本发明专利技术属于生物医药技术领域，具体涉及一种HCG粗品的制备方法。HCG粗品的制备方法，包括下述的步骤：a.收集孕妇尿液，超滤得浓缩液；b.在浓缩液中加入浓度为0.5-0.8%的无水氯化钙，搅拌溶解；c.再将步骤b中的浓缩液加入到2-3倍体积的丙酮中静置10-16小时，所述的丙酮温度为4℃，并将加入了浓缩液的丙酮置于4℃下保存；d.虹吸步骤c中的上层液，并用丙酮洗涤沉淀两次；抽干或真空干燥。采用以上的方法制备HCG粗品，和传统的采用苯甲酸钠的制备方法相比，无需采用苯甲酸钠和盐酸，降低了成本；而且本发明专利技术的方法中，减少了由于中间反应环节带来的HCG的损失。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于技术生物医药
，具体涉及一种HCG粗品的制备方法。
技术介绍
HCG即人绒毛膜促性腺激素,是英文human chorionic gonadotrophin三个英文的首字字母缩写，是由胎盘的滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，它是由a和0 二聚体的糖蛋白组成。HCG在受精后第六天前后就进入母血并快速增殖一直到孕期的第8周，然后缓慢降低浓度直到第18 20周，然后维持10天左右，并开始下降(但仍高于正常水平)。完整的HCG全部是由胎盘绒毛膜的合体滋养层产生。其主要功能就是刺激黄体，有利于雌激素和黄体酮持续分泌，以促进子宫蜕膜的形成，使胎盘生长成熟。现代认为HCG是由滋养层过渡型细胞和合体细胞产生的。HCG在受精后6左右天开始分泌，60 — 70天达到高峰。在妊娠的前8周增值很快，以维持妊娠。在大约孕8周以后，HCG逐渐下降，直到大约20周达到相对稳定。HCG性状呈白色粉末，易溶于水，不溶于乙醇、丙酮、乙醚等有机溶剂，pH3.2-3.3，干品较稳定，临床上主要用于男性垂体机能不足所致的性机能过低的隐睾症，用于由黄体功能不全引起的功能行子宫出血病和习惯性流产与HMG合同可诱发排卵和治疗不育症。HCG的另一个重要用途是制备妊娠试剂盒放射免疫试剂，用以妊娠检验和绒毛膜癌的诊断，HCG在医学上有重要的用途。HCG的传统制备方法是:收集孕妇尿液，在尿液中加入苯甲酸钠，再加入盐酸，充分反应，生成苯甲酸，将HCG吸附住，再加入食用酒精使HCG沉淀下来，再干燥HCG，该方法的缺点是，该方法的步骤繁多，尿液中的HCG损失较大；而且该方法中使用到了苯甲酸钠和盐酸，其成本较高，而且盐酸的复新过程需要消耗热量。CN1302818A公开的方法中，采用醋酸钠的高盐抽提和低盐反抽技术得到HCG中间体，经过SP-葡聚糖凝胶的分离纯化技术制得一种高纯度的人绒毛膜促性腺激素，经过无菌无热原的处理制得医用的注射用HCG精品原料。其具体的工艺流程是:中间体制造工段和纯品HCG制造工段，中间体制造工段过程中，称取HCG粗品，投入到氯化钠的醋酸钠氯化钙乙醇的缓冲液中，搅拌提取，静置过夜虹吸上清液，残渣继续提取，离心取上清液；加入乙醇继续提取；采用预冷丙酮脱水后真空干燥，得中间体；过色谱柱对HCG中间体纯化，收集，加乙醇沉淀，的效价为3000-3500iu/mg的HCG纯品。该方法的缺点是:采用的试剂较多，步骤较为繁琐，而且在该方法中采用了有机试剂乙醇，增加了溶剂回收的步骤。CN1047507A披露了一种提取人绒毛膜促性腺激素的吸附剂和方法，该方法的具体步骤是:使用硅藻土作为吸附剂，从早、中期(2-6个月)孕妇新鲜尿液中，在37°C以下提取人绒毛膜促性腺激素。具体为:调节孕妇尿液PH值，加硅藻土吸附，取硅藻土装柱，用洗脱液洗脱，加酒精沉淀，经脱水干燥制得人绒毛膜促性腺激素。该方法的缺点是:采用硅藻土作为吸附剂，会吸附一部分HCG，带来HCG的损失。
技术实现思路
为了解决上述的技术问题，本专利技术提供了一种成本低、步骤简单、易于工业化生产的HCG粗品的制备的方法。HCG粗品的制备方法，包括下述的步骤: a.收集孕妇尿液，采用40目滤网过滤；采用微滤设备预处理过滤，再在超滤设备中超滤得到浓缩液，超滤的条件是:PH3.8-4.0，超滤膜的截留分子量为lOOOODa，超滤至浓缩液为原尿液重量的4-5%为止； b.在浓缩液中加入占浓缩液重为0.5-0.8%的无水氯化钙，搅拌溶解； c.再将步骤b中的浓缩液加入到2-3倍体积的预冷到4°C的丙酮中静置6-15小时，并将浓缩液和丙酮的混合溶液置于4°C下保存； d.虹吸步骤c中的上层液，并用丙酮洗涤沉淀两次；抽干或真空干燥得HCG粗品。