本发明专利技术公布了一种从银杏叶提取物中分离纯化GA、GB和白果内酯的方法，包括以下步骤：1）乙酸乙酯萃取；2）低碳醇－水混合溶剂浸提，得醇浸提取液和不溶物；3）不溶物硅胶柱层析分离得GA和GB；4）醇浸提取液浓缩至无醇、冷却，过滤，母液浓缩至干后用30~50%甲醇进行结晶3~5次可得白果内酯。本发明专利技术所分离纯化银杏内酯A、银杏内酯B和白果内酯的工艺路线简单，适合工业化生产。分离纯化所得银杏内酯A、银杏内酯B和白果内酯的纯度大于98%。银杏内酯A、银杏内酯B和白果内酯的转移率大于80%，产品收率高，生产成本低。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种银杏内酯A、B和白果内酯的方法，具体为一种从银杏叶提取物中分离纯化GA、GB和白果内酯的方法。
技术介绍
银杏叶提取物在促进循环系统的血小板活化、抗氧化作用、抗衰老功能、抗老年性痴呆和眼部视网膜病变等方面发挥了重要作用，被视为治疗神经系统疾病和心脑血管疾病的双跨性药物。据不完全统计，至2010年8月，国家食品药品监督管理局已颁发银杏叶提取物药物及复合制剂生产批文140多个，生产厂家有100多家。当今世界市场上银杏叶制品的年销售额达60亿美元以上，已成为植物药的全球冠军品种，银杏叶制剂成为治疗心脑血管疾病的领先品种。银杏叶提取物中二萜内酯有银杏内酯，主要有银杏内酯A、B、C、M、J和白果内酯，简称GA、GB、GC、GM、GJ和BB等。银杏内酯具有专属性的抗血小板活化因子(plateletactivating factor. PAF)活性,是天然的PAF拮抗剂,其中尤以GB的活性最高。GB已引起了国际药学界的广泛关注，有望成为治疗休克、烧伤、过敏性哮喘、中风、移植排斥、血液透析等病症的一类新药，目前在法国、英国等国家已经分别进入II和III期临床。白果内酯(BB)用于治疗神经系统疾病，如肌肉萎缩、肌挛、轻瘫、表层和深部感觉障碍、头痛、头晕、视力、听力、记忆障碍等。文献报道的银杏内酯单体分离纯化方法主要有乙醇提取一乙酸乙酯萃取一柱色谱分离法、乙醇提取一乙酸乙酯萃取一反相色谱分离法、色谱分离一重结晶法、超临界液体萃取法等。 GA、GB和BB分离纯化方法直接相关的授权专利技术专利或申请专利主要有如下(I)中国专利(ZL00117758. 3) “由银杏叶或银杏叶浸膏制备药物银杏内酯A、B的方法”，该专利技术涉及一种由银杏叶或银杏叶浸膏制备药物银杏内酯A、B的方法，它是以银杏叶或银杏叶浸膏为原料，经加入乙醇、或甲醇、或丙酮、或丁酮、或乙酸乙酯有机溶剂浸取，浸取液经过滤、静置分层，得到的有机相进行去杂质处理，再静置分层得到的有机相经浓缩、干燥得到富集银杏内酯A和B的浓缩物，采用制备液相色谱对含有银杏内酯A和B的浓缩物进行分离后处理，得到GA和GB，其特征在于在加入浸取剂的同时加入氯化物盐析剂；去杂质过程是向浸取液的有机层液加入钾盐或钠盐；制备型液相色谱的分离柱的流动相是采用乙酸乙酯和石油醚的混合液，固定相采用硅胶。该方法用制备型色谱分离GA和GB，生产成本高，产量小，不适合规模化大生产等缺点。(2)中国专利(申请号200710050245)“从银杏叶中提取分离银杏内酯B的方法”，该专利技术涉及从银杏叶中提取分离银杏内酯B的方法，其步骤如下1)取银杏叶，用由高到低不同浓度的乙醇进行提取，合并提取液，回收乙醇，得到浓缩后的提取液；2)向浓缩后的提取液中加入乙酸乙酯萃取，回收有机相后浓缩至浸膏；3)将步骤2)所得浸膏稀释后上选择性极性无孔吸附树脂柱，用乙醇洗脱，所得洗脱液回收乙醇后，再用乙醇结晶得到银杏内酯类化合物；4)将银杏内酯类化合物结晶上硅胶柱，用正己烷和乙酸乙酯的混合液洗脱，收集洗脱液，得到富集银杏内酯B的洗脱液；5)回收步骤4)中收集的洗脱液中的溶剂，再用乙醇结晶，得到银杏内酯B。