混杂地结合于人类白细胞抗原（HLA）II类分子的肿瘤相关肽制造技术

本发明专利技术涉及免疫治疗方法，以及用于免疫治疗方法中的分子与细胞。本发明专利技术特别涉及肿瘤的免疫治疗方法。本发明专利技术更进一步涉及T辅助细胞肽抗原表位-单独或与其它癌症细胞肽结合而作为疫苗混合物的活性药物成分以刺激抗肿瘤的免疫反应。本发明专利技术特别涉及衍生自人类肿瘤细胞株的HLA(人类白细胞抗原)II类分子的49种新型肽序列，所述肽可用于诱发抗癌免疫反应的疫苗组合物中。

【技术实现步骤摘要】
混杂地结合于人类白细胞抗原(HLA) I I类分子的肿瘤相关肽描述本专利技术涉及免疫治疗方法，及用于免疫治疗方法中的分子与细胞。特别的是，本专利技术涉及肿瘤的免疫治疗方法。本专利技术更进一步涉及T辅助细胞肽的抗原表位-其单独或与其它癌症细胞相关肽结合而作为疫苗组合物的活性药物成分，所述活性药物成分刺激抗肿瘤的免疫反应。尤其是，本专利技术涉及衍生自人类肿瘤细胞系上的人类白细胞抗原(HLA)II类分子的49种新型肽序列，所述肽序列可用于引发抗肿瘤免疫反应的疫苗组合物中。本文此处所提及所有参考文献均以参考的方式以其全文并入本文。
技术介绍
免疫反应的诱发是依赖被宿主免疫系统视为外来物的抗原存在。癌症相关抗原的发现已使得藉宿主免疫系统反应干扰肿瘤生长成为可能。目前利用不同的机制控制包括免疫系统的体液的与细胞的抗癌免疫机制正被研究。细胞性免疫反应的特异性成份可以特异性识别与摧毁癌症细胞。由癌细胞浸润的细胞群中或由周边血液分离出的细胞毒性T细胞暗示着这些细胞在自然抗癌免疫反应中起重要作用(Cheever et al. ,Annals N. Y. Acad. Sc1. 1993690:101—112)。特别是 CD8-阳性T细胞(TCD8+)，它可识别I类主要组织相容性复合体(MHC Class I)-所携带来自细胞质蛋白质的通常为8至10个残基的肽，在前述免疫反应中扮演重要角色。人类的主要组织相容性复合体分子(MHC)又被称为人类白细胞抗原(HLA)。有两种主要组织相容性复合体分子(MHC) =MHC I类分子(MHC class I),可于大多数呈现经由降解内源性蛋白质与较大肽的有核细胞中发现。MHC II类分子(MHC classII)仅于专职抗原提呈 细胞(APC)，提呈被APC经内吞作用所得外来蛋白质的肽，并被后续处理。肽与MHC I类分子的复合物可被CD8阳性的细胞毒性T细胞所识别，肽与MHC II类分子的复合物可被CD4阳性的辅助性T细胞所识别。CD4阳性的辅助性T细胞在指导抗癌T细胞反应的有效功能上扮演重要角色，因此，肿瘤相关抗原(TAA)衍生的CD4阳性的T细胞抗原表位的鉴别可能对于开发诱发抗癌免疫反应的药学产品有极大的重要性(Kobayashi, H.，R. Omiya, M.Ruiz, E. Huarte, P. Sarobe, J. J. Lasarte, M. Herraiz, B. Sangro, J. Prieto, F.Borras-Cuestaj and E. Celis. 2002.1dentification of an antigenic epitopefor helper T lymphocytesfrom carcinoembryonic antigen. Clin. CancerRes. 8: 3219-3225.，Gnjatic，S.，D. Atanackovic, E. Jager, M. Matsuo, A. Selvakumar, N.K. Altorki, R. G. Makij B. Dupont, G. Ritter, Y. T. Chen, A. Knuth，and L. J. Old. 2003.Survey of naturalIy occurring CD4+T_cell responses against NY-ESO-1incancer patients : Correlation with antibody responses. Proc. Natl.Acad.Sc1.U. S. A. 100(15) :8862-7)。在如小鼠等哺乳动物模式中显示，即便无细胞毒性T细胞(亦即CD8阳性T细胞)，⑶4阳性T细胞仍可藉由分泌INF-Y抑制血管生成而足以抑制肿瘤形成(Qin, Z. and T. Blankenstein. 2000. CD4+T-cell-mediated tumor rejection involvesinhibition of angiogenesis that isdependent on IFN gamma receptor expression bynonhematopoietic cells.1mmunity. 12:677-686)。此外，CD4 阳性 T 细胞识别的由人类白细胞抗原II类分子所提呈的肿瘤相关抗原肽能够通过抗体(Ab)反应的诱导来对抗肿瘤的发展(Kennedy, R. C. , M. H. Shearer, A. M. Watts, and R. K. Bright. 2003. CD4+T lymphocytesplay a critical role in antibodyproduction and tumor immunity against simianvirus 401arge tumorantigen. Cancer Res. 63:1040-1045)。相对于肿瘤相关妝结合于人类白细胞抗原I分子，至今仅有少数TAA的人类白细胞抗原II类配体(ligand)被描述(www. cancerimmunity. org, www. syfpeith1. de) 因为 HLA II 的组成性表达多局限于免疫系统的细胞(Mach, B. , V. Steimle, E. Martinez-Soria, and ff. Reith. 1996. Regulationof MHC class II genes: lessons from a disease. Annu. Rev.1mmunol. 14:301-331),所以直接由原始肿瘤分离出可与人类白细胞抗原II结合的肽被认为是不可能的。因此，许多将抗原靶向APC的人类白细胞抗原II类处理途径的策略已经被发掘，例如将感兴趣的抗原与APC —起培育，以致抗原被吸收、处理与提呈(Chaux, P.，V. Vantomme, V.Stroobant, K. Thielemans, J. Corthals, R. Luiten, A. M. Eggermont, T. Boon, and B. P. vander Bruggen. 1999.1dentification of MAGE-3epitopes presented by HLA-DRmoleculesto CD4(+)T lymphocytes. J. Exp. Med. 189:767-778),或将能编码感兴趣的抗原的基因或微基因转染细胞，以及融合入不变链-此不变链可介导抗原转移位置至溶酶体的MHC II类处理及装配的隔室(MIIC)。肽必须与MHC分子结合才能引发(产生)细胞免疫反应。这个过程是有赖于MHC分子的等位基因与肽氨基酸序列的特异多态性。结合于MHC I类分子的肽通常有8至10个残基长度且具有两个保守性残基(“锚”)可与MHC分子上相对应的结合槽交互作用。当无炎症反应时，MHC II类分子的表达主要局限于免疫系统的细胞，特别是专职的抗原呈现细胞(APc)jn:单核细胞、单核细胞衍生细胞、巨噬细胞与树突细胞。`可为特异抗肿瘤的细胞毒性T淋巴细胞所识别的抗原，亦即它们的抗原表位，可以本文档来自技高网...

