基于Taqman探针的水产品中麦氏弧菌的荧光定量PCR快速检测方法技术

本发明专利技术公开了一种基于Taqman探针的麦氏弧菌（Vibriometschnikovii）的荧光定量PCR快速检测方法，采用麦氏弧菌特异性引物和TaqMan探针，即可对水产品中麦氏弧菌进行检测与监控?。其中上游引物Vmetschnikovii-1：5'-GCTATTCGAAAGTTTATTCTTC-3'，下游引物Vmetschnikovii-2：5'-CCAAGATGGTCGATATCATC-3'，特异性TaqMan探针为：Vmetschnikovii-3：5'-CGTAGGTCGTATGAAGTTCAATAGT-3'。检测麦氏弧菌的方法包括细菌基因组DNA的提取、麦氏弧菌的荧光定量PCR检测。其优点是快速、特异性强、灵敏度高。另外，本发明专利技术与普通PCR技术相比，不需要凝胶电泳拍照观察，实现了检测流程一体化封闭检测，避免了PCR产物对实验室的污染。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种基于Taqman探针的水产品中麦氏弧菌(Vibrio metschnikovii)的荧光定量PCR快速检测方法。
技术介绍
麦氏弧菌(Kibrio me tschniko rii )是革兰氏阴性菌，短小稍弯曲的弧状菌,无芽孢、无荚膜，有偏端单鞭毛一根，运动方式呈直线穿梭样，嗜盐菌，TCBS (Thiosulfatecitrate bile salts sucrose agar culture medium)平板上生长，菌落呈黄色。麦氏弧菌是一种致病性弧菌，广泛存在于河流、海湾和下水道中。麦氏弧菌被国内外学者公认为11种致病性弧菌之一，能够引起腹泻、创伤性感染和败血症。在饮用水中与腹泻病之间存在着密切的联系。现有麦氏弧菌的检测方法主要有传统常规分离鉴定法、普通PCR检测法、ATB细菌鉴定法等。基于Taqman探针的荧光定量PCR技术通过TaqMan探针与模板的特异性杂交来鉴别模板，具有很高的准确性，假阳性低，特异性好。目前尚未见用TaqMan探针快速检测水产品中麦氏弧菌的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种检测速度快、灵敏度高的快速检测水产品中麦氏弧菌的基于本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于Taqman探针的快速检测水产品中麦氏弧菌的荧光定量PCR方法，其特征在于首先提取TCBS平板上的可疑菌落的基因组DNA并稀释备用；再利用麦氏弧菌保守性强的基因组DNA序列设计特异性引物和探针；最后使用该引物和探针对待测水产品TCBS平板上可疑菌落的基因组DNA进行荧光定量PCR扩增和荧光信号的检测；其中所述的麦氏弧菌特异性引物为：上游引物Vmetschnikovii??1：5“??GCTATTCGAAAGTTTATTCTTC??3“；下游引物Vmetschnikovii??2：5“??CCAAGATGGTCGATATCATC??3“；特异性TaqMan探针为：Vmetschnikov...

【技术特征摘要】
2012.03.13 CN 201210077610.21.一种基于Taqman探针的快速检测水产品中麦氏弧菌的荧光定量PCR方法，其特征在于首先提取TCBS平板上的可疑菌落的基因组DNA并稀释备用；再利用麦氏弧菌保守性强的基因组DNA序列设计特异性引物和探针；最后使用该引物和探针对待测水产品TCBS平板上可疑菌落的基因组DNA进行荧光定量PCR扩增和荧光信号的检测；其中所述的麦氏弧菌特异性引物为: 上游引物 Vmetschnikovi1-1:5，- GCTATTCGAAAGTTTATTCTTC -3’ ； 下游引物 Vmetschnikovi1-2:5，- CCAAGATGGTCGATATCATC -3’ ； 特异性TaqMan探针为:Vmet...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾俊涛，吴振兴，李正义，祝素珍，姜英辉，马云，张健，
申请(专利权)人：山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：