该方法用工艺路线醇提一萃取一树脂纯化一结晶一硅胶柱分离一结晶等步骤，工艺路线复杂，且只分离得到GB。(3)中国专利(申请号201010608847.X) “一种从银杏内酯混合物中分离银杏内酯B的方法”，该专利技术公开了一种从银杏内酯混合物中分离银杏内酯B的方法，该方法以离子液体或者由离子液体水组成的二元混合溶剂为萃取剂，采用分馏萃取法高效地从含有银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C等银杏内酯同系物的混合物中分离银杏内酯B。该方法是以银杏内酯混合物为原料，采用分馏萃取法分离银杏内酯B。(4)中国专利(申请号200410061284.1) “银杏叶中银杏内酯B和白果内酯的提取方法”，该专利技术公开了一种银杏叶中银杏内酯B和白果内酯的提取方法。将银杏叶烘干、去杂、粉碎，用乙醇水溶液提取，上吸附柱去杂质，然后用乙酸乙酯萃取出银杏内酯，上氧化铝柱纯化，分步结晶及重结晶，获得较纯的银杏内酯B和白果内酯。(5)中国专利(申请号200610014207. X)“银杏内酯的制备方法”，该专利技术公开了一种银杏内酯的制备方法，按顺序包括如下步骤(1)取银杏叶粗提物，粉碎，加醋酸乙酯搅拌萃取，滤过，滤液回收醋酸乙酯至尽，干燥，得银杏内酯粗提物；(2)取银杏内酯粗提物，粉碎，用乙醇充分溶解，溶液上酸性氧化铝柱，收集流出液，再用乙醇洗脱，收集洗脱液，合并流出液和洗脱液，减压浓缩，结晶得银杏内酯晶体混合物；(3)将银杏内酯晶体混合物用少量乙醇洗涤，滤过，再重结晶，即得银杏内酯混合晶体。本专利技术方法的工艺路线合理，成品获得率高，不会破坏有效成分，可获得高纯度的银杏内酯A和银杏内酯B混合晶体。(6)中国专利(申请号200710106040.4) “一种从银杏叶或银杏叶提取物中提取银杏内酯B的制备方法”，该专利技术涉及从银杏叶或银杏叶提取物中提取银杏内酯B的制备方法，包括下列步骤一、原料的选择及处理(I)、银杏浸膏(总黄酮24%、总内酯6%，15-25婆美度)；(2)、银杏提取物(粉末总黄酮24%、总内酯6% )，用适量(1-2倍体积)纯净水溶解后，待用；(3)、新 鲜、干燥的银杏绿叶，烘干，温度控制在70°C，去杂、粉碎，过60目筛，用60%乙醇提取2次，每次60-90分钟，合并提取液，减压浓缩，回收乙醇；浓缩液加2倍的水，沉淀24小时，离心，取上清液上HP-20吸附柱，先用水冲洗，然后用80%乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩。二、高速逆流萃取1)将银杏浸膏或浓缩后的提取液导入萃取塔内，从塔底均匀加入乙酸乙酯进行对流溶剂萃取，乙酸乙酯用量一般为药液的1. 5 2. 