本发明专利技术属于动物饲料技术领域，具体公开了一种制备复合乳酸菌制剂的方法及应用。所述方法包括菌株扩大培养、复合菌株液态培养、农副产品废渣预处理、复合菌株液固态耦联发酵。该发明专利技术克服了当前益生菌饲料添加剂产品存在的性能稳定性差、生产成本高的问题，其不仅使复合乳酸菌制剂产品中的菌株竞争力增强，宿主定植率得到提高，而且，该方法能大幅度减小成本，并有效利用农副产品废渣资源，使其成为饲料添加剂成分中的重要组成部分，在一定程度上解决了资源浪费和环境污染等突出问题，可成功应用于饲料方面。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物学和饲料添加剂
，更为具体地，涉及一种制备复合乳酸菌制剂的方法及应用。
技术介绍
益生菌制剂(微生态制剂)是基于饲用抗生素安全性问题应运而生的一种安全、无毒副作用、能促进畜禽生长、改善畜产品肉质风味、有利于生态环境和出口贸易的绿色饲料添加剂。乳酸菌属是益生菌制剂中重要的菌种，其大部分是厌氧或兼性厌氧的革兰氏阳性菌，生长在矿物质和有机营养物丰富的环境中，耐酸，在ρΗ3.(Γ4.5时仍可生长，适应于胃肠的酸性环境； 众所周知，使用工业化生产的益生菌在进入畜禽肠道后可能会发生较大差异结果，性能与效果不尽如意，究其原因，可能主要与2个因素有关，第一个是选用的菌株在进入宿主过程中定植不成功；第二个是没有足够数量的菌株作用。生产厂家以及相关科研单位为了提升产品稳定性，做了大量的工作。中国专利ZL201010168634.X公布了一种干燥保存活性乳酸菌的方法及乳酸菌制剂，但该方法制备的成品中乳酸菌浓度较低，同时，采用饲料原料作为载体，微生物极易在储存中消耗饲料中的营养物质，造成能量及有效成分的缺失；中国专利ZL201110085520.3公开了一种浓浆制做发酵蛋白浓缩饲料工艺，该方法虽然在一定程度上降低了现有烘干技术生产浓浆饲料的成本，提高了产品的稳定性，但饲料营养缺失问题还是没有得到根本解决；中国专利ZL200810197944.7公开了一种液态转固态发酵的益生菌活性湿拌饲料制备方法，但该方法的液态发酵基料的原料要求苛刻，同时，湿拌过程也就是饲料营养物质缺失过程；中国专利ZL201110269745.4公布了一种乳酸菌微胶囊及其制备方法，虽然提高了益生菌的稳定性和抗逆性，但制备工艺复杂，成本加大，并不适合畜牧业大众化生产；中国专利ZL201210144048.0公开了一种乳酸菌及其冻干菌粉与应用，虽然能够提高生长猪的日增重，降低料肉比，但设备成本偏高。目前我国生产益生菌制剂的发酵基料成分中大多有玉米蛋白粉、麸皮、豆柏以及功能性名贵中药等，虽然能使微生物快速发酵并聚集，但显然也增加了其生产成本。与此同时，我国是农业大国，每年农产品加工后遗留下的农副产品废渣，由于富含不能再直接利用的纤维素、木质素、果胶等物质而被废弃。被誉为“淀粉之王”的木薯，在生产淀粉后留下的木薯渣残余，每年达30万吨；大豆生产豆奶或者豆腐后剩下的豆腐废渣，年产量居然超过2000万吨；这些数字中还不包括甘蔗渣、菠萝渣等其他农副产品废渣。这些废渣如不加以处理而直接丢弃既造成极大浪费又占土地，而且极易产生腐败气味污染周边环境。利用微生物来发酵降解农副产品废渣是一研究热点。中国专利ZL201210155158.7提供了一种混合菌发酵玉米秸杆生产益生菌颗粒饲料的方法，其充分利用了新收割干燥的玉米秸杆资源，并加入麸皮、玉米粉等物质,混入混合菌株进行发酵,但该方法设备成本高,另外由于产品是较大的颗粒状，很难与其他饲料混匀，造成其适口性不足；中国专利ZL200610123892.X公布了一种采用农副产品开放式曲种固体发酵方法，其产品富 含植物性蛋白饲料原料，但该方法获得的活菌数偏低，另外杂菌污染率很高，导致产品不稳定。