茉莉花愈伤组织诱导及继代保持的方法技术

本发明专利技术提供了一种茉莉花愈伤组织诱导及继代保持的方法，包括茉莉花外植体处理的步骤、诱导培养的步骤、继代增殖培养与保持的步骤。本发明专利技术不仅能够快速获得大量茉莉花愈伤组织，且所获得的茉莉花愈伤组织具有高诱导效率及高质量的优点，同时可长期继代保持茉莉花愈伤组织，即具有旺盛的生长能力，从而为茉莉花生物技术和细胞培养生产次生代谢产物等研究奠定了良好的基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物组织培养
，尤其涉及一种。
技术介绍
茉莉花为木犀科素馨属(或茉莉属)亚热带常绿灌木。茉莉花树冠直立或半开展状，花冠白色，极芳香，花期较长；《本草纲目》中记载其花、叶、根均可入药，根能理气、活血、安神镇痛，花能开郁、辟秽，叶能消肿解毒，近代研究也表明，茉莉花根提取物具有抗心律失常、镇静催眠、抑制中枢神经系统、降低耗氧率等作用。其在盆栽观赏、园林绿化、花茶窖制、香料生产等方面得到了广泛应用。因此，在我国茉莉花已渗透到人们的社会生活中，是我国既具观赏价值又具经济价值的重要园林花卉，也是中国的文化符号之一。然而，随着近年来茉莉花茶市场下滑，加上花色单一，致使茉莉花栽培面积大大缩水，为了茉莉花产业的可持续发展，必须大力发展茉莉花新品种选育，但传统的育种方法对于茉莉花有很大局限性。另一方面，对于茉莉花的研究还主要集中在栽培加工技术和理化性质分析等前期研究方面，有关茉莉花生物技术研究还鲜见报道，虽然近年来茉莉花的组织培养有所报道，但相关的文献和研究还较少。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种。本专利技术是通过以下技术方案解决上述技术问题的:一种，包括以下步骤: (I)外植体处理:从生长健壮的母株上剪取当年生枝条或花器官，去除叶片后洗净、消毒，在无菌条件下切取长0.5cm的茎段或花器官组织作为接种的外植体；(2)诱导培养:将外植体接种于诱导培养基中，并于温度23 25°C，光照强度1500 20001χ，每天光照12h的培养条件下培养30天，得初代愈伤组织；(3)继代保持:将初代愈伤组织转接于继代培养基中，并于温度23 25°C，光照强度1500 20001χ，每天光照12h的条件下进行继代增殖培养，直至获得生长一致且生长旺盛的愈伤组织，同时用所述继代培养基长期保持愈伤组织。进一步地,所述诱导培养基包括下述成分:MS培养基、6-节氨基腺嘌呤2.0mg/L、α -萘乙酸0.2mg/L、蔗糖30g/L和琼脂粉6g/L ;其中，各成分的浓度均以诱导培养基总溶液的体积为基准。进一步地，所述继代培养基包括下述成分:MS培养基、6-苄氨基腺嘌呤2.0mg/L、α -萘乙酸0.2mg/L、蔗糖30g/L和琼脂粉6g/L ;其中，各成分的浓度均以诱导培养基总溶液的体积为基准。本专利技术的有益效果在于:不仅能够快速获得大量茉莉花愈伤组织，且所获得的茉莉花愈伤组织具有高诱导效率及高质量的优点，同时可长期继代保持茉莉花愈伤组织，即具有旺盛的生长能力，从而为茉莉花生物技术和细胞培养生产次生代谢产物等研究奠定了良好的基础。具体实施例方式一种，A.实验材料的选取与预处理从生长健壮的茉莉花母株上剪取当年生枝条或花器官，去除叶片后放入加有洗涤剂的水中浸洗3 5min，再用自来水冲洗I 2h ;然后移入超净工作台，将枝条置于适量的75%乙醇(v/v)中浸泡30s,再用0.1 % HgCl2 (w/v)消毒6 8min (花器官为6min),接着用无菌水冲洗3 4次。在无菌条件下切取长0.5cm左右的茎段或花器官组织作为接种的外植体。B.启动培养:取所获得的茉莉花外植体，接种至诱导培养基中，并置于培养室中培养，7天后可见愈伤组织形成，30天左右长成初代愈伤组织；其中，培养条件为温度23 25°C，光照强度1500 20001x，每天光照12h ；所述诱导培养基包括下述成分:MS培养基、6-节氨基腺嘌呤2.0mg/L、α -萘乙酸0.2mg/L、蔗糖30g/L和琼脂粉6g/L ;其中，各成分的浓度均以诱导培养基总溶液的体积为基准。