焦磷酸测序技术检测贾第鞭毛虫的方法技术

本发明专利技术公开了一种焦磷酸测序技术检测贾第鞭毛虫的方法，属于食源性寄生虫的检测技术领域，首先依据贾第鞭毛虫磷酸丙糖异构酶(triose phosphate isomerase，tim)设计特异性引物及焦磷酸测序引物；再提取待测样品的脱氧核糖核酸(DNA)，然后分别以tim基因的特异性引物进行聚合酶链式反应(PCR)扩增；用琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行检测，若引物扩增片段长度为165bp，则制备焦磷酸测序单链模板，再进行焦磷酸测序反应，最后根据PCR扩增结果和焦磷酸测序结果来判定样品中是否含有贾第鞭毛虫。本发明专利技术适用于对贾第鞭毛虫进行快速检测确证，可广泛应用于环境中的水质监控、人体粪便中卵囊检测及进出口贸易中该类原虫的确证。

【技术实现步骤摘要】

:本专利技术属于食源性寄生虫的检测
，涉及一种采用焦磷酸测序(Pyrosequencing)技术检测贾第鞭毛虫的方法。
技术介绍
:贾第鞭毛虫(Giardia Iamblia)是一种具有2个细胞核的多鞭毛寄生原虫,可寄生于人体和多种脊椎动物肠道内，继而引起以腹泻为主的贾第虫病(Giardiasis)，为人体肠道感染的常见寄生虫之一，在世界范围内普遍存在。由于其在供水系统中存活时间较长，对氯等消毒剂的耐受性高，存在污染的水对供水安全造成极大威胁。研究表明:贾第虫的致病剂量为10 100个活孢囊。人体感染贾第虫后，主要症状是腹痛、腹泻、腹胀、呕吐、发热和厌食等，典型病人表现为以腹泻为主的吸收不良综合征，腹泻呈水样粪便，量大、恶息、无脓血。儿童患者可由于腹泻，引起贫血等营养不良，导致生长滞缓。若不及时治疗，多发展为慢性，表现为周期性稀便，反复发作，大便甚臭，病程可长达数年。据美国资料分析显示，1990 2000年，由于地表水受原虫污染，导致生活饮用水污染而引起的感染暴发事件呈上升趋势；加拿大66家水厂水源水样本中有81%的水样检出了原虫；日本某饮用水净水厂原水中，贾第虫包囊的检出率本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种焦磷酸测序技术检测贾第鞭毛虫的方法，其特征在于，首先依据贾第鞭毛虫磷酸丙糖异构酶(triose phosphate isomerase，tim)设计特异性引物及焦磷酸测序引物；再提取待测样品的脱氧核糖核酸(DNA)，然后分别以tim基因的特异性引物进行聚合酶链式反应(PCR)扩增；用琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行检测，若引物扩增片段长度为165bp，则制备焦磷酸测序单链模板，再进行焦磷酸测序反应，最后根据PCR扩增结果和焦磷酸测序结果来判定样品中是否含有贾第鞭毛虫；所述的设计贾第鞭毛虫的特异性引物及焦磷酸测序引物是根据该虫的磷酸丙糖异构酶基因序列，选取保守序列，通过Assay Design ...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：孙涛，邓明俊，肖西志，王群，郑小龙，凌宗帅，
申请(专利权)人：山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：山东;37