用于培养和扩增细胞的组合物和方法技术

本文提供了对哺乳动物细胞培养的改进。部分具体地，用于培养和扩增哺乳动物细胞(例如，免疫细胞，如T细胞和NK细胞)的组合物、方法和试剂盒。在一些方面，提供了用于增强细胞在无血清培养基中增殖的组合物和方法。血清培养基中增殖的组合物和方法。血清培养基中增殖的组合物和方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于培养和扩增细胞的组合物和方法
[0001]相关申请
[0002]本申请要求于2018年5月8日提交的美国临时申请第62/668,369号的优先权和权益。


[0003]本文提供了对哺乳动物细胞培养的改进。部分具体地，用于培养和扩增哺乳动物细胞(例如，免疫细胞，如T细胞和NK细胞)的组合物、方法和试剂盒。在一些方面，提供了用于增强细胞在无血清培养基中增殖的组合物和方法。

技术介绍

[0004]哺乳动物细胞培养提出了一系列问题，特别是对于细胞培养，其中所得细胞旨在用于治疗目的或指向潜在治疗用途的研究。
[0005]当将细胞用于治疗目的时，通常期望在不存在血清的情况下培养这些细胞。这样做的原因包含细胞将被血清中存在的外来因子(例如病毒、朊病毒、支原体等)污染的可能性。而且，当用于哺乳动物细胞培养中时，即使从大量(例如，100个或更多个)动物的血液中收集的血清也具有明显的批次间可变性(参见图1)。如从图1所呈现的数据中可以看出，不同批次的可商购获得的人血清显示出总T细胞产率的显著变化。在转导效率方面也发现了显著变化(数据未显示)。
[0006]哺乳动物细胞培养的其它问题是低存活率水平、低细胞密度以及在执行时的低转导效率水平。
[0007]本文提供了对哺乳动物细胞培养的改进。在部分具体的方面，提供了用于培养和扩增哺乳动物细胞(例如，T细胞)的组合物、方法和试剂盒。在一些方面，提供了用于增强细胞在无血清培养基中增殖的组合物和方法。

