本发明专利技术公开了一种检测黄热病毒的侧向流免疫层析测定产品及其制备方法。本发明专利技术提供的检测黄热病毒的侧向流免疫层析测定产品，包括相互连接的样品垫、吸水垫和具有相互分离的检测线和质控线的包被膜，所述包被膜位于所述样品垫和所述吸水垫之间，其特征在于：所述样品垫上负载有磁性纳米粒子标记黄热病毒抗体，所述检测线包被有黄热病毒包被抗体，所述质控线包被有与所述磁性纳米粒子标记黄热病毒抗体特异结合的第二抗体；所述磁性纳米粒子标记黄热病毒抗体为将待标记黄热病毒抗体和羧基修饰的磁性纳米粒子以肽键共价结合形成的聚合体。本发明专利技术的实验证明，用本发明专利技术提供的产品检测黄热病毒，灵敏度高、特异性强、快速、简便，可实现客观化测定。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及。
技术介绍
侧向流免疫层析测定(LFIA, Lateralflow immunoassay)是20世纪末期出现的新型免疫检测方法，具有简便快速的特点，在多种病毒检测如HIV、乙肝病毒以及激素检测方面有广泛应用。其通过结合免疫标记技术和膜层析技术，在极短时间内，无需特殊条件，即可做出结果判断，已经成为一种重要的便捷免疫检测方法。黄热病(Yellow fever, YF)是黄热病毒(Yellow fever virus, YFV)引起的急性虫媒传染病,主要流行于非洲和南美洲，是旧版国际卫生条例规定监控的三种检疫传染病之一，新版国际卫生条例即《IHR (2005)))则将其纳入构成国际关注的突发公共卫生事件的疾病清单。该病经蚊媒传播，人类对黄热病毒普遍敏感，且不分年龄、性别和种族。该病一般为散发，但如果媒介蚊虫大量繁殖，可在人群中引起爆发流行，危害极大。其临床表现轻重不一，主要包括发热、剧烈头痛、黄疸、出血及蛋白尿等，重症患者病死率闻达50%以上。尽管目前我国尚无黄热病流行及病例报告，但必须认识到伴随着全球经济一体化进程加快和我国对外交流日益频繁，切不能忽视黄热病毒及其传播媒介传入国内的危险性。我国南方地区如福建、广东、广西、海南广泛存在可传播黄热病毒的埃及伊蚊，且黄热病常与登革热和疟疾等蚊媒病共存，临床上有时难以区别，因此必须加强疾病监测。早期快速准确检测黄热病毒不仅对于及时控制患者病情提高治愈率有关键作用，同时对于口岸卫生检疫机构及时甄别和隔离病人、严防疫情传入国内至关重要。目前国内外黄热病检测方法种类繁多。按检测靶标来主要可分为:核酸分子检测、病毒分离鉴定、抗体检测以及抗原检测等四大类。但大部分由于需要较高的技术和条件以及检测速度相对较慢，限制了在口岸检疫中的现场使用。为满足口岸卫生检疫需要，研制灵敏可靠、结果便于保存及量化分 析、操作简便快速的检测产品对于疫情监控和防范具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供。本专利技术所提供的检测黄热病毒的侧向流免疫层析测定产品，包括相互连接的样品垫、吸水垫和具有相互分离的检测线和质控线的包被膜，所述包被膜位于所述样品垫和所述吸水垫之间，其特征在于:所述样品垫上负载有磁性纳米粒子标记黄热病毒抗体，所述检测线包被有黄热病毒包被抗体，所述质控线包被有与所述磁性纳米粒子标记黄热病毒抗体特异结合的第二抗体；所述磁性纳米粒子标记黄热病毒抗体为将待标记黄热病毒抗体和羧基修饰的磁性纳米粒子以肽键共价结合形成的聚合体。上述侧向流免疫层析测定产品中，所述检测线与所述样品垫的距离大于所述质控线与所述样品垫的距离。所述黄热病毒包被抗体可为黄热病毒单克隆抗体或黄热病毒多克隆抗体；所述待标记黄热病毒抗体可为黄热病毒单克隆抗体或黄热病毒多克隆抗体。上述侧向流免疫层析测定产品中，所述待标记黄热病毒抗体的亲和常数为IO8M'IO6 IO8IT1或IO7 IO8IT1 ;所述黄热病毒包被抗体的亲和常数为IO8M'IO6 IO8IT1或IO7 IO8M4 ;所述羧基修饰的磁性纳米粒子的平均直径为100nm、80-200nm或60-300nm ;所述羧基修饰的磁性纳米粒子的直径变异系数(CV)可为15%、10%-20%或10%-30% ;所述羧基修饰的磁性纳米粒子的饱和磁化强度可为40emu/g。其中，所述待标记黄热病毒抗体的亲和常数具体可为IO8M'所述黄热病毒包被抗体的亲和常数具体可为IO6 IO8M'所述羧基修饰的磁性纳米粒子的平均直径可为lOOnm，所述羧基修饰的磁性纳米粒子的直径变异系数(CV)可为15%，所述羧基修饰的磁性纳米粒子的饱和磁化强度可为40emu/g。所述羧基修饰的磁性纳米粒子具体可为羧基修饰的磁性Fe3O4纳米粒子。