所述MS培养基具体包括以下各成分:硝酸铵(NH4NO3) 1650mg/L、硝酸钾(KNO3)1900mg/L、氯化钙(CaCl2.2H20) 440mg/L、硫酸镁(MgSO4.7H20) 370mg/L、磷酸二氢钾(KH2PO4) 170mg/L、硫酸锰(MnSO4.H2O) 22.3mg/L、硫酸锌(ZnSO4.7H20) 8.6mg/L、氯化钴(CoCl2.6H20) 0.025mg/L、硫酸铜(CuSO4.5H20) 0.02mg/L、硼酸(H3BO3) 6.2、钥酸钠(Na2MoO4.2Η20) 0.25mg/L、碘化钾(ΚΙ) 0.83mg/L、硫酸亚铁(FeSO4.7H20) 28.7mg/L、乙二胺四乙酸二钠(Na2-EDTA)37.3mg/L、烟酸 0.5mg/L、维生素 B60.5mg/L、维生素 B10.lmg/L、肌醇 100mg/L、甘氨酸 2mg/L。C.继代增殖与保持:将初代愈伤组织转接于继代培养基中，并置于培养室中进行培养，以获得生长一致且生长旺盛的愈伤组织；同时用所述继代培养基长期继代保持愈伤组织；其中，培养条件为温度23 25°C，光照强度1500 20001x，每天光照12h。所述继代培养基包括下述成分:MS培养基、6-苄氨基腺嘌呤2.0mg/L、α -萘乙酸0.2mg/L、蔗糖30g/L和琼脂粉6g/L ;其中，各成分的浓度均以诱导培养基总溶液的体积为基准。一、茉莉花愈伤组织诱导过程的影响因素1、不同类型外植体对愈伤组织诱导的影响将茉莉花茎段或花器官组织接种于下文所述J2培养基中后，置于光照下培养。接种7d后，茎段或花瓣切口处均可观察到愈伤组织形成，以后愈伤组织块会不断膨大，30d左右后长成初代愈伤组织。从产生愈伤组织的能力上看，茎段或花瓣的差别不大，但从愈伤组织的长势上，初代培养时，茎段产生的愈伤组织长势较强；而花瓣产生的愈伤组织，长势比较弱，且要及时继代，否则会褐变死亡。 2、培养条件对愈伤组织诱导的 影响将茉莉花茎段接种于6种培养基中诱导愈伤组织，实验结果发现共形成6种类型的愈伤组织:JC1、JC2、JC3、JC4、JC5、JC6。JCl是淡绿色或鲜绿色的粒状松散状愈伤组织；JC2是深绿色粒状硬质愈伤组织，从后期的继代保持中，发现该类型愈伤组织JC2生活力最强，增殖速度快；JC3是鲜绿色或深绿色粒状松散状愈伤组织；JC4是深绿色块状硬质愈伤组织；JC5是浅黄绿色粒状松软状愈伤组织，有玻璃化的趋势，这种愈伤组织继代后会褐变死亡JC6是JCl的一种衍生型愈伤组织，颜色较淡。在比较光照和黑暗对茉莉花愈伤组织诱导的影响时发现，在光照条件下愈伤组织主要为上述六种，而在黑暗中诱导培养产生的愈伤组织，均为浅黄色或白色松散粒状，定为JC7型愈伤组织。由此可见，在光照的条件下，茉莉花愈伤组织类型较多，而在黑暗中仅产生JC7型愈伤组织。在光照条件下，JC1、JC2、JC3、JC4、JC6类型的愈伤组织可以继代增殖，为有效愈伤组织；而JC5类型愈伤组织不能继代保持，为无效愈伤组织。黑暗下，JC7愈伤组织也可以继代增殖。3、不同培养基对愈伤组织诱导的影响将茉莉花茎段接种于表I所列的6种培养基中，观察其在光照条件下愈伤组织诱导的情况，实验结果见表2。从表2可以看出，6种培养基接种的茎段都能成功诱导出愈伤组织，其中J1、J2、J3和J5诱导率均为100%,J4和J6分别为77.78%和15.56%，经邓肯氏新复极差测验表明，在愈伤组织诱导率上，前四种培养基(即Jl、J2、J3、J5)与后两种培养基(即J4、J6)存在极显著差异(P < 0.01)。另外，6种培养本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种茉莉花愈伤组织诱导及继代保持的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）外植体处理：从生长健壮的母株上剪取当年生枝条或花器官，去除叶片后洗净、消毒，在无菌条件下切取长0.5cm的茎段或花器官组织作为接种的外植体；（2）诱导培养：将外植体接种于诱导培养基中，并于温度23～25℃，光照强度1500～2000lx，每天光照12h的培养条件下培养30天，得初代愈伤组织；（3）继代保持：将初代愈伤组织转接于继代培养基中，并于温度23～25℃，光照强度1500～2000lx，每天光照12h的条件下进行继代增殖培养，直至获得生长一致且生长旺盛的愈伤组织，同时用所述继代培养基长期保持愈伤组织。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赖呈纯，刘波，朱育菁，甘煌灿，陈文辉，
申请(专利权)人：福建省农业科学院农业工程技术研究所，
类型：发明
国别省市：