一种从银杏叶中提取分离银杏内酯B的方法，本发明专利技术公开了一种从银杏叶提取分离银杏内酯B的方法，其工艺步骤如下：银杏叶用乙醇提取，提取液减压浓缩得浸膏。浸膏加水稀释后过大孔树脂柱吸附，乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩得稠膏，稠膏与稀释剂拌匀后烘干，将干膏装柱，用乙酸乙酯洗脱，乙酸乙酯洗脱液浓缩至无乙酸乙酯味，加入乙醇溶解，用乙醇结晶得到粗结晶，粗结晶用乙醇、乙酸乙酯重结晶即可得到纯度≥98%的银杏内酯B。本发明专利技术提供的方法工艺简单，生产成本较低，所得产品纯度高，收率较高，易于工业化生产。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种提取银杏内酯B的方法。
技术介绍
银杏内酯是目前强有力的特异性血小板活化因子(PAF)受体阻断剂之一，银杏内酯B是银杏内酯中对PAF受体阻断作用最强的，可剂量依赖性的消除PAF所引起的血小板聚集作用，从而防止血栓的形成。药理研究表明银杏内酯B具有抗过敏、抗炎症、抗休克作用，对缺血性损伤及器官移植排斥反应也有保护作用。银杏内酯B在目前市售的银杏叶提取物中含量较低且具有特定结构，其提取分离得到高纯度、高收率的银杏内酯B难度较大。本专利技术者们查阅国内外文献，目前与银杏内酯B单体分离/制备方法直接相关的授权专利技术或者专利主要有①ZL200310104958 (《模拟移动床色谱分离提纯银杏内酯B的方法》):该方法以银杏叶为原料，经过水煮得到银杏浸膏，每克银杏浸膏加入O. 8^1. 2L乙酸乙酯萃取，模拟移动床纯化、乙醇重结晶、甲醇重结晶得到纯度大于90%的银杏内酯B单体。该专利技术乙酸乙酯用量很大，基于移动床色谱分离银杏内酯B，成本较高。②ZL00117758. 3 (《由银杏叶或银杏叶浸膏制备药物银杏内酯A、B的方法》):该专利技术是向银杏叶或其浸膏加入乙醇等浸取剂，得到的浸取液经过滤、分层，取出有机相去杂，然后经浓缩、干燥得富集GA、GB，采用制备型高效液相色谱再分离A与B。该专利技术的特征在于加入浸取液的同时加入氯化物盐析剂及去杂过程加入加盐或钠盐，液相色谱的分离柱流动相为乙酸乙酯和石油醚混合液，固定相为硅胶。该专利技术的单体纯化依赖于制备色谱，不能工业化大量生产。③ZL200410061284 (《银杏叶中银杏内酯B和白果内酯的提取方法》):该专利技术将银杏叶用乙醇水溶液提取，上吸附柱去杂质，然后用乙酸乙酯萃取出银杏内酯，浓缩干燥后用乙醇溶解上酸性氧化铝柱，用乙醇洗脱，洗脱液分步结晶和重结晶，获得较纯的银杏内酯B和白果内酯。该专利技术银杏叶醇提取液采用液液萃取，用乙醇上柱，洗脱，洗脱液中杂质较多，导致最终银杏内酯B和白果内酯的纯度不是很高，收率低，时间长。④CN101701019A (申请号200910184916.6，《一种银杏内酯A、B的分离纯化方法》):该专利技术以纯度>95%的银杏总内酯为起始原料，采用重结晶-超临界CO2萃取组合工艺进行纯化，得到纯度> 99. 5%的单体GA和GB。该专利技术对起始原料要求较高，采用超临界CO2萃取对设备要求较高。⑤CN101412725A (申请号200710050245. 5，《从银杏叶中提取分离银杏内酯B的方法》)该专利技术以银杏叶为原料，乙醇提取，提取液减压浓缩，浓缩液中加入乙酸乙酯萃取，有机相减压浓缩至浸膏；浸膏稀释后上选择性极性无孔吸附树脂柱，用乙醇洗脱，，洗脱液浓缩后用乙醇结晶得到银杏内酯类化合物，将银杏内酯类化合物结晶上硅胶柱，用正己烷和乙酸乙酯混合液洗脱，洗脱液浓缩结晶得到银杏内酯B单体。该专利技术的正相柱的洗脱为混合溶剂，不容易回收。⑥CN101041661A (申请号200710051805. 9《一种用免疫亲和层析色谱柱提取银杏内酯B的方法》):该专利技术以银杏叶为原料，乙醇提取，提取液减压浓缩至粘稠物，将粘稠物上免疫亲和层析色谱柱，用磷酸缓冲液冲洗三次，然后用甲醇冲洗，即得银杏内酯B。但该方法适用于实验室少量样品制备，不能进行工业化生产。⑦CN101392000A (申请号200810046162. 3《银杏内酯A、B、C、J和白果内酯单体的高效分离纯化方法》)该专利技术以银杏叶为原料，乙醇提取，提取液用石油醚萃取，水相加入乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相减压浓缩后用甲醇溶解上制备高效液相，甲醇洗脱，分段收集洗脱液。减压浓缩至干得到单体。该专利技术依赖制备高效液相，适用于实验室少量样品制备，不能进行工业化生产。⑧CN101054384 (申请号200710106040. 4《一种从银杏叶或银杏叶提取物中提取银杏内酯B的制备方法》)该专利技术采用高速逆流萃取、聚酰胺和大孔树脂两次柱层析分离、重结晶相结合的方法，得到纯度>95%的银杏内酯B。该专利技术涉及两次不同的层析分离、会增加脱除产品中树脂残留物的难度。⑨CN101302222 (申请号200810024206. 2《一种银杏内酯B原料及其制备方法》)该专利技术取银杏叶或银杏叶提取物，在盐酸溶液中浸煮，浸煮液过滤后采用有机溶剂萃取，得到的萃取液浓缩后添加10(Γ200目硅胶混合干燥，采用硅胶柱层析法收集富含银杏内酯B的洗脱液，经结晶得到银杏内酯B原料。