?3’上游引物H7?F:?5’??GAGGCRATGCAAAATAGAATACAGAT?3’下游引物H7?R:?5’??CCGAAGCTAAACCARAGTATCACA?3’特异性探针H7?P:?5’?FAM??ACCCRGTCAAACTAAGCAGCGGYTAYAA-?BHQ1?3’上游引物N9?F:?5’??GCCCTGATAAGCTGGCCACT?3’下游引物N9?R:?5??ACTAGTACTTGACCAMCCAATGCA?3’特异性探针N9?P:?5’?VIC??TCACCRCCCACAGTRTACAAYAGCA?BHQ1?3’上游引物RNase?P?F:?5’??AGATTTGGACCTGCGAGCG?3’下游引物RNase?P?R：5’??GAGCGGCTGTCTCCACAAGT?3’特异性探针RNase?P?P:?5’?CY5??TTCTGACCTGAAGGCTCTGCGCG?BHQ2?3’?所述标准品包括甲型流感病毒、H7、N9及核酶RNase?P标准品，其保守区基因序列如下：甲型流感病毒标准品序列为：CGAGGCTCTCATGGAGTGGCTAAAGACAAGACCAATCCTGTCACCTCTGACTAAGGGGATTTTAGGGTTTGTGTTCACGCTCACCGTGCCCAGTGAGCGAGGACTGCAGCGTAGACGCTTTGTCCAAAACGCCCTAAATGGGAATGGH7标准品序列为：CACAGCAAATACAGGGAAGAGGCAATGCAAAATAGAATACAGATTGACCCAGTCAAACTAAGCAGCGGCTACAAAGATGTGATACTTTGGTTTAGCTTCGGGGCATCATGTTTCATACTN9标准品序列为：GATAGGTCCCAGTATCGCGCCCTGATAAGCTGGCCACTATCATCACCGCCCACAGTGTACAACAGCAGGGTGGAATGCATTGGGTGGTCAAGTACTAGTTGCCATGATGGCAAATCCAGGRNase?P标准品序列为：CTTCAGCATGGCGGTGTTTGCAGATTTGGACCTGCGAGCGGGTTCTGACCTGAAGGCTCTGCGCGGACTTGTGGAGACAGCCGCTCACCTTGGCTATTCAGTGGTTGC?所述甲型流感病毒、H7、N9及RNase?P的特异性探针分别采用ROX、FAM、VIC和CY5四种不同荧光标记。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李兰娟，陈瑜，谢国良，崔大伟，霍朝霞，杨先知，郑书发，李雪芬，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：