5倍，循环次数为4 5次，不同塔体，分开收集；2)将萃取后的乙酸乙酯进行回收，得到稠膏，浓缩至20-25婆美度，65-70°C真空干燥、粉碎到90-100目，得到银杏内酯产品；三、柱层析、重结晶1)将得到的银杏内酯，用75-85%乙醇溶解后，通过80-120目的聚酰胺柱，收集流出液；2)将流出液再通过型号为HP-20的大孔树脂柱，然后，用去离子水清洗树脂至流出液体为无色，再用浓度为75-85%的乙醇溶液洗脱，当流出液颜色接近无色时，停止洗脱，收集洗脱液，浓缩至20-25婆美度的浸膏；3)将浸膏置于4°C以下环境冷藏，静置后，逐渐有晶体析出，3小时后，收集结晶，抽滤，再用75-85 %乙醇溶解结晶，重结晶，重结晶两次后，将白色沉淀真空烘干至恒重，得银杏内酯B产品，含量可达95 %以上。(7)中国专利(申请号200710050242.1) “从银杏叶中提取分离银杏内酯A、B、C、J及白果内酯单体的方法”，该专利技术将公开一种从银杏叶中提取分离银杏内酯A、B、C、J及白果内酯单体的方法，其步骤为1)取银杏叶，用由高到低不同浓度的乙醇进行提取，合并提取液，回收乙醇，得到浓缩后的提取液；2)向浓缩后的提取液中加入乙酸乙酯萃取，回收有机相后浓缩至浸膏；3)将浸膏稀释后上选择性极性无孔吸附树脂柱，用乙醇洗脱，所得洗脱液回收乙醇后，用乙醇结晶得银杏内酯类化合物；4)将银杏内酯类化合物结晶上硅胶柱，用正己烷和乙酸乙酯的混合液洗脱，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种从银杏叶提取物中分离纯化GA、GB和白果内酯的方法，其特征在于包括以下步骤：1）乙酸乙酯萃取：称取银杏叶提取物，加入银杏叶提取物5－10倍量的水20~50℃搅拌，然后加入银杏叶提取物5－10倍量的乙酸乙酯萃取3－5次，合并乙酸乙酯萃取液，乙酸乙酯萃取液浓缩、干燥，所得乙酸乙酯萃取物进行步骤2），其中倍量指重量/体积比，下同；2）低碳醇－水混合溶剂浸提：称取乙酸乙酯萃取物，加入乙酸乙酯萃取物10－20倍量的低碳醇－水混合溶剂20~50℃进行浸提，过滤，所得不溶物（Ⅱ）进行步骤3），所得醇浸提取液（Ⅰ）进行步骤4）；3）硅胶柱层析分离纯化：将不溶物（Ⅱ）上硅胶柱，用石油醚或正己烷或环己烷与乙酸乙酯的混合溶剂进行洗脱，分段收集洗脱液，回收洗脱液中的溶剂，分别得到GA和GB；4）白果内酯结晶纯化：将醇浸提取液（Ⅰ）浓缩至无醇、冷却、过滤后得到母液，将母液浓缩至干后用30~50%甲醇进行结晶3~5次得白果内酯。
【技术特征摘要】
1.一种从银杏叶提取物中分离纯化GA、GB和白果内酯的方法，其特征在于包括以下步骤1)乙酸乙酯萃取称取银杏叶提取物，加入银杏叶提取物5- 10倍量的水2(T50°C搅拌，然后加入银杏叶提取物5 - 10倍量的乙酸乙酯萃取3 - 5次，合并乙酸乙酯萃取液，乙酸乙酯萃取液浓缩、干燥，所得乙酸乙酯萃取物进行步骤2)，其中倍量指重量/体积比，下同；2)低碳醇一水混合溶剂浸提称取乙酸乙酯萃取物，加入乙酸乙酯萃取物10- 20倍量的低碳醇一水混合溶剂2(T50°C进行浸提，过滤，所得不溶物(II)进行步骤3)，所得醇浸提取液(I)进行步骤4);3)硅胶柱层析分离纯化将不溶物(II)上硅胶柱，用石油醚或正己烷或环己烷与乙酸乙酯的混合溶剂进行洗脱，分段收集洗脱液，回收洗脱液中的溶剂，分别得到GA和GB ；4)白果内酯结晶纯化将醇浸提取液(I)浓缩至无醇、冷却、过滤后得到母...
【专利技术属性】
技术研发人员：栾连军，刘雪松，谈满良，荆海英，吴永江，陈勇，王龙虎，
申请(专利权)人：苏州泽达兴邦医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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