一种小鼠Rtn4-A/B基因敲除方法技术

本发明专利技术涉及一种小鼠Rtn4-A/B基因敲除方法，包括：（1）将与小鼠Rtn4-a/b基因同源的5’和3’臂、标记有NEO抗性基因的表达框敲入BAC打靶载体；将得到的Rtn4-A/B-KO质粒DNA用Not?I线性化，消化过夜，等体积酚氯仿、氯仿处理，无水乙醇沉淀，用无菌PBS将线性化后的质粒DNA重悬备用；（2）使用线性化后的Rtn4-A/B-KO?DNA对ES细胞进行细胞转染；抽提抗性克隆的基因组DNA，进行跨5’臂或3’臂和插入片段的长链PCR鉴定，即可。本发明专利技术有效敲除Rtn4-A、B1、B2的基因表达，而对其他Rtn4亚型表达无明显影响，为深入研究Rtn4-A/B的生物学功能奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种小鼠Rtn4?A/B基因敲除方法，包括：（1）将与小鼠Rtn4?a/b基因同源的5’和3’臂、标记有NEO抗性基因的表达框敲入BAC打靶载体以替换欲敲除的rtn4?a/b基因区域；将得到的Rtn4?A/B?KO质粒DNA用Not?I线性化，消化过夜，等体积酚氯仿、氯仿处理，无水乙醇沉淀，用无菌PBS将线性化后的质粒DNA重悬备用；（2）使用线性化后的Rtn4?A/B?KO?DNA对ES细胞进行细胞转染，用量为30～50μg；抽提抗性克隆的基因组DNA，进行跨5’臂或3’臂和插入片段的长链PCR鉴定，即可。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李强，胥武剑，朱莹，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：