检测耳聋相关线粒体T7505C突变的试剂盒及应用制造技术

本发明专利技术提供一种检测耳聋相关的线粒体DNA?T7505C突变的试剂盒，由DNA提取混合液、扩增T7505C片段的PCR混合液、针对T7505C设计的一对外引物、针对T7505C设计的一对内引物、限制性内切酶、阳性对照、阴性对照和盒体组成。本发明专利技术运用蛋白酶K消化裂解法，从少量标本中快速提取基因组DNA，不仅解决了传统上从耳聋患者血液中提取DNA的问题，减轻被检者的痛苦；而且还解决了跨地区传递样本的问题。本发明专利技术的试剂盒应用成本低，检测流程简便、快速，结果判读直观，应用本发明专利技术可确保检测结果的特异性和稳定性，可在检测与耳聋相关的线粒体基因tRNAGlnT7505C突变中的应用。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种检测耳聋相关的线粒体DNA?T7505C突变的试剂盒，其特征在于，该试剂盒由DNA提取混合液（1）、扩增T7505C片段的PCR混合液（2）、针对T7505C设计的一对外引物（3）、针对T7505C设计的一对内引物（4）、限制性内切酶（5）、阳性对照（6）、阴性对照（7）和盒体（8）组成，其中，DNA提取混合液（1）主要由细胞裂解液、蛋白酶K、氯仿、苯酚、无水酒精组成；扩增T7505C片段的PCR混合液（2）由脱氧单核苷酸、10×PCR缓冲液、MgCl2、三蒸水和Taq酶组成，针对T7505C设计的一对外引物（3）由外前向引物F:?ACG?CCA?AAA?TCC?ATT?TCA?CT?(SEQ?ID?NO:1)和外反向引物R:?CGG?GAA?TTG?CAT?CTG?TTT?TT?(SEQ?ID?NO:2)构成；针对T7505C设计的一对内引物（4）由内前向引物F:?TAGACAAAAAAGGAAGGAATCGAACCCCCCAAAGCTGGTTTCAAGCCAACCGCTTGGCCTCCA?(SEQ?ID?NO:3)和内反向引物R:?ATGTGCCATTAAGATATATAGG?(SEQ?ID?NO:4)构成；限制性内切酶（5）为限制性内切酶Nla?Ⅲ；阳性对照（6）是含有线粒体序列第7505位点发生T>C突变的酶切样本；阴性对照（7）是不含有线粒体序列第7505位点发生T>C突变的酶切样本。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：管敏鑫，蒋萍萍，冀延春，郑静，梁敏，徐静，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：