本发明专利技术公开了一种利用组织培养技术繁殖平贝母的方法，主要包括外植体的选择与消毒、材料处理、初代培养、继代培养、小鳞茎的增殖、生根培养和炼苗移栽等步骤。在不同的培养阶段的利用不同的激素进行调节，对培养基配方的精确筛选达到试管苗生长旺盛的优良效果，并且结合有效的灭菌技术，达到提高增殖率和减少变异的目的。并且在继代培养后的小鳞茎的增殖过程中适当更换了培养基，更有利于小鳞茎的快速生长。并且通过鳞片不同部位的比较发现，鳞片繁殖材料最佳选择为内层鳞片的下部。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种组织培养方法，具体涉及到一种平贝母的繁殖方法。
技术介绍
平贝母，别名平贝、北贝、贝母，为百合科多年生草本，高达lm。平贝母的干燥鳞茎是我国常用的中药材，具有清热润肺、化痰止咳、散结等功能，在临床上用于痰热咳嗽、咳痰带血、瘰疬疮疡肿毒等疾病的治疗。近年来，由于过度采挖，资源逐年减少，商品供不应求，价格不断上涨。目前对贝母的组织培养研究已经有了一定的规模，但是鉴于技术的问题一直存在着一些问题，对平贝母的快速繁殖技术也已经有一定的研究，但是对平贝母的需求日益增力口，目前平贝母的繁殖和种植远远达不到人们的需求，组织培养可以大大提高平贝母的繁殖率，但是目前组织培养体系尚未充分建立，存在一些技术上的问题，优良品种的推广普及尚未完成，供求矛盾日益加剧，严重影响了平贝母的大量繁殖。
技术实现思路
本专利技术针对目前存在的问题，提供一种能够快速、有效的利用现有资源繁殖平贝母的方法。为了解决上述 技术问题，本专利技术采用的一个技术方案是: ，其特征在于，包括以下步骤: (I)外植体的选择与消毒:首先选择当年生长健壮、无霉烂斑点的新鲜平贝母，剪去根及有伤鳞片，流水冲洗30 min后放入清水中浸泡15min，再用50 %多菌灵500倍液浸泡2(T30 min或者用50%福美双粉500倍液浸泡l(Tl5min，然后将种球鳞片剥下，用紫外灯照射10 min,转入超净工作台，再用75%酒精消毒50 S，无菌水冲洗2 3次，再用6%次氯酸钠溶液消毒10 min，无菌水冲洗2 3次。最后用0.2%的升汞溶液消毒10 min，无菌水冲洗4 5次。(2)材料处理:首先在超净工作台上，在无菌条件下，切去鳞片上部1/3，然后将中、下部分割开来，将鳞片和鳞茎基部分别切成6-8mm的小块； (3)初代培养:在无菌的条件下将步骤(2)得到的外植体接种在初代培养基上，该培养基是在在3/4MS常规培养基中添加了 0.8mg/L的6_BA、1.2mg/L的NAA，30_40mg/L的蔗糖和0.4-0.8mg/L的ZT ；PH % 6.0,培养温度为24°C，光照时间12 h/d，光照强度2 000 Lx,琼脂5 g/L，经过25-30天形成愈伤组织； (4)继代培养:将初代培养的愈伤组织切下接种在继代培养基上，该培养基是在MS常规培养基中添加了 0.5mg/L的6-BA、0.3mg/L的ΙΒΑ、0.3mg/L的KT和20mg/L的蔗糖，PH6.0，培养温度为24°C，光照周期13h/d，光强度为22001ux，经过7_12天时间分化出绿点后，即开始下一阶段； (5)小鳞茎的增殖:将分化出绿点的愈伤组织继续培养，该培养基是在1/2MS常规培养基中添加了 40mg/L 的蔗糖、0.3mg/L 的 KT、0.4mg/LNAA 和 0.2mg/L 的 ZT，PH 