一种可高通量检测东海原甲藻自然水样的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种可高通量检测东海原甲藻自然水样的试剂盒。所述的试剂盒由自然样品核酸粗提试剂、5×NASBA?Buffer、5×Primer?mix、4×Enzyme?mix、RNA变性剂和杂交液12种成份组成。该检测试剂盒的检测原理是以藻细胞的rRNA为靶序列，采用一种等温核酸扩增技术制备靶序列，通过RNA的反向斑点杂交对多个检测样品进行同时检测。试剂盒的检测过程只需简易的设备，检测快速，检测结果可通过肉眼直接进行判断，且具有较高的灵敏度，可用于日常水环境的现场检测，对东海原甲藻赤潮的预警有一定的实用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及海洋生物
，尤其涉及的是一种可高通量检测东海原甲藻自然水样的试剂盒。
技术介绍
赤潮是指由于海洋浮游生物，包括藻类(主要原因种)、原生动物和细菌的过度繁殖或聚集造成海水变色的现象。近年来，由于人类活动的加剧，海洋日趋富营养化，导致赤潮频发，并已成为一种全球性的生态灾害，给水产养殖业、捕捞业和滨海旅游业造成了巨大损失，同时也给海洋生态环境带来负面影响，甚至直接威胁人类健康。对赤潮原因种(包括东海原甲藻)进行正确鉴定是研究、认识和防治其引起的赤潮的前提和基础，同时更应建立简单、快速和特异性强的检测方法，监测赤潮高发区的水环境，对可能爆发的有害赤潮进行预警，特别是指导渔业生产者及时采取应对措施，以减少经济损失。因此，赤潮藻检测方法成为近年来的研究热点。当前，对自然水样中的赤潮藻(包括东海原甲藻)的检测的传统方法，主要是以其分类学特征为基础，借助光镜和电镜对其细胞形态特征进行观察，并最终对其进行鉴定。最近，分子生物学技术为赤潮藻的鉴定提供了新思路。赤潮藻的分子检测技术以藻细胞的基因组核糖体DNA (rDNA)为靶目标，其主要原因是藻类基因相对恒定，不会随其表观形态特征随本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种可高通量检测东海原甲藻自然水样的试剂盒，其特征在于，其组成为：（1）?试剂A为自然样品核酸粗提试剂，其组成为：2%?(m/v)?CTAB,?0.5%(v/v)?β?mercaptoethanol,?1.4?M?NaCl,?20?mM?EDTA,?100?mM?Tris?Cl,?10?U?RNase?Inhibitor；（2）?试剂B为5×NASBA?Buffer，其组成为0.2?M?Tris?HCl,?60?mM?MgCl2,?0.35?M?KCl2,?25?mM?DTT,?20?mM?dNTP；（3）试剂C为NTP（10?mM?each)；（4）试剂D为5×Primer?mix，其组成为...

【技术特征摘要】
1.一种可高通量检测东海原甲藻自然水样的试剂盒，其特征在于，其组成为:(I)试剂A为自然样品核酸粗提试剂，其组成为:2% (m/v) CTAB, 0.5% (v/v) ^ -mercaptoethanol, 1.4 M NaCl, 20 mM EDTA, 100 mM Tris-Cl, 10 U RNaseInhibitor ； (2)试剂B 为 5XNASBA Buffer，其组成为 0.2 M Tris-HCl, 60 mM MgCl2, 0.35 MKCl2, 25 mM DTT, 20 mM dNTP ； (3)试剂C 为 NTP (10 mM each)； (4)试剂D 为 5XPrimer mix，其组成为:75% DMS0, I 剛 NASBA-PI, I 剛 NASBA-P2,25 mM DTT, 20 mM dNTP ； (5)试剂E 为 4XEnzyme mix,其组成为:1.5 M 山梨醇，0.42 mg/ml BSA, 16 U/ml RNase H，6400 U/ml T7 RNA Polymerase, 128...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈国福，张春云，
申请(专利权)人：哈尔滨工业大学威海，
类型：发明
国别省市：