白凤菜组织培养繁殖方法技术

本发明专利技术提供了一种白凤菜组织培养繁殖方法，以白凤菜茎段为外植体，经灭菌、接种诱导形成愈伤组织后，再经愈伤组织增殖、芽诱导和根诱导，形成完整植株小苗，将完整小苗移栽到育苗基质中，长成正常白凤菜植株，所用基本培养基均为以MS培养基为基础，辅以L-脯氨酸、6-苄基腺嘌呤、2，4-二氯苯氧乙酸、萘乙酸、蔗糖和活性炭等成分；本发明专利技术应用组织培养克服白凤菜育苗周期长、繁殖系数低的问题，可进行工厂化快速育苗，以适应市场对白凤菜的需求。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物的培养和繁殖，特别是一种。
技术介绍
白凤菜(Gynura formosana Kitam.)是菊科(Compositae)多年生药食两用植物,特产台湾。〃白凤菜〃别名白担当，俗名肝炎草。白凤菜白凤菜营养丰富，每100公克含有蛋白质2公克、维生素A 573.3RE、维生素C 24.5毫克，以及丰富微量元素，钾380毫克、钙82毫克、磷42毫克、锌0.4毫克。因其含锌量高，又有“聪明菜”之称，是新兴的蔬菜品种，嫩茎叶为食用部位，为保健药膳珍稀蔬菜，有“最佳保健药膳蔬菜”之称。近年来，成为中国各大城市蔬菜、保健、医疗市场上的新秀，受到消费者欢迎。白凤菜全草或茎叶可入药，清热排毒舒筋。主入肝、肺、肾、大小肠诸经，有消炎、解热、解毒、利尿、降血压等功效，主治肝炎、肝硬化、肺炎、肺癌、高血压、感冒、发烧、肾脏炎、水肿、便秘、肠炎、儿童日本脑炎，外敷刀伤、创伤、跌打损伤、毒虫咬伤和无名肿毒。许多城市，相继引入试种，栽培面积逐渐扩大。近年来随着国内外对白凤菜需求量的增加，供需矛盾日益突出，白凤菜苗木及新品种培育势在必行。植物组织培养技术是根据植物细胞具有全能性的理论(个体的某个器官或组织已经分化的细胞再生成完整个体的遗传潜力)，取植物个体上的器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工配制的培养基上，进行培养以获得成千上万个的完整植株。利用组培进行离体快繁具有重要意义:(1)占用空间小，不受地区、季节、气候限制，一年四季均可繁殖；(2)偏于保持优良种性、培养脱毒种苗；(3)在保存和繁育优良突变体或优良杂种一代方面具有非常重要的意义；(4)解决有些植物产种子少或无的难题。一株具有明显优势的白凤菜突变体或一个具有明显优势的后代经组织培养后可大面积推广。 目前白凤菜以扦插繁殖为主，组织培养尚未见报道。由于白凤菜含有的化学物质较多，对外植体的选择和灭菌方法都非常关键。本专利技术首次采用组织培养方法，开展白凤菜种质离体繁殖工作，这为缓解白凤菜苗木供应紧张，开展白凤菜遗传改良、促进白凤菜工厂化育苗提供了一条新途径。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种通过组织培养进行白凤菜种质保存和快速繁苗的方法。本专利技术的技术方案是: 一种，其特征在于:以白凤菜的茎段为外植体，经灭菌处理、接种诱导形成丛生芽，再经生根培养，长成完整的植株小苗，将完整的小苗移栽到育苗基质中，长成正常的白凤菜植株。所述的，包括下列步骤: A、外植体的选择和灭菌处理:以白凤菜的茎段为外植体，以洗洁精浸泡，摇床100-150转摇15-20分钟，再用清水冲洗15-30分钟，再将冲洗后的外植体置于浓度为0.1%的升汞中，浸泡灭菌9-14分钟，无菌去离子水冲洗6-8次，备用；B、外植体接种:将经过步骤A中准备的外植体切去两端，切成0.5-0.8厘米长的小块，接种在愈伤组织诱导培养基上，培养时间为28-35天，在茎切口处膨大形成愈伤组织； C、愈伤组织增殖:将步骤B中得到的愈伤组织接种到愈伤组织增殖培养基上，愈伤组织增殖25-30天，长出黄色、致密的愈伤组织； D、愈伤组织的芽的诱导:将步骤C中得到的愈伤组织接种到芽诱导培养基上，培养30-35天，出现白凤菜丛生芽； E、生根培养:将步骤D中得到的白凤菜丛生芽分株，转入生根培养基中，培养20-25天，小苗基部出现白色短根并长出完整根系； F、炼苗:将步骤E中的完整小苗打开培养瓶瓶口，人工气候室内炼苗3-5天； G、植株移栽:移栽前，对含蛭石、泥炭的育苗基质灭菌，将步骤F中得到的经过炼苗的小苗直接移栽到育苗基质，上覆保鲜膜以保持局部空气湿度，长成正常白凤菜植株。