6.0,培养温度为24°C，光照周期13h/d，光强度为22001ux，经10-15天培养便可分化出丛生小鳞茎； (6)生根培养:将分化出来的小鳞茎接种于下列诱导培养基中进行生根诱导:1/2MS培养基、0.3mg/L的KT、lmg/L的活性炭、7_8g/L的琼脂、0.5mg/L的NAA，培养温度为24°C，光照周期13h/d，光强度为22001UX，经过8-12天待小鳞茎长至2.5cm高，根系比较发达时，即开始下一个阶段； (7)炼苗移栽:先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗6d，然后将长出新根的小鳞茎从培养瓶中取出，在阳光下晒1-2天，在晒的过程中要适当遮光，使光照强度为自然光的50%，温度在15°C左右，当培养基表面成龟裂状后，取出小苗洗净根部附着的培养基，移栽到经消毒的腐殖土:草炭:珍珠岩:蛭石=2: 2: I:3 (重量比)的混合基质中，温度控制在25°C左右。本专利技术的有益效果主要体现在: (1)建立了完善的平贝母的离体组织培养快速繁殖的成套技术，达到了高效诱导外植体分化增殖目的，并且保存了母体的全部优良性状，遗传性状稳定；(2)缩短了繁殖周期，在保证了成活率的基础上，提高了繁殖效率，增加了经济效益；(3)在不同的培养阶段的利用不同的激素进行调节，对培养基配方的精确筛选达到试管苗生长旺盛的优良效果，并且结合有效的灭菌技术，达到提高增殖率和减少变异的目的。(4)在继代培养后的小鳞茎的增殖过程中适当更换了培养基，更有利于小鳞茎的快速生长。(5)在移栽炼苗的过程中，采取必要的措施控制了生长的温度和光照强度，使平贝母在适宜的温度下进行繁殖，提高了幼苗的质量和成活率。具体实施方式下面对本专利技术的较佳实施例进行详细阐述，以使本专利技术的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本专利技术的保护范围做出更为清楚明确的界定。实施例1 ，其特征在于，包括以下步骤: (I)外植体的选择与消毒:首先选择当年生长健壮、无霉烂`斑点的新鲜平贝母，剪去根及有伤鳞片，流水冲洗30 min后放入清水中浸泡15min，再用50 %多菌灵500倍液浸泡20min或者用50%福美双粉500倍液浸泡lOmin，然后将种球鳞片剥下，用紫外灯照射10min,转入超净工作台，再用75%酒精消毒50 S，无菌水冲洗2次，再用6%次氯酸钠溶液消毒10 min,无菌水冲洗3次。最后用0.2%的升萊溶液消毒10 min,无菌水冲洗4次。(2)材料处理:首先在超净工作台上，在无菌条件下，选择外层鳞片的中部，切成6-8mm的小块；(3)初代培养:在无菌的条件下将步骤(2)得到的外植体接种在初代培养基上，该培养基是在在3/4MS常规培养基中添加了 0.8mg/L的6_BA、1.2mg/L的NAA，30mg/L的蔗糖和0.4mg/L的ZT ；PH为6.0，培养温度为24°C，光照时间12 h/d,光照强度2 OOO Lx,琼脂5g/L,经过30天形成愈伤组织； (4)继代培养:将初代培养的愈伤组织切下接种在继代培养基上，该培养基是在MS常规培养基中添加了 0.5mg/L的6-BA、0.3mg/L的ΙΒΑ、0.3mg/L的KT和20mg/L的蔗糖，PH6.0，培养温度为24°C，光照周期13h/d，光强度为22001ux，经过12天时间分化出绿点后，即开始下一阶段； (5)小鳞茎的增殖:将分化出绿点的愈伤组织继续培养，该培养基是在1/2MS常规培养基中添加了 40mg/L 的蔗糖、0.3mg/L 的 KT、0.4mg/LNAA 和 0.2mg/L 的 ZT，PH 6.0,培养温度为24°C，光照周期13h/d，光强度为22001UX，经15天培养便可分化出丛生小鳞茎； (6)生根培养:将分化出来的小鳞茎接种于下列诱导培养基中进行生根诱导:1/2MS培养基、0.3mg/L的KT、lmg/L的活性炭、7g/L的琼脂、0.5mg/L的NAA，培养温度为24°C，光照周期13h/d，光强度为22001UX，经过12天待小鳞茎长至2.5cm高，根系比较发达时，即开始下一个阶段； (7)炼 