一种鼠源单克隆抗体及其制备方法和用途技术

本发明专利技术提供了一种重组抗NM57单克隆抗体，轻链可变区具有SEQIDNO:1所示的氨基酸序列，重链可变区具有SEQIDNO:2所示的氨基酸序列。本发明专利技术还公开了编码该抗体的DNA分子，表达该抗体的载体以及被该表达载体转化的真核宿主细胞。本发明专利技术提供的抗NM57单克隆抗体能在NM57用药过程中快速检测受试者血清中NM57浓度，同时也能作为抗NM57的阳性对照抗体应用于NM57的免疫原性检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及抗体
具体地说，本专利技术涉及一种新的重组抗人抗狂犬病毒单克隆抗体的单克隆抗体，及其制备方法和用途。
技术介绍
狂犬病是由狂犬病毒所致的自然疫源性或动物源性人畜共患急性传染病，流行性广，病死率几近百分之百，对人民生命健康造成严重威胁。人狂犬病主要通过患病动物咬伤、抓伤或由粘膜感染引起，在特定的条件下还可通过呼吸道气溶胶传染。传染动物主要是犬(超过90%)，其次是猫。根据中国疫情报告系统资料，1998年后狂犬病疫情年增长幅度越来越高，死亡人数不断攀升。对于狂犬病毒暴露后预防，WHO推荐的处理方法是全程注射狂犬疫苗，同时合并注射抗狂犬病马血清(ERIG)或抗狂犬病毒人免疫球蛋白(HRIG)。但HRIG由于来源限制价格昂贵，而马血清制品则较易发生严重的过敏反应，所以现今国际上已经公认有必要用重组单克隆抗体取代狂犬病毒暴露后预防中使用的抗狂犬病毒血源抗体。国外研究者已经进行了广泛的相关研究，并取得了显著的成果。B.Dietzschold利用细胞融合技术制备了多株人抗狂犬病毒单克隆抗体，发现能特异结合狂犬病毒G蛋白的一株抗体Mab57能够高效和广泛地中和狂犬病毒并且对狂犬病毒攻击的实验室啮齿动物可以起保护作用(J Virol.1990 June ;64 (6): 3087-3090)。B.Dietzschold 等将 Mab57 基因转入SPBN重组病毒表达系统，在BSR细胞中制备了 S057抗体(J Immunol Methods.200IJunl ；252(1-2) =199-206, )，S057抗体重链和轻链的氨基酸序列分别见GENEBANKg1:27728677和g1:27728683.华北制药集团新药研究开发有限责任公司把S057的基因序列在CHO细胞表达系统中表达，构建成功高效表达该 基因序列编码抗体的工程细胞，并把得到的单抗命名为匪57，该方法操作工艺简便、产品表达水平高(超过100毫克/升)、生产的抗体质量均一而且稳定性好，具备了产业化价值，可以取代目前所使用的抗狂犬病马血清或人免疫球蛋白(中国专利:重组人抗狂犬病毒单克隆抗体的制备方法，公开号CN101100663A)。在匪57进行临床前研究及临床研究的过程中，以及将来成为药物后患者应用的过程中，为了研究药物代谢及保证用药安全，必须检测受试者(动物或人)或患者的血清匪57浓度和人抗匪57的抗体，但是目前还没有实现该功能的检测试剂或试剂盒出现，因此，迫切需要一种能有效、快速检测匪57浓度和人抗匪57抗体的产品。
技术实现思路
本专利技术需要解决的第一个技术问题是提供一种抗匪57单克隆抗体，用于检测匪57浓度和人抗匪57抗体。本专利技术需要解决的第二个技术问题是提供一种编码上述抗匪57单克隆抗体的DNA分子。本专利技术需要解决的第三个技术问题是提供一种表达载体。本专利技术需要解决的第四个技术问题是提供一种真核宿主细胞。本专利技术需要解决的第五个技术问题是提供一种该重组抗匪57单克隆抗体的制备方法。本专利技术需要解决的第五个技术问题是提供上述单克隆抗体的两种用途。为实现上述专利技术目的，本专利技术一方面提供了一种重组抗匪57单克隆抗体，该抗体含有重链可变区和轻链可变区，其特征在于，轻链可变区具有SEQID NO:1所示的氨基酸序列，重链可变区具有SEQ ID N0:2所示的氨基酸序列。本专利技术另一方面提供了编码上述单克隆抗体的DNA分子。在一个较佳的实例中，该DNA分子含有SEQ ID NO: 3所示的编码所述单抗轻链可变区的核苷酸序列，以及SEQ ID N0:4所示的编码所述单抗重链可变区的核苷酸序列。本专利技术第三方面提供了一种表达载体，该表达载体含有上述DNA分子。本专利技术第四方面提供了一种宿主细胞，其特征在于，它被上述表达载体转化。在一个较佳的实例中，该宿主细胞是CHO细胞。本专利技术第五方面提供了一种制备上述单克隆抗体的方法，其特征在于，该方法包括: a)构建含有权利要求2所述DNA分子的表达载体； b)用步骤a)所述的表达载体转化宿主细胞； c)培养步骤b)所得的宿主细胞； d)分离纯化获得所述单克隆抗体。