虫生真菌莱氏野村菌及其培养方法与应用技术

本发明专利技术涉及一种虫生真菌莱氏野村菌及其培养方法与应用。该莱氏野村菌（Nomuraearileyi）Nr1001保藏编号为CGMCCNO.6387。所述微生物制剂由莱氏野村菌Nr1001发酵液、表面活性剂及防腐剂混配而成。所筛选出的Nr1001菌株杀虫谱广、杀虫效果好，其对鳞翅目夜蛾科昆虫如棉铃虫、甜菜夜蛾、斜纹夜蛾、银纹夜蛾、大豆夜蛾、烟夜蛾等幼虫具有较强的侵染作用并使田间害虫病害流行，有效降低害虫的虫口密度，起到较好的控害效果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物防治领域，具体涉及一种杀虫真菌一莱氏野村菌及其培养方法与应用。
技术介绍
与其它杀虫微生物相比，真菌具有其特殊优势:触杀性、流行性、对环境安全和不易产生抗药性；培养生产简单，产业化容易；对Bt类杀虫剂目前无法防治的地下害虫、蛀干害虫、刺吸式口器害虫的防治有特效等等，因此，真菌杀虫剂的研究开发已引起了研究人员广泛的关注和重视。莱氏野村菌\_Nomuraea rileyi (Farlow) Samson]是一种分布广泛的昆虫病原真菌，能寄生40多种昆虫，特别是对鳞翅目夜蛾科害虫幼虫的致病力较强，在田间可引发棉铃虫、斜纹夜蛾、甜菜夜蛾、黎豆夜蛾、大豆夜蛾等多种害虫的疾病流行，对害虫种群有一定的控制作用，自该菌被分离鉴定以后，逐渐被各国科学家所重视，具有较高的开发利用价值。但来源不同的莱氏野村菌菌株不但在菌落生长量、产孢量及孢子萌发率等方面存在明显的差异，而且其杀虫效果也大不相同，然而产孢量、孢子萌发率、杀虫效果等是影响莱氏野村菌菌株在农业生防中应用的重要因素。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种杀虫效果良好的虫生真菌莱氏野村菌，并提供了一种产孢量大且孢子萌发率高的莱氏野村菌培养方法。为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是:一种莱氏野村菌(/Vbffitfraea ri7eja.) NrlOOl,其保藏编号为 CGMCC N0.6387。利用上述虫生真菌莱氏野村菌生产孢子的方法，包括以下步骤: (1)试管菌种制备:将NrlOOl菌株接种到试管SMAY斜面培养基上，26 28°C下培养144小时获得试管菌种； (2)种子液制备:取斜面菌种，每支用灭菌的0.05% (v/v) Tween-80冲洗制得孢子液，接种到装有50mL SMY的250mL三角瓶至终浓度为I X IO6孢子/mL，于26°C、180 r/min摇床培养144小时,作为液体种子液备用； (3)培养基质制备:称取一定量基质料，并按2g:1ml的固液比向基质料中入蒸馏水，经高压灭菌后冷却，并按基质料重量的4 8%加入麦芽糖和I 3%的酵母粉，即成培养基质，所述基质料为小麦、大豆、大米、麦麸中的至少一种，且所述大豆和小麦加蒸馏水浸泡至少12小时后再进行高压 灭菌处理； (4)将上步所得基质打碎凝结块，并按lml:12g的接种量向其中接入步骤(2)所得种子液，充分摇匀，于如下的培养条件下培养14d后分离出孢子:培养温度25 30°C，95%的空气湿度，pH6 8、8L光照。在所述步骤(3)中，最佳的基质料为大豆基质，经浸泡、高压灭菌后，按大豆基质重量的6%加入麦芽糖。将种子液接种到大豆基质上可进行规模化生产，大豆基质制备如下:60g大豆加30ml水浸泡过夜，打碎后灭菌，加入6%的麦芽糖和2%酵母粉，接入5ml上述种子液，充分摇匀，置于25°C下培养14天，发酵产品常温晾干，粉碎后即制得孢子粉。