【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种提取土生隐球酵母线粒体的方法,其特征在于按以下操作进行:(1)将GM或者YPD液体培养基中培养到对数生长期的土生隐球酵母离心收集菌体,用pH 7.5的0.05mol/L Tris缓冲液洗涤三遍,然后加入预处理缓冲液,在25‑30℃下,100‑200 rpm摇60‑120 min;(2)将上述溶液离心弃去上清,沉淀用0.01mol/L PBS洗两次,然后离心收集沉淀;(3)向沉淀中加入酶解缓冲液,混匀后在温度为28‑36 ℃,转速100‑200 rpm条件下处理2‑6 h,取样在显微镜下观察原生质体形成情况;(4)在显微镜下观察到大部分菌体都破壁形成了原生质体后,离心去掉酶解缓冲液,用0.01mol/L PBS洗一次,取沉淀,加入原生质体裂解液,混匀,然后加入5倍体积的玻璃珠涡旋振荡10‑30 min,取样在显微镜下观察原生质体破碎情况;(5)于4 ℃,1200‑1800 g离心10 min去沉淀,用原生质体裂解液重复洗涤2‑3次,每次均弃去沉淀收集上清液,将所得上清液在4 ℃,12000‑20000 g离心20 min收集沉淀;(6)加入线粒体洗涤缓冲液,在4 ℃,1200‑180 ...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员:年洪娟,李金金,张晶晶,陈丽梅,
申请(专利权)人:昆明理工大学,
类型:发明
国别省市:云南;53
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