引物介导环化的恒温核酸滚环扩增方法及试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种引物介导环化的恒温核酸滚环扩增方法及试剂盒，包括：1）寡核苷酸序列设计；2）从靶核酸中扩增出单链DNA目标模板；3）DNA连接酶环化DNA目标模板；4）环化DNA目标模板滚环扩增。本发明专利技术不用合成高成本的长锁式探针，靶核酸的序列的长度能允许更大，能对靶核酸任意序列进行滚环扩增，并对防止样品被扩增产物污染提供了解决方法，开启了基因检测步入基层单位应用的新时代。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种制备单链DNA链的两个引物相关序列末端连接成环且能至少以该两个引物启动恒温滚环扩增的方法，其特征在于，包括步骤：1）寡核苷酸序列设计寡核苷酸序列至少有四段按靶核酸3’→5’方向设计的引物：F3、FIP、BIP、B3；其中，FIP为前端内引物；BIP为后端内引物；F3、B3是一对外引物，分别位于FIP的上游和BIP的下游；2）从靶核酸中扩增出单链DNA目标模板靶核酸为DNA链或在至少含有逆转录酶的反应溶液中将RNA链靶核酸逆转录为DNA链时，在至少含有带有链置换功能的DNA聚合酶的核酸扩增反应溶液中，利用引物F3、FIP、BIP、B3，根据靶核酸序列扩增合成出单链DNA目标模板；3）DNA连接酶环化DNA目标模板在至少含有DNA连接酶的反应溶液中，DNA目标模板的首尾两端被连接形成闭合的环化DNA链；4）环化DNA目标模板滚环扩增在至少含有DNA连接酶和带有链置换功能的DNA聚合酶的反应溶液中，至少以步骤1）中的两个内引物启动环化DNA链的滚环扩增，得到扩增的核酸产物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：周中人，周正峰，林忠旺，蒋庭，刘秀贵，黄知音，
申请(专利权)人：上海快灵生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：