上述生物制剂可以通过喷雾的方法施用，可单独使用，也可与白僵菌、绿僵菌、苏云金杆菌等生物杀虫剂、植物调节剂混合使用。一般在幼虫孵化至3龄前喷雾。本专利技术具有积极有益的效果: 所筛选出的况rileyi 1001菌株杀虫效果好，室内NrlOOl菌株对棉铃虫三龄幼虫的杀虫效果达70%以上；田间防治棉铃虫、甜菜夜·蛾等害虫的效果达90%以上，与之前所报道的其他莱氏野村菌菌株相比，无论在产孢量还是杀虫效果上，都有一定的优势；而且，该菌株的杀虫谱广，对鳞翅目夜蛾科幼虫如棉铃虫、甜菜夜蛾、斜纹夜蛾、黎豆夜蛾、大豆夜蛾等均有较强的感染作用，可造成·田间害虫大面积流行。由此可见，NrlOOl菌株具有较好的杀虫效果，具有较好的工业化生产前景。本专利技术的生物制剂的制备方法简单，筛选出了成本低廉的工业大规模培养用培养基，大大降低了生产成本，有利于该生物制剂的应用普及。本专利技术所述莱氏野村菌(AbffitfraeaNrlOOl,已于2012年7月31日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其简称为CGMCCJia:北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院微生物研究所,该莱氏野村菌GVoffitfraea riIeyD^rlQQl的保藏编号为CGMCC N0.6387。附图说明图1不同湿度对NrlOOl菌落生长的影响趋势 图2不同湿度对NrlOOl孢子萌发的影响趋势图。具体实施例方式以下结合具体实施例进一步阐述本专利技术。实施例1菌种分离 菌株的采集:2009年-2010年，于温县滩区王军霞实验地、温县农科所试验地、河南省农业科学院现代农业科技试验示范基地(简称:河南农科院基地)的地黄、花生、大豆田采集罹病僵虫。菌株的分离:采用常规的虫生真菌组织分离方法。用清水冲洗虫体表面，75%酒精浸泡2s，无菌水冲洗2遍，然后用灭菌的解剖刀和镊子将虫体切成小块，将其放在75%酒精中浸泡1.5min,无菌水浸泡2次，每次10s，再用无菌的小镊子将虫体块接到PDA平板表面，28°C保湿培养，待虫块表面的菌丝长的比较明显时，用牙签挑起虫体表面的菌丝转接到加有100 μ L的青霉素G (50 yg/mL)和链霉素(50 μ g/mL)的PDA平板上，20 d后转接在PDA斜面上，置4°C冰箱保存备用。表1分离得到的菌株本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种虫生真菌莱氏野村菌（Nomuraea?rileyi）Nr1001菌株，其保藏编号为CGMCC?NO.6387。

【技术特征摘要】
1.一种虫生真菌莱氏野村菌GVo皿raea ri7e_Fi) NrlOOl菌株，其保藏编号为CGMCCN0.6387。2.权利用权利要求1所述虫生真菌莱氏野村菌制得的孢子粉。3.权利要求1所述虫生真菌莱氏野村菌或权利要求2所述孢子粉在鳞翅目夜蛾科害虫防治中的应用。4.权利用权利要求1所述虫生真菌莱氏野村菌生产孢子的方法，包括以下步骤: (1)试管菌种制备:将NrlOOl菌株接种到试管SMAY斜面培养基上，26 28°C下培养144小时获得试管菌种； (2)种子液制备:取斜面菌种，每支用灭菌的体积百分比为0.05%的Tween-80冲洗制得孢子液，接种到装有50mL SMY的250mL三角瓶至终浓度为I X IO6孢子/mL，于26°C、180r/min摇床培养144小...

【专利技术属性】
技术研发人员：任应党，崔筱，张书杰，刘新涛，王刚，刘玉霞，赵辉，刘红彦，
申请(专利权)人：河南省农业科学院，
类型：发明
国别省市：