在本专利技术的一个实施例中，所述待标记黄热病毒抗体是购自abeam公司的编号为ab22839抗黄热病毒的鼠单克隆抗体。该待标记黄热病毒抗体的亲和常数为IO8M'所述黄热病毒包被抗体是购自abeam公司的编号为ab36055抗黄热病毒的鼠单克隆抗体。所述黄热病毒包被抗体的亲和常数为IO8M'所述磁性纳米粒子是购自深圳市泰勒斯科技有限公司，产品目录号为MP-2的聚马来酸十六醇酯(PMAH)修饰的磁性Fe3O4水溶性纳米晶，所述磁性纳米粒子为羧基修饰的磁性纳米粒子，所述羧基修饰的磁性纳米粒子平均直径为lOOnm，直径变异系数(CV)为15%，所述羧基修饰的磁性纳米粒子的饱和磁化强度为40emu/g。与所述磁性纳米粒子标记黄热病毒抗体特异结合的第二抗体为羊抗鼠IgG抗体。本申请中，所述待标记黄热病毒抗体和所述黄热病毒包被抗体亲和常数均是指对黄热病毒的亲和常数。·上述侧向流免疫层析测定产品中，所述磁性纳米粒子标记黄热病毒抗体按照包括如下步骤的方法制备:将所述羧基修饰的磁性纳米粒子活化后与所述待标记黄热病毒抗体以50:3的质量比进行反应得到以肽键共价结合形成的磁性纳米粒子与黄热病毒抗体的偶联物。所述磁性纳米粒子标记黄热病毒抗体的制备方法中，所述羧基修饰的磁性纳米粒子用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺和N-羟基丁二酰亚胺进行活化；所述活化中，所述羧基修饰的磁性纳米粒子活化所用1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳二亚胺和N-羟基丁二酰亚胺的浓度分别为5mM和IOmM ;所述活化的温度为37°C，时间为0.5h。在本专利技术的一个实施例中，按照如下方法对羧基修饰的磁性纳米粒子进行活化:将2.5mg的上述羧基修饰的磁性纳米粒子与5mmoll-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)和IOmmol NHS (N-羟基丁二酰亚胺)在MES缓冲液(0.lM、pH4.7)中在37°C反应0.5h，得到活化后羧基修饰的磁性纳米粒子。所述磁性纳米粒子标记黄热病毒抗体的制备方法中，所述将羧基修饰的磁性纳米粒子活化后与所述待标记黄热病毒抗体以50:3的质量比进行反应是在37°C在浓度为50mMpH为8.5的硼砂缓冲液中反应3.5小时。所述50mM pH为8.5的硼砂缓冲液可按照如下方法配制:将1.9g Na2B4O7.1OH2O溶于IOOml水中，调pH至8.5得到50mM pH为8.5的硼砂缓冲液。所述磁性纳米粒子标记黄热病毒抗体的制备方法中还包括将所述磁性纳米粒子与黄热病毒抗体的偶联物用BSA溶液封闭后得到所述磁性纳米粒子标记黄热病毒抗体的步骤，所述BSA溶液的浓度为5% (质量百分浓度)，所述封闭的温度为37°C，时间为0.5h。所述磁性纳米粒子标记黄热病毒抗体的制备方法中，还包括将用BSA溶液封闭后得到的所述磁性纳米粒子标记黄热病毒抗体用0.02M pH为7.4的PBS缓冲液进行洗涤和悬浮的步骤。所述检测黄热病毒的侧向流免疫层析测定产品还可包括背板和/或保护膜，可以试纸、卡等形式存在。上述侧向流免疫层析测定产品可按照下述方法制备。本专利技术所提供的制备上述检测黄热病毒的侧向流免疫层析测定产品的方法，包括:1、分别制备上述检测黄热病毒的侧向流免疫层析测定产品中所述样品垫和所述包被膜；I1、将步骤I得到的所述样品垫、所述包被膜和吸水垫相互连接，得到所述包被膜位于所述样品垫和所述吸水垫之间的检测黄热病毒的侧向流免疫层析测定试纸。其中，所述包·被膜的制作方本文档来自技高网...
【技术保护点】
检测黄热病毒的侧向流免疫层析测定产品，包括相互连接的样品垫、吸水垫和具有相互分离的检测线和质控线的包被膜，所述包被膜位于所述样品垫和所述吸水垫之间，其特征在于：所述样品垫上负载有磁性纳米粒子标记黄热病毒抗体，所述检测线包被有黄热病毒包被抗体，所述质控线包被有与所述磁性纳米粒子标记黄热病毒抗体特异结合的第二抗体；所述磁性纳米粒子标记黄热病毒抗体为将待标记黄热病毒抗体和羧基修饰的磁性纳米粒子以肽键共价结合形成的聚合体。
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：史蕾，马岚，顾大勇，吴峰，向军俭，徐云庆，赵纯中，冬冰，何建安，徐华，刘春晓，
申请(专利权)人：深圳国际旅行卫生保健中心，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。