技术实现思路

[0008]提供了用于增强免疫细胞(如免疫细胞、T细胞、B细胞和抗原呈递细胞(APC))的扩增的组合物和方法。此类组合物和方法提供了有利地扩增NK细胞、T细胞、B细胞和/或APC的条件。在一些情况下，组合物和方法提供合适的氧气浓度和/或脂质混合物以支持NK细胞、T细胞、B细胞和/或APC的快速扩增。
[0009]在一些情况下，提供了用于扩增混合的T细胞群体的组合物(例如，培养基，如无血清培养基)和方法，其中多于一种T细胞亚型以相似的速率扩增。在许多情况下，T细胞扩增将在存在血清白蛋白(例如，人血清白蛋白，如重组产生的人血清白蛋白)的情况下发生。进一步地，提供了用于扩增存在于T细胞的混合群体中的T细胞的组合物和方法，其允许一种或多种T细胞亚型相对于一种或多种不同的T细胞亚型被消耗或增强。
[0010]而且，本文提供了允许以高细胞密度和高水平的细胞存活率培养哺乳动物细胞的细胞培养组合物和方法。
[0011]本文提供的是用于培养(在本文中也称为扩增)免疫细胞(例如，单个T细胞亚型或不同T细胞亚型的混合群体)的组合物和方法。在一些情况下，此类方法包括在免疫细胞(例如，NK细胞、T细胞、B细胞和/或APC)的峰群体最大倍增时间为约25小时到约40小时(例如，约25小时到约35小时、约25小时到约32小时、约25小时到约30小时、约27小时到约35小时、约30小时到约35小时、约28小时到约40小时、约30小时到约40小时、约29小时到约39小时、约28小时到约37小时等)的条件下培养免疫细胞(例如，NK细胞、T细胞、B细胞和/或APC)，并且其中在无血清的情况下培养T细胞。
[0012]进一步地，免疫细胞(例如，NK细胞、T细胞、B细胞和/或APC)可以在存在血清白蛋白(例如，人血清白蛋白)的情况下进行培养，并且此血清白蛋白可以重组产生。当使用重组血清白蛋白时，其可以在哺乳动物细胞或非哺乳动物细胞(例如，如毕赤酵母(Pichia pastoris)等酵母或如水稻等植物)中产生。在本文阐述的方法中采用的培养基中的血清白蛋白的浓度通常将在0.1％到1％的范围内(例如，约0.1％到约0.9％、约0.2％到约0.9％、约0.3％到约0.9％、约0.1％到约0.8％、约0.1％到约0.6％、约0.2％到约0.5％等)。
[0013]在一些方法中，细胞在包括O
P
T
MIZERTM
CTS
TM
SFM(赛默飞世尔科技(Thermo Fisher Scientific)，目录号A1048501)的培养基或包括CTS
TM
免疫细胞血清替代物(ICSR)(赛默飞世尔科技，目录号A2596101)的培养基中进行培养。在一些方法中，细胞在包括O
P
T
MIZERTM
CTS
TM
SFM(赛默飞世尔科技，目录号A1048501)和CTS
TM
免疫细胞血清替代物(ICSR)(赛默飞世尔科技，目录号A2596101)的培养基中进行培养。
[0014]本文阐述的组合物和方法的一些方面涉及使培养的细胞获得氧气和去除二氧化碳。通常期望这些细胞在有效去除二氧化碳的情况下容易获得氧气。沿着这些路线，通常如本文所述培养的细胞将存在于培养设备中。此类培养设备中的O2浓度通常将介于15％与25％之间(例如，约15％到约24％、约17％到约25％、约18％到约25％、约20％到约25％、约22％到约25％、约23％到约25％等)。进一步地，此类培养设备中的CO2浓度通常介于2％与7％之间。
[0015]在许多情况下，通过使用与培养基接触的气体可渗透膜将促进气体交换。此类膜可以定位于培养容器的底部，并且允许O2进入培养基且允许CO2离开培养基。在一些情况下，在方法的实践中使用的气体可渗透膜可以由气体可渗透硅酮构成或可以包括气体可渗透硅酮，和/或所述气体可渗透膜的厚度可以介于0.001英寸与0.01英寸之间(例如，约0.005英寸到约0.007英寸、约0.002英寸到约0.007英寸、约0.003英寸到约0.007英寸、约0.005英寸到约0.009英寸、约0.004英寸到约0.008英寸等)。
[0016]在一些方法中，细胞在培养容器中进行培养。例如，培养容器选自由以下组成的组：
[0017](A)6M孔板(沃尔夫
·
威尔逊公司(Wolf Wilson Corporation)，零件号80660M)，
[0018](B)24孔板(沃尔夫
·
威尔逊公司，零件号80192M)，
[0019](C)孔板(沃尔夫
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威尔逊公司，零件号80240M)，
[0020](D)10(沃尔夫
·
威尔逊公司，零件号80040S)，
[0021](E)6M孔板(沃尔夫
·
威尔逊公司，零件号80500)，
[0022](F)100M孔板(沃尔夫
·
威尔逊公司，零件号81100)，
[0023](G)100M-CS孔板(沃尔夫
·
威尔逊公司，零件号81100-CS)，