上述的步骤a中，超滤尿液后，用反渗透水清洗超滤设备，清洗液冷藏并入下次尿液，可以将尿液中的有效成份更彻底的清洗出来，减少提取中的损失。上述的步骤b中，在浓缩液中加入战浓缩液总重为0.65%的无水氯化钙，搅拌溶解。优选的，上述的步骤c中，具体为:再将步骤b中的浓缩液中加入到2.5倍体积的丙酮中静置12小时，所述的丙酮为预冷到4°C的丙酮，并将浓缩液和丙酮的混合溶液置于4°C下保存。上述的步骤a中，收集的孕妇尿液中，不得检出艾滋病毒、乙肝病毒HBs-Ab、HBc-Ab、Hbe-Ab0 上述的步骤a中，所得到的HCG粗品成品中不得检出艾滋病毒、乙肝病毒HBs_Ab、HBc-Ab、Hbe-Ab0步骤a中，在4_10°C的区间范围内，有利于HCG粗品的提取。HCG粗品的制备方法，包括下述的步骤: a.收集孕妇尿液，采用40目滤网过滤；采用微滤设备预处理过滤，再在超滤设备中超滤得到浓缩液，超滤的条件是:PH3.9，超滤膜的截留分子量为lOOOODa，超滤至浓缩液为原尿液重量的4.5%为止； b.在浓缩液中加入占浓缩液重为0.6%的无水氯化钙，搅拌溶解； c.再将步骤b中的浓缩液加入到2.5倍体积的预冷到4°C的丙酮中静置8小时，并将浓缩液和丙酮的混合溶液置于4°C下保存； d.虹吸步骤c中的上层液，并用丙酮洗涤沉淀两次；抽干或真空干燥得HCG粗品。本专利技术的有益效果在于，采用以上的方法制备HCG粗品，和传统的采用苯甲酸钠的制备方法相比，无需采用苯甲酸钠和盐酸，降低了成本；而且本专利技术的方法中，减少了由于中间反应环节带来的HCG的损失。具体实施例方式下面结合具体实施例对本专利技术作更进一步的说明，以便本领域的技术人员更了解本专利技术，但并不因此限制本专利技术。实施例1HCG粗品的制备方法，包括下述的步骤: a.收集孕妇尿液，该孕妇尿液中，未检出艾滋病毒、乙肝病毒HBs-Ab、HBc-Ab、Hbe-Ab，采用40目滤网过滤；采用微滤设备预处理过滤，再在超滤设备中超滤得到浓缩液，超滤的条件是:pH3.9，超滤膜的截留分子量为lOOOODa，超滤至浓缩液为原尿液重量的4%左右； 超滤后用反渗透水清洗超滤设备，清洗液冷藏并入下次尿液； b.在浓缩液中加入浓度为0.65%的无水氯化钙，搅拌溶解； c.再将步骤b中的浓缩液加入到2.5倍体积的预冷到4°C的丙酮中静置6小时以上，并将浓缩液和丙酮的混合溶液置于4°C下保存； d.虹吸步骤c中的上层液，并用丙酮洗涤沉淀两次；真空干燥，得HCG粗品，经检测，HCG粗品中未检出艾滋病毒、乙肝病毒HBs-Ab、HBc-Ab、Hbe-Ab。采用以上的实施例中的方法制备HCG粗品，其实验结果如下:权利要求1.HCG粗品的制备方法，包括下述的步骤: a.收集孕妇尿液，采用40目滤网过滤；采用微滤设备预处理过滤，再在超滤设备中超滤得到浓缩液，超滤的条件是:PH3.8-4.0，超滤膜的截留分子量为lOOOODa，超滤至浓缩液为原尿液重量的4-5%为止； b.在浓缩液中加入占浓缩液重为0.5-0.8%的无水氯化钙，搅拌溶解； c.再将步骤b中的浓缩液加入到2-3倍体积的预冷到4°C的丙酮中静置6-15小时，并将浓缩液和丙酮的混合溶液置于4°C下保存； d.虹吸步骤c中的上层液，并用丙酮洗涤沉淀两次；抽干或真空干燥得HCG粗品。2.如权利要求1所述的HCG粗品的制备方法，其特征在于，所述的步骤a中，超滤尿液后，用反渗透水清洗超滤设备，清洗液冷藏并本文档来自技高网...
【技术保护点】
HCG粗品的制备方法，包括下述的步骤：a.收集孕妇尿液，采用40目滤网过滤；采用微滤设备预处理过滤，再在超滤设备中超滤得到浓缩液，超滤的条件是：pH3.8?4.0，超滤膜的截留分子量为10000Da，超滤至浓缩液为原尿液重量的4?5%为止；b.在浓缩液中加入占浓缩液重为0.5?0.8%的无水氯化钙，搅拌溶解；c.再将步骤b中的浓缩液加入到2?3倍体积的预冷到4℃的丙酮中静置6?15小时，并将浓缩液和丙酮的混合溶液置于4℃下保存；d.虹吸步骤c中的上层液，并用丙酮洗涤沉淀两次；抽干或真空干燥得HCG粗品。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘爱红，陈方山，
申请(专利权)人：邹平县滨渤生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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