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服现有技术益生菌饲料添加剂产品中存在的稳定性差、生产成本高的不足，提供一种制备复合乳酸菌制剂的方法。该方法得到的乳酸菌制剂中的菌株竞争力增强，提高其宿主定植率，而且，该方法能有效利用农副产品废渣资源，使其成为饲料添加剂成分中的重要组成部分，在一定程度上解决了资源浪费和环境污染等突出问题。本专利技术的另一个目的是提供一种复合乳酸菌制剂的应用。本专利技术通过以下技术方案予以实现上述目的: 一种复合乳酸菌制剂的制备方法，包括以下步骤: 51.将各乳酸菌扩大培养； 52.将SI中各乳酸菌扩大培养后的培养液混合得复合乳酸菌，将复合乳酸菌加入装有液态培养基料的发酵装置中，发酵得到发酵菌液；当发酵菌液的PH值为3.2^3.7，活菌总数达5.4 6.2 X IO9 cfu/ml时停止发酵； 53.农副产品废渣预处理:选取农副产品废渣，采用质量百分数为0.Γ0.5% HNO3水溶液9(Tl00°C高温预处理l(T20min，捞起废渣，降温至常温备用； 54.将S3中预处理后的废渣加入到S2中进行液固态耦联发酵，同时加入酶制剂辅助酶解，当发酵菌液的PH值为3.Γ3. 4，活菌总数达7.8 8.5 X IO9 cfu/ml时停止发酵，得复合乳酸菌制剂。具体地，SI所述乳酸菌扩大培养的具体步骤为: Sll.各乳酸菌斜面复壮；从各保藏的斜面菌种挑取相应菌落扩培复壮，分别接种于MRS培养基上，于35 40°C培养2Γ72 h，使其处于对数中后期，得复壮菌株；其中，所述的培养基为MRS斜面固体培养基。S12.各乳酸菌摇床培养:将步骤Sll中复壮的乳酸菌株分别用无菌水冲洗下来制成菌悬菌液，接种到装有改良MRS培养液的三角瓶中，三角瓶编好号，控制温度40°C，密封培养24 h，制备乳酸菌摇床培养液。S13.各乳酸菌种子罐培养:将步骤S12中摇床培养的菌种分别用生理盐水冲洗下来制成悬菌液，全部接种到装有改良MRS培养液的种子罐中，编好号，控制温度35 °C，密封培养48 h,制备乳酸菌种子培养液。其中，步骤S12和S13中所述的改良MRS培养液成分含量相同:酪蛋白胨10.0 g，牛肉浸取物10.0 g，酵母提取液5.0 g，葡萄糖5.0 g，乙酸钠5.0 g，柠檬酸二胺2.0 g，吐温3.2 g，磷酸氢二钾2.0 g，七水硫酸锰0.05 g，七水硫酸镁0.2 g，碳酸钙21 g，琼脂24g，蒸馏水1000 ml，在彡100 °C下灭菌，随后降温到35°C左右，pH 6.8。优选地，S2所述复合乳酸菌为干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、屎肠球菌或植物乳杆菌中的任意两种、多种或全部；复合乳酸菌的接种量占发酵培养液总体积的5 10%。优选地，S2中所述发酵的条件为35 40°C，发酵48 72h ；S4中所述发酵的条件为35 40°C，发酵 72 96 h。优选地，S2中所述液态培养基料含有15 30重量份数的发酵基料、8(Γ95重量份数的水和(Γ0.5重量份数的生长促进因子。优选地，所述发酵基料的制备方法为:按重量份数计，将4(Γ60份玉米、2(Γ40份黄豆和1(Γ15份麸皮分别粉碎成广3 mm，筛片后分别烘炒20 min, 30 min和15min，三者混匀得发酵基料。优选地，所述生长促进因子为木瓜、胡萝卜、糊精、麦芽糖、酸化酪蛋白水解物、胰蛋白胨、浓缩乳清蛋白、酵母浸膏、低聚麦芽糖、低聚半乳糖或低聚果糖中的一种，多种或者全部。