其中，银杏内酯B原料纯度> 90%。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决现有方法提取银杏内酯B工艺复杂、成本高、纯度低、收率低和难于工业化生产的问题，而提供一种从银杏叶中提取分离银杏内酯B的方法。本专利技术的一种从银杏叶中提取分离银杏内酯B的方法如下一、取银杏叶，加入1(Γ15倍质量的质量百分含量为50°/Γ95%的乙醇溶液，加热回流f3h，过滤，收集滤液，减压浓缩去除乙醇，即得浓缩液A ;二、向步骤一得到的浓缩液A中加水溶解至浓缩液A含生药量为O. Γ0. 3g/mL,再在室温放置24 48h，取上层液，备用；三、将步骤二所得上层液减压浓缩至含生药量为O. 5^1. 5g/mL，然后以O. 5^3BV/h速度过大孔树脂柱，先用水以O. 5^3BV/h的速度洗脱，再采用质量百分含量为509Γ95%乙醇溶液以O. 5^3BV/h的速度洗脱，收集2 8BV的洗脱液，洗脱液浓缩去除乙醇，即得浓缩液B ；四、将步骤三所得浓缩液B加稀释剂混合均匀，在50°C 80°C温度下干燥，装柱，采用乙酸乙酯以O. 5^3BV/h的速度洗脱，收集1 5BV的洗脱液，浓缩去除乙酸乙酯，得浓缩液C；五、向步骤四得到的浓缩液C中加入5 20倍体积的无水乙醇溶解，再加水至不再析晶，然后室温静置养晶12 48h，过滤，收集固相物，得银杏内酯B粗品；六、将步骤五所得银杏内酯B粗品，加入8^20倍体积的质量百分含量为709Γ95%的乙醇溶液加热回流使溶解,过滤,收集滤液,室温放置析晶12 48h ；七、重复步骤六f 2次，得重结晶样品；再用5(Γ90倍体积的乙酸乙酯回流溶解得到的重结晶样品，过滤，收集溶液，室温放置析晶12 48h，再过滤，收集结晶产物，向结晶产物中加入8 20倍体积的量百分含量为70°/Γ95%的乙醇溶液，加热回流使溶解，过滤，去除沉淀收集滤液，室温放置析晶12 48h，过滤，收集固相物得湿晶，在60°C 80°C温度下干燥后，即得成品银杏内酯B。结合现有银杏内酯B提取方法的分析，本专利技术包含以下有益效果I、本专利技术使用的大孔树脂为强极性树脂，包括ADS-2、NKA-9、SA-I、SA_2中的一种或几种混合。对于脂溶性成分(包括留体类、二萜、三萜香豆素等)的处理，现有方法均选择非极性或弱极性树脂，如D101、AB-8、HPD100, ADS-17等。而本专利技术的目标成分银杏内酯B属于二萜类的脂溶性成分，本专利技术采用了非常规技术手段——强极性树脂进行分离，本专利技术的方法提取的银杏内酯B收率高为98. 59Γ99. 5%，而经过现有方法采用的非极性或弱极性树脂的提取的银杏内酯B转移率仅为15°/Γ75%，且洗脱液中的杂质含量也较高，不利于后续的分离纯化工艺。采用本专利技术中的几种强极性树脂工艺简便本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种从银杏叶中提取分离银杏内酯B的方法，其特征在于从银杏叶中提取分离银杏内酯B的方法如下：一、取银杏叶，加入10~15倍质量的质量百分含量为50%~95%的乙醇溶液，加热回流1~3h，过滤，收集滤液，减压浓缩去除乙醇，即得浓缩液A；二、向步骤一得到的浓缩液A中加水溶解至浓缩液A含生药量为0.1~0.3g/mL，再在室温放置24~48h，取上层液，备用；三、将步骤二所得上层液减压浓缩至含生药量为0.5~1.5g/mL，然后以0.5~3BV/h速度过大孔树脂柱，先用水以0.5~3BV/h的速度洗脱，再采用质量百分含量为50%~95%乙醇溶液以0.5~3BV/h的速度洗脱，收集2~8BV的洗脱液，洗脱液浓缩去除乙醇，即得浓缩液B；四、将步骤三所得浓缩液B加稀释剂混合均匀，在50℃~80℃温度下干燥，装柱，采用乙酸乙酯以0.5~3BV/h的速度洗脱，收集1~5BV的洗脱液，浓缩去除乙酸乙酯，得浓缩液C；五、向步骤四得到的浓缩液C中加入5~20倍体积的无水乙醇溶解，再加水至不再析晶，然后室温静置养晶12~48h，过滤，收集固相物，得银杏内酯B粗品；六、将步骤五所得银杏内酯B粗品，加入8~20倍体积的质量百分含量为70%~95%的乙醇溶液加热回流使溶解，过滤，收集滤液，室温放置析晶12~48h；七、重复步骤六1~2次，得重结晶样品；再用50~90倍体积的乙酸乙酯回流溶解得到的重结晶样品，过滤，收集溶液，室温放置析晶12~48h，再过滤，收集结晶产物，向结晶产物中加入8~20倍体积的量百分含量为70%~95%的乙醇溶液，加热回流使溶解，过滤，去除沉淀收集滤液，室温放置析晶12~48h，过滤，收集固相物得湿晶，在60℃~80℃温度下干燥后，即得成品银杏内酯B。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：宁树一，魏凯，马仁强，周清，
申请(专利权)人：黑龙江天宏药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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