一种新型牡丹快速繁殖培养基制造技术

一种新型牡丹快速繁殖培养基，涉及一种培养基的新配方，该培养基由大量元素、微量元素、铁盐、有机物和蒸馏水组成，是在传统MS培养基的基础上大幅度改良而成，得到的新型牡丹快速繁殖培养基（LPM）特别适合牡丹的组织培养，快繁的牡丹幼苗生长健壮，繁殖系数高，生根粗壮，数量多活力强，移栽成活率高达85%以上。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种培养基的新配方，具体的说是一种新型牡丹快速繁殖培养基(LPM)。
技术介绍
牡丹是我国特产的传统名花，其花色艳美，气味芬芳，具有较高的观赏价值；根皮是贵重的中药材，有清热凉血、活血祛瘀和补血等作用。牡丹传统的繁殖方式包括有性繁殖中的种子繁殖，无性繁殖中的分株繁殖、压条繁殖、嫁接繁殖等。但这些繁殖方式时间长，而且只能在生长季节繁殖，牡丹苗体生长量小、繁殖速度慢，种苗数量不足是限制牡丹大面积扩大生产的重要瓶颈。组织培养是快速繁殖植物种苗的有效方法，筛选合适的牡丹快繁培养基是扩大生产的最有效途径，牡丹组织培养始于1983年，之后国内外进行了大量研究，到目前为止，牡丹组培的一些关键环节还没有彻底攻克，特别是牡丹专用培养基的研究没有报道。而使用现有的MS、B5、N6、WPM培养基来培养牡丹试管苗生长困难，尤其是生根难，而且根的质量细小，移栽困难，从而大大严重限制了牡丹的商品化生产。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是:提供一种新型牡丹快速繁殖培养基，能够有效的解决牡丹种苗繁殖系数低，种苗生根难，根质量细小和移栽困难的问题，可以为牡丹规模化生产提供大批量的牡丹种苗。为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是:一种新型牡丹快速繁殖培养基，包括大量元素、微量元素、铁盐和有机物， 所述大量元素由 300-1200 mg/L NH4NO3^ 1400 mg/L KNO3>150 mg/L CaCl2.2H20、150mg/L MgSO4.7H20 和 400-800 mg/L KH2PO4 组成； 所述微量元素由 0.83 mg/L ΚΙ,6.2 mg/L H3BO3Ul.2 mg/L MnSO4.4Η20、8.6 mg/LZnSO4.7Η20、0.025 mg/L CuSO4.5H20 和 0.025 mg/L CoCl2.6H20 组成；所述铁盐由 27.85 mg/L FeSO4.7H20 和 37.25 mg/L Na2-EDTA.2H20 组成； 所述有机物由0.5 mg/L烟酸、0.5 mg/L盐酸批B多醇、I mg/L盐酸硫胺素、2 mg/L甘氨酸、60-90 g/L蔗糖和6-7 g/L琼脂组成； 所述培养基余量为蒸馏水。所述培养基的pH值为5.8。本专利技术带来的有益效果为: 本专利技术通过对MS培养基进行大幅度的系统改良，得到的LPM培养基特别适合牡丹的组织培养，快繁的牡丹幼苗生长健壮，繁殖系数高，生根粗壮，数量多活力强，移栽成活率高达85%以上。本专利技术中采用KH2PO4的浓度为400-800 mg/L,优选为650 mg/L,这是因为牡丹组织培养是幼小的外植体快速生长，形成愈伤和幼苗的过程，细胞代谢加强，膜系统功能不断完善，膜磷脂系统扩大需要大量磷酸根的供应，与MS培养基相比，较大幅度提高KH2PO4的浓度对提高牡丹组织培养过程中外植体的生活力，提高代谢活性，加快苗体生长有显著作用。同时，与MS培养基相比，本专利技术亦大幅降低KNO3浓度，KNO3的浓度为1400 mg/L,主要是降低其中N03_浓度，一方面是由于N03_是液泡膜H+-ATPase的专一抑制剂，高浓度的N03_离子则抑制液泡膜H+-ATPase的活性，导致细胞质碱化作用的抑制，结果不利于细胞的生长过程；另一方面，牡丹组织对硝态氮比较敏感，高浓度的硝态氮对牡丹组织生长不利。本专利技术LPM培养基中NH4NO3用量为300-1200 mg/L，优选为750-1200 mg/L，这是因为牡丹组培过程中铵态氮对牡丹组织的生长十分有利，浓度过小牡丹试管苗生长慢而且细弱，但浓度过大试管苗不长甚至会死亡，因此这个浓度范围是最合适的。本专利技术中MgSO4.7H20浓度为150mg/L，MnSO4.4H20浓度为11.2mg/L时牡丹幼苗生长更为健壮。本专利技术中盐酸硫胺素的浓度为I mg/L，这是因为硫胺素是辅羧化酶的辅酶，低水平的硫胺素会导致辅羧化酶活性下降，糖代谢受阻，从而影响整个组织机体代谢过程。选择盐酸硫胺素的浓度为I mg/L，可提高辅羧化酶水平，从而提高了牡丹组培苗的糖代谢活性，有利于牡丹苗的生长。同时，也是增加牡丹组培过程中光强的加强光合作用的基础。