本发明专利技术描述的是通过常规荧光显微镜术、荧光分光术、流式细胞仪和/或高容量成像法探测活性氧(ROS)的化合物、组合物、方法和试剂盒。本发明专利技术公开的化合物是新的还原性染料，包括Cy-基氢菁染料和Cy-基氘菁染料，所述染料是体外和/或体内探测ROS和检测氧化应激的探针。本发明专利技术也描述制备用于公开的组合物、方法和试剂盒中的新的还原性染料，即ROS探针的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于探测活性氧(reactive oxygen species, R0S)的探针,特别是涉及还原的菁染料探针(cyanine dye probes),以及这样的探针在体外或体内的应用。
技术介绍
氧化应激源于活性氧(ROS)的产生和细胞清除这样的自由基的能力之间的不平衡。氧化应激可有许多不同的通路引起，内在或外在的，或者由线粒体呼吸或者由膜-结合的NADPH氧化酶介导。ROS在多种疾病，包括，但不限于炎症、动脉粥样硬化、衰老和年龄相关性退行性紊乱的进程中起重要作用。可探测血清样品、活组织外植体、细胞培养物中和体内的ROS的探针具有医学诊断和诊断以ROS产生增加为特征的疾病的研究工具的潜在用途(1-6)。成像术使与在小细胞中的细胞毒性和细胞凋亡相关的不同参数的多重分析、定位和定量成为可能。因此， 通过常规荧光显微镜术、荧光分光术、流式细胞仪和/或高容量成像法的ROS的探测相对于其他技术可能具有优势。超氧化物和羟基，诸如二氢乙啶(dihydroethydium) (DHE)的荧光传感器已经被用作ROS探针。然而，由于其自发性自动-氧化、快速光漂白、高度毒性和与ROS的多种反应产物，DHE已经限制应用(7-8)。更有甚者，DHE的较低的发射波长使得其在体内的应用成为问题。二氢罗丹明(Dihydrorhodamine) (DHR),已经被研究用于ROS的探测的另一种还原性染料(9),遭受高氧化率，由此限制其应用。迄今为止，所开发的作为基于Cy3/Cy5/Cy7 (10-11)的ROS的探针的菁染料，不同程度地遭受溶解度问题和/或自动-氧化作用。磺酸酯-基染料也已经被研究用作ROS探针(12-13)。这些探针，典型地需要费时并且昂贵的多步合成程序，经历快速水解，由此限制其应用。因此，存在对探测ROS的探针的需求，使在体外或体内使用经得起检验，而不遭受在先技术ROS探针的局限，特别是，它们倾向经历由氧和/或光催化的自发性自动-氧化，同时伴随高水平的背景荧光的产生(14-15)。专利技术简述 本文描述的是通过常规荧光显微镜术、荧光分光术、流式细胞仪和/或高容量成像法探测活性氧(ROS)的化合物、组合物、方法和试剂盒。本专利技术化合物是新的还原性染料，包括 Cy-基氢菁染料(hydrocyanine dyes)和 Cy-基氣菁染料(deuterocyanine dyes),所述染料是在体外或体内探测细胞内ROS和检测氧化应激的探针。这些探针在与其他活细胞染料，诸如，例如绿色荧光蛋白(GFP)的多重应用中是有用的，使得它们用于检测细胞毒性和细胞凋亡的多种生物标记和可被用于评价由各自不同的试剂，包括，但不限于脂多糖、甲萘醌、血管紧张素I1、奈法唑酮(nefazodone)、伊屋诺霉素(ionomycin)和谷氨酸盐在多种或细胞模型中所产生的ROS。本文公开的还原性染料，一般具膜通透性并因此可在细胞中聚集，与相应的氧化性染料相比，表现出少量或无荧光性。当与本文公开的还原性染料细胞内反应，即ROS的探测时，还原性染料由此被氧化，得到在暴露足量波长的光下具实质性荧光强度的染料。本文公开的还原性染料与例如，线粒体膜电位、质膜渗透性和/或胱天蛋白酶(caspase)激活的探针组合时，也可被用于区分肝毒性化合物与无毒性化合物。本文也描述了制备用于本专利技术公开的组合物、方法和试剂盒中的新的还原性染料，即ROS探针的方法。—个实施方案提供具有结构式(I)的、新的还原性染料化合物(即ROS探针):..../ / \ \权利要求1.