优选地，S3中所述农副产品废渣为木薯渣、豆腐渣、菠萝渣或甘蔗渣；废渣与HNO3水溶液的固液比为1: 12 18。优选地，S4中所述酶制剂为纤维素酶、果胶酶、葡聚糖酶的一种或多种；酶制剂加入量占总发酵总量的0.οΓο.1%。一种如上所述复合乳酸菌制剂的应用，所述应用为将复合乳酸菌制剂直接与生猪日食饲料按1:2 10的比例混合即时饲用；或者将复合乳酸菌制剂与生猪日食饲料混合，使含水量降低到25 35%，并混入0.05%果寡糖，真空包装储存备用。本专利技术的有益效果是。(I)本专利技术所制备本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种复合乳酸菌制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.将各乳酸菌扩大培养；S2.将S1中各乳酸菌扩大培养后的培养液混合得复合乳酸菌，将复合乳酸菌加入装有液态培养基料的发酵装置中，发酵得到发酵菌液；当发酵菌液的pH值为3.2~3.7，活菌总数达5.4~6.2×109?cfu/ml时停止发酵；S3.农副产品废渣预处理：选取农副产品废渣，采用质量百分数为0.1~0.5%?HNO3水溶液90~100℃高温预处理10~20min，捞起废渣，降温至常温备用；S4.将S3中预处理后的废渣加入到S2中进行液固态耦联发酵，同时加入酶制剂辅助酶解，当发酵菌液的pH值为3.1~3.4，活菌总数达7.8~8.5×109?cfu/ml时停止发酵，得复合乳酸菌制剂。
【技术特征摘要】
1.一种复合乳酸菌制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: 51.将各乳酸菌扩大培养； 52.将SI中各乳酸菌扩大培养后的培养液混合得复合乳酸菌，将复合乳酸菌加入装有液态培养基料的发酵装置中，发酵得到发酵菌液；当发酵菌液的PH值为3.2^3.7，活菌总数达5.4 6.2 X IO9 cfu/ml时停止发酵； 53.农副产品废渣预处理:选取农副产品废渣，采用质量百分数为0.Γ0.5% HNO3水溶液9(Tl00°C高温预处理l(T20min，捞起废渣，降温至常温备用； 54.将S3中预处理后的废渣加入到S2中进行液固态耦联发酵，同时加入酶制剂辅助酶解，当发酵菌液的PH值为3.Γ3.4，活菌总数达7.8 8.5 X IO9 cfu/ml时停止发酵，得复合乳酸菌制剂。2.根据权利要求1所述复合乳酸菌制剂的制备方法，其特征在于，SI所述乳酸菌扩大培养的具体步骤为: 511.各乳酸菌斜面复壮； 512.各乳酸菌摇床培养； 513.各乳酸菌种子罐培养。3.根据权利要求1所述复合乳酸菌制剂的制备方法，其特征在于，S2所述复合乳酸菌为干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、屎肠球菌或植物乳杆菌中的任意两种、多种或全部；复合乳酸菌的接种量占发酵培养液总体积的5 10%。4.根据权利要求1所述复合乳酸菌制剂的制备方法，其特征在于，S2中所述发酵的条件为35 40°C，发酵48 72h ；S4中所述发酵的条件为35...
【专利技术属性】
技术研发人员：黎小兵，胡杰，杨星，江彬强，黄升科，
申请(专利权)人：广东壹号食品股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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