本专利技术中除去了 MS培养基中的Na2MoO4.2H20，原因是Na2MoO4.2H20是植物细胞酸性磷酸酶的专一抑制剂，牡丹细胞组织再建过程，膜系统功能加强，膜磷脂的代谢加强是膜系统重建和功能稳定的基础，培养基中除去Na2MoO4.2H20后，能够提高磷酸酶活性，有利于牡丹组织细胞快速分裂和细胞体积增大过程中膜系统的重建。本专利技术中加大培养基中的蔗糖浓度，由MS培养基中的30 g/L升高到60-90 g/L，优选为85 g/L,能够有效的降低培养基的水势，显著地抑制组培苗的玻璃化和褐化现象的发生；同时调节培养基的碳氮比，保障能量的有效供应。 具体实施例方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的详细说明，一种新型牡丹快速繁殖培养基，包括大量元素、微量元素、铁盐和有机物， 所述大量元素由 300-1200 mg/L NH4NO3'1400 mg/L KNO3>150 mg/L CaCl2.2H20、150mg/L MgSO4.7H20 和 400-800 mg/L KH2PO4 组成，KH2PO4 的浓度优选为 650 mg/L, NH4NO3 的浓度优选为750-1200 mg/L ； 所述微量元素由 0.83 mg/L KI,6.2 mg/L H3BO3Ul.2 mg/L MnSO4.4Η20、8.6 mg/LZnSO4.7Η20、0.025 mg/L CuSO4.5Η20 和 0.025 mg/L CoCl2.6H20 组成；所述铁盐由 27.85 mg/L FeSO4.7H20 和 37.25 mg/L Na2-EDTA.2H20 组成； 所述有机物由0.5 mg/L烟酸、0.5 mg/L盐酸批B多醇、I mg/L盐酸硫胺素、2 mg/L甘氨酸、60-90 g/L蔗糖和6-7 g/L琼脂组成，蔗糖浓度优选为85 g/L ； 所述培养基余量为蒸馏水。所述培养基的pH值为5.8。其用于牡丹组织培养的具体步骤为: 采集牡丹植株的腋芽、嫩叶和叶柄作为外植体，用75%酒精浸泡10秒，在0.1%升汞消毒10分钟，再用无菌水清洗5次后，将外植体放在LPM培养基上(培养基中加入KT 0.1-0.5mg/L, BA 0.2-0.8 mg/L, GA 0-0.4 mg/L)进行无菌培养。培养接种2-3周后，外植体基部周围逐渐愈伤组化，4-5周后，由愈伤组织分化出丛生芽。将丛生芽切割，在LPM培养基上(培养基中加入KT 0.1-0.5 mg/L, BA 0.2-0.8 mg/L，GA 0-0.4 mg/L)进行培养，经1_2个月，又产生愈伤组织及丛生芽。将新长出的丛生芽转移到LPM培养基上(培养基中加入KT 0.2-0.8 mg/L，GA0.2-0.8 mg/L)，培养I个月左右，将伸长的芽从基部切下放入50-200 mg/L IBA的溶液中处理2-3小时，然后再转入含5 g/L活性炭的LPM培养基中，经25-35天，形成良好的根系，生根率达90%以上，效果明显。当试本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种新型牡丹快速繁殖培养基，包括大量元素、微量元素、铁盐和有机物，其特征在于：所述大量元素由300?1200?mg/L?NH4NO3、1400?mg/L?KNO3、150??mg/L?CaCl2·2H2O、150?mg/L?MgSO4·7H2O和400?800?mg/L?KH2PO4组成；所述微量元素由0.83?mg/L?KI、6.2?mg/L?H3BO3、11.2?mg/L?MnSO4·4H2O、8.6?mg/L?ZnSO4·7H2O、0.025?mg/L?CuSO4·5H2O和0.025?mg/L?CoCl2·6H2O组成；所述铁盐由27.85?mg/L?FeSO4·7H2O和37.25?mg/L?Na2?EDTA·2H2O组成；所述有机物由?0.5?mg/L烟酸、?0.5?mg/L盐酸吡哆醇、1?mg/L盐酸硫胺素、2?mg/L甘氨酸、60?90?g/L蔗糖和6?7?g/L琼脂组成；所述培养基余量为蒸馏水。

【技术特征摘要】
1.一种新型牡丹快速繁殖培养基，包括大量元素、微量元素、铁盐和有机物，其特征在于:所述大量元素由 300-1200 mg/L NH4NO3^ 1400 mg/L KNO3>150 mg/L CaCl2.2H20、150mg/L MgSO4.7H20 和 400-800 mg/L KH2PO4 组成； 所述微量元素由 0.83 mg/L ΚΙ,6.2 mg/L H3BO3Ul.2 mg/L MnSO4.4Η20、8.6 mg/LZnSO4.7Η20、0.025 mg...

【专利技术属性】
技术研发人员：史国安，高双成，施江，王世华，李玉龙，
申请(专利权)人：河南科技大学，
类型：发明
国别省市：