一种β-D-呋喃果糖苷酶的固态发酵生产方法技术

本发明专利技术涉及β-D-呋喃果糖苷酶（β-D-fructofuranosidase,EC?3.1.2.26，简写为FFase）的制备方法，尤其是一种β-D-呋喃果糖苷酶的固态发酵生产方法。其特点是，包括如下步骤：（1）孢子液的准备；（2）种子的扩大培养；（3）固态发酵产β-D-呋喃果糖苷酶；（4）后处理获得β-D-呋喃果糖苷酶。本发明专利技术方法克服了FFase液态发酵的缺点，提供一种FFase的固态发酵生产方法，用固态发酵的方法为低聚果糖的大规模工业生产提供优质酶源。优点是：（1）固态发酵培养基以甘蔗渣、稻壳、大豆饼等为原料，原料价格低廉；（2）发酵周期短，工艺设备简单，降低成本，益于工业化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及β-D-呋喃果糖苷酶(β-D-fructofuranosidase, EC 3.1.2. 26,简写为FFase)的制备方法，尤其是一种β -D-呋喃果糖苷酶的固态发酵生产方法。
技术介绍
低聚果糖(fructooligosaccharides)是一种新型的保健食品，是功能性低聚糖中颇具代表性的一种。低聚果糖是通过β _(2，I)糖苷键在蔗糖的果糖基上连接f 3个果糖基而形成的一系列果糖寡聚体，主要包括蔗果三糖(GF2)、蔗果四糖(GF3)、蔗果五糖(GF4)。日常食用的蔬菜与水果中含有此类寡糖，尤其是洋葱、牛蒡、芒笋和麦类中含量较高。低聚果糖具有低热值、预防龋齿、增殖肠道内的双歧杆菌、调节机体免疫力等生理功能，被广泛应用于食品、饲料和医药工业，是一种重要的保健型添加剂。目前工业上生产低聚果糖方法主要有两种一是以菊芋为原料提取菊粉，再经酶水解而得。第二种方法是以蔗糖为原料，采用β-D-呋喃果糖苷酶作为生物催化剂通过酶促催化一系列转糖基反应而获得低聚果糖。后一种方法中可以通过将β-D-呋喃果糖苷酶固定化而实现连续生产，具有自动化程度高、操作稳定性好、酶能反复使用、生产成本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种β?D?呋喃果糖苷酶的固态发酵生产方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）孢子液的准备：首先制备试管斜面培养基，将黑曲霉接种到制备好的试管斜面培养基上，在25?32℃培养3～5天至长出孢子，然后向斜面上加入生理盐水洗涤菌丝体，获得孢子液；（2）种子的扩大培养：制备液体种子培养基，按照体积比2%～5%的接种量将步骤（1）得到的孢子液接入液体种子培养基，于25～32℃、转速180～220rpm的摇床上扩大培养2～4天，获得种子液；（3）固态发酵产β?D?呋喃果糖苷酶：制备固态发酵培养基，将种子液接入制备好的固态发酵培养基，充分搅拌混合，然后在料层厚度1～3厘米、湿度45%～80%、发酵温度25?...

【技术特征摘要】
1.一种β-D-呋喃果糖苷酶的固态发酵生产方法，其特征在于，包括如下步骤 (1)孢子液的准备首先制备试管斜面培养基，将黑曲霉接种到制备好的试管斜面培养基上，在25-32°C培养3 5天至长出孢子，然后向斜面上加入生理盐水洗涤菌丝体，获得孢子液； (2)种子的扩大培养制备液体种子培养基，按照体积比2% 5%的接种量将步骤(I)得到的孢子液接入液体种子培养基，于25 32°C、转速180 220rpm的摇床上扩大培养2 4天,获得种子液； (3)固态发酵产β-D-呋喃果糖苷酶制备固态发酵培养基，将种子液接入制备好的固态发酵培养基，充分搅拌混合，然后在料层厚度I 3厘米、湿度45% 80%、发酵温度25-35°C下静置发酵3 5天； (4)后处理获得β-D-呋喃果糖苷酶取步骤(3)得到的固体培养物，加入其6-10倍重量的50毫摩尔pH 5. 5的柠檬酸盐缓冲液，用组织捣碎机粉碎，再搅拌浸提至少4小时，经过离心或过滤使固液分离，得到的上清液或滤液即为粗β -D-呋喃果糖苷酶酶液。2.如权利要求1所述的一种β-D-呋喃果糖苷酶的固态发酵生产方法，其特征在于步骤(3)中固态发酵培养基的制备方法是将1. 5 3倍重量的营养液均匀喷洒在固体混合物上，然后在121°C灭菌20分钟即可，其中营养液的组成以g/L计为，甘蔗糖蜜1...

【专利技术属性】
技术研发人员：王双平，陈龙，苏二正，
申请(专利权)人：宁夏乙征生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：