一种结构式(I)的还原性染料化合物:2.依据权利要求1的化合物，其中的化合物具有结构式(III):3.依据权利要求1的化合物，其中的化合物具有结构式(IV):4.依据权利要求1的化合物，其中的化合物具有结构式(V):5.依据权利要求1的化合物，其中的化合物具有结构式(VI):6.依据权利要求5的化合物，其中R3、R4、R13和R14独立地为C1-C22烷基。7.依据权利要求6的化合物，其中R2和R12独立地为甲氧基羰基烷基、乙氧基羰基烷基、丙氧基擬基烧基、乙稀氧基擬基烧基、稀丙氧基擬基烧基、甲氧基擬基链稀基、乙氧基擬基链烯基或丙氧基羰基链烯基。8.一种选自以下的还原性染料化合物: 1- (4-乙氧基-4-氧代丁基)-2，3，3-三甲基-1吲哚爾溴化物； 1-(4-乙氧基-4-氧代丁基)-((W，W, AE) -5-(1-(4-乙氧基-4-氧代丁基)_3，3- 二甲基吲哚啉-2-亚基)戊-1, 3- 二烯基-3，3- 二甲基-W-吲哚働溴化物； 1-(4-乙氧基-4-氧代丁基)_3，3- 二甲基-2- ({IE, ,E, 5E) -5-(1-(4-乙氧基-4-氧代丁基)-3，3- 二甲基吲哚啉-2-亚基)戊-1，3- 二烯基)吲哚啉； 1-(4-乙氧基-4-氧代丁基)-2-氘-3，3-二甲基-2-((1^，3万，5万)-5-(1-(4-乙氧基-4-氧代丁基)_3，3- 二甲基吲哚啉-2-亚基)戊-1，3- 二烯基)吲哚啉； 1-(4-乙氧基-4-氧代丁基)-2- ({IE, W、-3-(1-4-乙氧基-4-氧代丁基)_3，3- 二甲基吲哚啉-2-亚基)丙-1-烯基)_3，3- 二甲基-W-吲哚鐵溴化物； 1-(4-乙氧基-4-氧代丁基)_3，3- 二甲基-2- ({XE, W) -3-(1-(4-乙氧基-4-氧代丁基)-3，3- 二甲基吲哚啉-2-亚基)丙-1-烯基)吲哚啉； 1-(3-羧基丙基)_2，3，3-三甲基-M-吲哚-1-爾溴化物；1-(4-(烯丙氧基)-4-氧代丁基)-2，3，3-三甲基-M-吲哚-1-鐵溴化物； 1-(4-(烯丙氧基)-4-氧代丁基)-2-((1^ 3幻-3-(1-(4-(烯丙氧基)-4-氧代丁基)-3，3- 二甲基吲哚啉-2-亚基)丙-1-烯-1-基)_3，3- 二甲基-M-吲哚-1-霞溴化物； 4- ((β) -2- ((β) -3-(1-(4-(烯丙氧基)-4-氧代丁基)-3，3- 二甲基吲哚啉_2_基)烯丙叉)-3，3-二甲基吲哚啉-1-基)丁酸烯丙酯； {E)-1-(4-乙氧基-4-氧代丁 -2-烯-1-基)-2，3，3-三甲基-W-吲哚-1-儀溴化物；1-((.E) -4-乙氧基-4-氧代丁 -2-烯-1-基)-2-({IE, ,E) -3-(1-((β) ~4~ 乙氧基-4-氧代丁 -2-烯-1-基)-3，3- 二甲基吲哚啉-2-亚基)丙-1-烯-1-基)_3，3- 二甲基-W-吲哚-1-雜溴化物; (.Ε) -4- ((B) -2- ({E) -3-(1-({E) -4-乙氧基-4-氧代丁 -2-烯-1-基)-3，3- 二甲基吲哚啉-2-基)烯丙叉)-3，3- 二甲基吲哚啉-1-基)丁 -2-烯酸乙酯； 1-({E) -4-乙氧基-4-氧代丁 -2-烯-1-基)-2- ({IE, W, 5￡) -5-(1-((￡) ~4~ 乙氧基-4-氧代丁 -2-烯-1-基)-3，3- 二甲基吲哚啉-2-亚基)戊-1，3- 二烯-1-基)-3，3- 二甲基-3/F吲哚-1-爾溴化物；{E) -4- ({E) -2- 本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：姜熙喆，K吉，B曼达维利，LQ赢，B布兰肖，
申请(专利权)人：生命科技公司，
类型：
国别省市：
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