苗移栽:先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗6d，然后将长出新根的小鳞茎从培养瓶中取出，在阳光下晒2天，在晒的过程中要适当遮光，使光照强度为自然光的50%，温度在15°C左右，当培养基表面成龟裂状后，取出小苗洗净根部附着的培养基，移栽到经消毒的腐本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种利用组织培养技术繁殖平贝母的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）外植体的选择与消毒：首先选择当年生长健壮、无霉烂斑点的新鲜平贝母，剪去根及有伤鳞片，流水冲洗30?min后放入清水中浸泡15min，再用50％多菌灵500倍液浸泡20~30?min或者用50％福美双粉500倍液浸泡10~15min，然后将种球鳞片剥下，用紫外灯照射10?min，转入超净工作台，再用75%酒精消毒50?s，无菌水冲洗2~3次，再用6%次氯酸钠溶液消毒10?min，无菌水冲洗2~3次，最后用0.2%的升汞溶液消毒10?min，无菌水冲洗4~5?次；（2）材料处理：首先在超净工作台上，在无菌条件下，?切去鳞片上部1/3，然后将中、下部分割开来，将鳞片和鳞茎基部分别切成6?8mm的小块；（3）初代培养：在无菌的条件下将步骤（2）得到的外植体接种在初代培养基上，该培养基是在在3/4MS常规培养基中添加了0.8mg/L的6?BA、1.2mg/L的NAA，30?40mg/L的蔗糖和0.4?0.8mg/L的ZT；培养温度为24℃，光照时间12?h/d，光照强度2?000?Lx，PH为?6.5，琼脂5?g/L，经过25?30天形成愈伤组织；（4）继代培养：将初代培养的愈伤组织切下接种在继代培养基上，该培养基是在MS常规培养基中添加了0.5mg/L的6?BA、0.3mg/L的IBA、0.3mg/L的KT和20mg/L的蔗糖，培养温度为24℃，光照周期13h/d，光强度为2200lux，PH?6.5，经过7?12天时间分化出绿点后，即开始下一阶段；（5）小鳞茎的增殖：将分化出绿点的愈伤组织继续培养，该培养基是在1/2MS常规培养基中添加了40mg/L的蔗糖、0.3mg/L的KT、0.4mg/LNAA和0.2mg/L的ZT，培养温度为24℃，光照周期13h/d，光强度为2200lux，PH?6.5，经10?15天培养便可分化出丛生小鳞茎；（6）生根培养：将分化出来的小鳞茎接种于下列诱导培养基中进行生根诱导：1/2?MS培养基、0.3mg/L的KT、1mg/L的活性炭、7?8g/L的琼脂、0.5mg/L?的NAA，培养温度为24℃，光照周期13h/d，光强度为2200lux，经过8?12天待小鳞茎长至2.5cm高，根系比较发达时，即开始下一个阶段；（7）炼苗移栽：先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗6d，然后将长出新根的小鳞茎从培养瓶中取出，在阳光下晒1?2天，在晒的过程中要适当遮光，使光照强度为自然光的60%，温度在18℃左右，当培养基表面成龟裂状后，取出小苗洗净根部附着的培养基，移栽到经消毒的腐殖土∶草炭∶珍珠岩：蛭石=2∶2∶1：3?（重量比）的混合基质中，温度控制在15℃左右。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈勇明，
申请(专利权)人：常熟市佳盛农业科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：
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