[0024](H)500M孔板(沃尔夫
·
威尔逊公司，零件号85500S)，以及
[0025](I)500M-CS孔板(沃尔夫
·
威尔逊公司，零件号本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于培养T细胞的方法，所述方法包括在所述T细胞的峰群体最大倍增时间为约25小时至约40小时的条件下培养所述T细胞，并且其中所述T细胞在无血清下培养。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述T细胞在血清白蛋白存在下培养。3.根据权利要求2所述的方法，其中所述血清白蛋白是人血清白蛋白。4.根据权利要求2所述的方法，其中所述血清白蛋白是重组血清白蛋白。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述重组血清白蛋白在不是哺乳动物细胞的细胞中产生。6.根据权利要求1所述的方法，其中在包含OPTMIZER
TM CTS
TM SFM(赛默飞世尔科技(Thermo Fisher Scientific)，目录号A1048501)的培养基中培养T细胞。7.根据权利要求1所述的方法，其中在包含CTS
TM
免疫细胞血清替代物(ICSR)(赛默飞世尔科技，目录号A2596101)的培养基中培养T细胞。8.根据权利要求1所述的方法，其中在包含OPTMIZER
TM CTS
TM SFM(赛默飞世尔科技，目录号A1048501)和CTS
TM
免疫细胞血清替代物(ICSR)(赛默飞世尔科技，目录号A2596101)的培养基中培养T细胞。9.根据权利要求1所述的方法，其中在O2浓度为15％至25％的培养箱中培养T细胞。10.根据权利要求1所述的方法，其中在CO2浓度为3％至7％的培养箱中培养T细胞。11.根据权利要求1所述的方法，其中在34℃至40℃的温度下培养T细胞。12.根据权利要求1所述的方法，其中在存在气体可渗透膜的情况下培养T细胞。13.根据权利要求12所述的方法，其中所述T细胞在培养容器中培养。14.根据权利要求13所述的方法，其中所述培养容器是6M孔板(沃尔夫
·
威尔逊公司(WolfWilson Corporation)，零件号80660M)。15.根据权利要求12所述的方法，其中所述气体可渗透膜包括硅酮，并且厚度为0.005英寸至0.007英寸。16.根据权利要求1所述的方法，其中所述T细胞在存在将不会形成大量氨的谷氨酰胺源的情况下培养。17.根据权利要求16所述的方法，其中所述谷氨酰胺源是L-丙氨酰基-L-谷氨酰胺二肽。18.根据权利要求1所述的方法，其中所述T细胞存在于不同T细胞亚型的混合群体中。19.根据权利要求1所述的方法，其中所述T细胞达到每cm21.0
×
107至8.0
×
107个细胞的群体密度。20.根据权利要求1所述的方法，其中所述T细胞从由供体提供的样品获得。21.根据权利要求20所述的方法，其中所述供体是人供体。22.根据权利要求1所述的方法，其中所述T细胞与一种或多种试剂接触，所述一种或多种试剂与存在于所述T细胞上的一种或多种细胞受体结合。23.根据权利要求22所述的方法，其中所述一种或多种试剂是能够结合所述一种或多种细胞表面受体的一种或多种抗体或抗体片段。24.根据权利要求22所述的方法，其中所述一种或多种试剂活化一种或多种T细胞亚型。
25.根据权利要求22所述的方法，其中所述一种或多种试剂包含与一种或多种选自由以下组成的组的T细胞表面受体结合的一种或多种抗体：(g)CD3、(h)CD5、(i)CD6、(j)CD28、(k)CD137和(l)CD278。26.一种用于优先扩增存在于混合的T细胞群体中的一个或多个T细胞子群的方法，其中所述T细胞在不存在血清下扩增，并且其中所述T细胞在具有气体可渗透膜的培养容器中扩增。27.根据权利要求26所述的方法，其中所述T细胞的最大倍增时间为约25小时至约40小时。28.根据权利要求26所述的方法，其中所述T细胞在存在一种或多种趋化因子或细胞因子的情况下扩增。29.根据权利要求29所述的方法，所述一种或多种趋化因子或细胞因子是选自由以下组成的组的一种或多种蛋白质：(k)白细胞介素-1α、(l)白细胞介素-2、(m)白细胞介素-4、(n)白细胞介素-1β、(o)白细胞介素-6、(p)白细胞介素-12、(q)白细胞介素-15、(r)白细胞介素-18、(s)白细胞介素-21和(t)转化生长因子β1。30.根据权利要求26所述的方法，其中所述一个或多个T细胞子群优先于一个或多个不同的T细胞子群扩增。31.根据权利要求26所述的方法，其中记忆T细胞优先于抗原特异性T细胞扩增。32.根据权利要求31所述的方法，其中记忆T细胞以比抗原特异性T细胞快5至15倍的速率扩增。33.根据权利要求26所述的方法，其中总T细胞群体以比...

【专利技术属性】
技术研发人员：E，
申请(专利权)人：生命科技公司，
类型：发明
国别省市：