本专利技术提供的抗体可以在体外检测匪57的浓度和人抗匪57抗体，本专利技术第六方面提供了一种利用本专利技术所述抗体检测NM57浓度的方法。在一个较佳的实例中，检测方法为基于洗脱的ELISA法。该抗体可用于制备检测试剂或者检测试剂盒。本专利技术涉及一种重组抗匪57单克隆抗体，该抗体包含重链可变区和轻链可变区，轻链可变区具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，重链可变区具有SEQ ID N0:2所示的氨基酸序列。本文所用的术语“单克隆抗体(单抗)”指从一类基本均一的群体获得的抗体，即该群体中包含的单个抗体是相同的，除少数可能存在的天然发生的突变外。单克隆抗体高特异性地针对单个抗原位点，而且，与常规多克隆抗体制剂(通常是具有针对不同决定簇的不同抗体)不同，各单克隆抗体是针对抗原上的单个决定簇。除了它们的特异性外，单克隆抗体的好处还在于它们是通过基因工程手段来合成的，不会被其它免疫球蛋白污染。修饰语“单克隆”表示了抗体的特性，是从基本均一的抗体群中获得的，这不应被解释成需要用任何特殊方法来生产抗体。 本文所用的术语“抗体”和“免疫球蛋白”是有相同结构特征的约150，000道尔顿的异四聚糖蛋白，其由两个相同的轻链(L)和两个相同的重链(H)组成。每条轻链通过一个共价二硫键与重链相连，而不同免疫球蛋白同种型的重链间的二硫键数目不同。每条重链和轻链也有规则间隔的链内二硫键。每条重链的一端有可变区(VH)，其后是多个恒定区。每条轻链的一端有可变区(VL)，另一端有恒定区；轻链的恒定区与重链的第一个恒定区相对，轻链的可变区与重链的可变区相对。特殊的氨基酸残基在轻链和重链的可变区之间形成界面。本文所用的术语“可变”表示抗体中可变区的某些部分在序列上有所不同，它形成各种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性。然而，可变性并不均匀地分布在整个抗体可变区中。它集中于轻链和重链可变区中称为互补决定区(CDR)或超变区中的三个片段中。可变区中较保守的部分称为构架区(FR)。天然重链和轻链的可变区中各自包含四个FR区，它们大致上呈β-折叠构型，由形成连接环的三个⑶R相连，在某些情况下可形成部分β折叠结构。每条链中的⑶R通过FR区紧密地靠在一起并与另一链的⑶R —起形成了抗体的抗原结合部位。恒定区不直接参与抗体与抗原的结合，但是它们表现出不同的效应功能，例如参与抗体的依赖于抗体的细胞毒性。单克隆抗体可用本领域技术人员熟知的各种方法来制得。例如，单克隆抗体可用杂交瘤方法制得，或用重组DNA方法制得，也可从噬菌体抗体库中分离获得。本专利技术还提供 了编码本专利技术重组抗匪57单克隆抗体的DNA分子。在一个较佳的实例中，该DNA分子含有SEQ ID NO: 3所示的编码所述单抗轻链可变区的核苷酸序列，以及SEQ ID Ν0:4所示的编码所述单抗重链可变区的核苷酸序列。在获得编码本专利技术重组抗匪57单克隆抗体重链可变区和轻链可变区的核苷酸序列后，通常可通过以下方法来制备本专利技术的单克隆抗体。首先，提供含有编码本专利技术单克隆抗体的核苷酸序列的表达载体。编码本专利技术单克隆抗体的DNA序列可用本领域技术人员熟知的常规手段来本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组抗NM57单克隆抗体，它包含重链可变区和轻链可变区，其特征在于，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1所示，重链可变区的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:2所示。

【技术特征摘要】
1.一种重组抗匪57单克隆抗体，它包含重链可变区和轻链可变区，其特征在于，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO: 2所示。2.—种DNA分子，其特征在于，它编码权利要求1所述的单克隆抗体。3.根据权利要求2所述的DNA分子，其特征在于，该DNA分子含有SEQID NO: 3所示的编码所述单抗轻链可变区的核苷酸序列，以及SEQ ID N0:4所示的编码所述单抗重链可变区的核苷酸序列。4.一种表达载体,其特征在于,它含有权利要求2所述的DNA分子。5.一种真核宿主细胞，其特征在于，它被...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵伟，魏敬双，王惠欣，刘晓志，常亮，程立均，李燕霞，刘艳玲，段迎霞，刘祥义，刘洪喜，于兰，李玉凤，张静，高健，
申请(专利权)人：华北制药集团新药研究开发有限责任公司，
类型：发明
国别省市：