【技术保护点】
肿瘤相关肽，所述肽选自包含任意的SEQ?ID?No.33、SEQID?No.43、SEQ?ID?No.31、SEQ?ID?No.1至SEQ?ID?No.32、SEQID?No.34至SEQ?ID?No.41及SEQ?ID?No.44至SEQ?ID?No.49或前述肽的变体中的至少一个序列的肽，条件是所述肽不是完整的人类肿瘤相关多肽。

【技术特征摘要】
2005.09.05 EU 05019254.11.肿瘤相关肽，所述肽选自包含任意的SEQID No. 33、SEQID No. 43、SEQ ID No. 31、SEQ ID No.1 至 SEQ ID No. 32、SEQID No. 34 至 SEQ ID No. 41 及 SEQ ID No. 44 至 SEQ IDNo. 49或前述肽的变体中的至少一个序列的肽，条件是所述肽不是完整的人类肿瘤相关多肽。2.如权利要求1所述的肿瘤相关肽，其中所述肽基本上包含任一的SEQID No.1至SEQID No. 41及SEQ ID No. 43至SEQ IDNo. 49或其变体的氨基酸序列。3.如权利要求1或2所述的肿瘤相关肽，其中所述肽具有9至100个氨基酸，优选为9至30个氨基酸的总长度。4.如权利要求1-3中任一权利要求所述的肿瘤相关肽，所述肽包含任一的SEQIDNo.1 至 SEQ ID No. 41 及 SEQ ID No. 43 至 SEQ ID No. 49 的氨基酸序列。5.如权利要求1-4中任一权利要求所述的肿瘤相关肽，所述肽具有结合于人类主要组织相容复合体(MHC)II类分子，特别是HLA-DRB 1*0101的能力。6.如权利要求5所述的肿瘤相关肽，所述肽具有结合于至少一种人类主要组织相容复合体(MHC)II类的其它分子的能力。7.如权利要求1-6中任一权利要求所述的肿瘤相关肽，其中所述肽包含非肽键。8.如权利要求1-7中任一权利要求所述的肿瘤相关肽，其中所述肽是融合蛋白，特别是包含HLA-DR抗原相关不变链(Ii)的N端氨基酸。9.核酸，其编码权利要求1-8中任一权利要求所述的肽。10.如权利要求9所述的核酸，其是DNA、cDNA、PNA、CNA、RNA或前述的混合。11.能够表达权利要求9或10所述核酸的表达载体。12.包含权利要求9或10的核酸或权利要求11的表达载体的宿主细胞。13.如权利要求12所述的宿主细胞，其是重组的RCC或Awells细胞。14.生产权利要求1-8中任一权利要求的肿瘤相关肽的方法，所述方法包括培养权利要求13所述的宿主细胞以及从所述宿主细胞或其培养基中分离所述肽。15.药物组合物，其包含权利要求1-8中任一权利要求的肿瘤相关肽、权利要求9或10的核酸或权利要求11的表达载体，及制药学上可接受的载体。16.如权利要求15所述的药物组合物，其为癌症疫苗形式，任选包含至少一种适合的佐剂。17.权利要求1-8中任一权利要求的肿瘤相关肽、权利要求9或10的核酸或权利要求11的表达载体在医学中的用途。18.杀伤患者的靶细胞的方法，所述患者的靶细胞异常表达包含权利要求1-6中任一权利要求给出的氨基酸序列的多肽，所述方法包括给予所述患者有效量的权利要求1-8中任一权利要求的肽、权利要求9或10的核酸或权利要求11的表达载体，其中所述肽的量或所述核酸的量或所述表达载体的量，对激发所述患者中抗祀细胞的免疫反应...

【专利技术属性】
技术研发人员：约恩·登扎尔，
申请(专利权)人：伊玛提克斯生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：