所述的外植体灭菌处理采用0.1-0.2升汞浸泡灭菌9-14分钟方法，无需用75%酒精浸泡。所述的致密的愈伤组织是指非颗粒状散在的愈伤组织。所述的白凤菜基源植物为菊科多年生草本植物白凤菜Gynura formosana Kitam。所述的愈伤组织诱导培养基为MS、L-脯氨酸、2，4-D 5.0-1.0mg/L、NAA 0.2mg/L,其中:MS为常规基本培养基Murashige and Skoog 1962，2，4-D为2，4_ 二氯苯氧乙酸，NAA为萘乙酸。所述的愈伤组织增殖培养基为:MS、L-脯氨酸0.5^2.5mg/L、2，4-D 0.5^1.0mg/L,其中:MS为常规基本培养基M urashige and Skoog 1962, 2,4-D为2,4_ 二氯苯氧乙酸。所述的芽诱导培养基为:MS、6-BA1.5^4.5mg/L、NAA0.2^0.5mg/L，其中:MS为常规基本培养基Murashige and Skoog 1962，6-BA为6-苄基腺嘌呤，NAA为萘乙酸。所述的生根培养基为:1/2MS和NAA0.0lmg/L,其中:MS为常规基本培养基Murashige and Skoog 1962，该常规基本培养基中的大量元素浓度减半得到1/2MS，NAA为萘乙酸。所述的愈伤组织诱导培养基、愈伤组织增殖培养基和芽诱导培养基均加入占相应培养基总质量0.7 1.0%的琼脂、3%蔗糖和0.Γ0.5%活性炭。所述的育苗基质的理化性质为总孔隙度为75%，有机质含量为20%。所述的完整小苗是指完成了芽和根的分化，并已长出小叶片，可以独立进行自养生长的幼小植株。所述的育苗基质的理化性质为总孔隙度为75%，有机质含量为20%。本专利技术的有点在于:本专利技术利用组织培养进行离体快速繁殖在以下四个方面具有重要意义:1)占用空间小，不受地区、季节、气候限制，一年四季均可繁殖；(2)偏于保持优良种性、培养脱毒种苗；(3)在保存和繁育优良突变体或优良杂种一代方面具有非常重要的意义；(4)解决有些植物产种子少或无的难题。一株具有明显优势的白凤菜突变体或一个具有明显优势的后代经组织培养后可大面积推广。本专利技术所用培养基诱发时间短、出苗快、繁殖频率高，尤其出苗整齐，易于操作、大规模生产育苗。本专利技术首次采用组织培养方法，开展白凤菜种质离体繁殖工作，这为保护白凤菜种质资源，开展白凤菜遗传改良、促进白凤菜的工厂化育苗提供了一条新途径，提供了一种能进行白凤菜人工繁殖、种质资源离体保存、利用及选育药用成分含量高的突变系的组织培养方法。具体实施例方式下面结合实施例详细说明本专利技术的技术方案，但保护范围不被此限制。实施例中各种原料或设备均可从市场购买。其中，所述的MS为常规基本培养基Murashige and Skoog 1962的简称(按常规为:硝酸铵(NH4N03) 1650 mg/L，硝酸钾(KN03) 900 mg/L，硫酸镁(MgS04.7Η20) 370 mg/L,硫酸二氢钾(KH2P04) 170 mg/L,氯化钙(CaC12.2H20 ) 440 mg/L，硫酸锰(MnS04.4H20)22.3 mg/L，硫酸锌(ZnS04.7H20) 8.6 mg/L，硼酸(H3B03) 6.2 mg/L，碘化钾(ΚΙ) 0.83mg/L,钥酸钠(Na2Mo04.2H20) 0.25 mg/L,硫酸铜(CuS04.5H20 ) 0.025mg/L,氯化钴(CoC12.6Η20) 0.025 mg/L，硫酸亚铁(FeS04.7Η20) 27.8 mg/L，Na2_EDTA.2Η2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种白凤菜组织培养繁殖方法，其特征在于：以白凤菜的茎段为外植体，经灭菌处理、接种诱导形成愈伤组织后，再经愈伤组织增殖、诱导芽和生根培养，形成完整的植株小苗，将完整小苗移栽到育苗基质中，长成正常白凤菜植株。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：穆红梅，张秀省，杜秀菊，
申请(专利权)人：聊城大学，
类型：发明
国别省市：